<i>Edwardsiella piscicida</i> lacking the cyclic AMP receptor protein (Crp) is avirulent and immunogenic in fish

Choe, Yunjeong,Park, Junmo,Yu, Jong Earn,Oh, Jeong-Il,Kim, Suhkmann,Kang, Ho Young Elsevier 2017 Fish & Shellfish Immunology Vol.68 No.-

<P><B>Abstract</B></P> <P> <I>Edwardsiella piscicida</I> is a Gram-negative pathogen that generally causes lethal septicemia in marine and freshwater fish. We generated a <I>E. piscicida</I> CK216 Δ<I>crp</I> mutant to investigate various biological roles related to this organism, including pathogenesis. Lack of Crp in CK216 was demonstrated by immunoblotting using a Crp-specific antibody. Compared to the parental strain, the mutant exhibited changes in three biochemical phenotypes, including ornithine decarboxylation, citrate utilization, and H<SUB>2</SUB>S production. Complementation of <I>crp</I> deletion in trans rescued the phenotype of the parental strain. This study proved that hemolytic activity in <I>E. piscicida</I> is controlled by Crp. In addition, significantly reduced motility of <I>E. piscicida</I> CK216 was observed, which resulted from a lack of flagella synthesis. To examine the virulence in fish, <I>E. piscicida</I> cells were injected into the goldfish (<I>Carassius auratus</I>) via intraperitoneal route. The LD<SUB>50</SUB> of CK216 was 9.25 × 10<SUP>8</SUP> CFU, while that of the CK108 parental strain was 9.24 × 10<SUP>5</SUP> CFU, attenuated 1000 fold in goldfish. Fish immunized with CK216 elicited IgM responses. Moreover, 80% of goldfish immunized with 1 × 10<SUP>6</SUP> CFU survived after administration of a lethal dose (1 × 10<SUP>7</SUP> CFU) of virulent <I>E. piscicida</I> CK41, suggesting the potential for <I>E. piscicida</I> CK216 to serve as a live attenuated vaccine in aquaculture.</P> <P><B>Highlights</B></P> <P> <UL> <LI> The Crp regulates multiple genes including virulence factors in <I>E. piscicida.</I> </LI> <LI> The <I>E. piscicida</I> Δ<I>crp</I> exhibited significant attenuation in fish. </LI> <LI> Administration of <I>E. piscicida</I> Δ<I>crp</I> induced <I>E. piscicida</I> specific immune response. </LI> <LI> Protection against virulent <I>E. piscicida</I> challenge was demonstrated. </LI> </UL> </P>

Salmonella Typhimurium SL1344 Utilizing Human Transferrin-bound Iron as an Iron Source Regardless of Siderophore-mediated Uptake

Yunjeong Choe(최윤정),Ah Young Yoo(유아영),Sam Woong Kim(김삼웅),Jihwan Hwang(황지환),Ho Young Kang(강호영) 한국생명과학회 2017 생명과학회지 Vol.27 No.1

S. Typhimurium SL1344는 성장을 위한 보조인자로 무기철이 요구된다. 철 킬레이트제인 ethylenediamine di-o-hydroxyphenylactic acid (EDDA)가 첨가 된 M9 최소배지에서 S. Typhimurium은 성장에 있어 철 이용이 완전하게 억제된다. 하지만, 세균이나 곰팡이와 같은 미생물들은 철이 부족한 환경에서 제한된 철을 이용하기 위해 사이드로포어를 생산한다. 사람에서 유래한 트랜스페린(hTf)-철 복합체를 M9 배지에 첨가한 조건에서 S. Typhimurium의 사이드로포어 생산은 완전하게 중단되었다. 반면, S. Typhimurium의 성장은 염화철(FeCl3)을 첨가한 조건과 동일한 수준으로 유지되었다. 이 결과는 사이드로포어의 생산 없이도 S. Typhimurium이 hTf에 부착된 철을 직접적으로 이용할 수 있다는 것을 알 수 있다. 돌연변이주의 구축과 이를 이용한 분석을 통하여 우리는 세균이 hTf-철 복합체를 직접적으로 이용할 수 있다는 것을 확인할 수 있었다. Inorganic iron is essential for various metabolic processes, including RNA synthesis, electron transport, and oxygen detoxification in microorganisms. Many bacterial pathogens compete for iron acquisition in diverse environmental condition such as host. Salmonella Typhimurium SL1344 also requires inorganic iron as a cofactor for growth. When a M9 minimal liquid medium was supplemented with ethylenediamine di-o-hydroxyphenylactic acid (EDDA) which acts as an iron-chelating agent, growth of Salmonella Typhimurium SL1344 in the supplemented medium was completely arrested by deficient of useful iron under iron-depleted condition. However, a number of siderophores, which are small, high-affinity iron chelating compounds secreted by microorganisms such as bacteria and fungi, were produced for utilization of restricted iron under iron-depleted condition. A M9 minimal liquid medium complemented with human transferrin (hTf)-iron complex turned completely off production of siderophores, but growth of Salmonella Typhimurium SL1344 maintained level similar to compare one complemented with iron (Ⅲ) chloride (FeCl3). This means that human transferrin (hTf)-bound iron can utilize via directly interaction with Salmonella Typhimurium SL1344 without productions of siderophores. Through construction and analysis of negative mutant for utilization of human transferrin (hTf)-bound iron, we confirm that the bacterium can directly use human transferrin (hTf)-bound iron without extracellularly intermediated carriers such as siderophores.

예비교사 Big five 시민성 조사 결과 분석

최윤정(Choe, Yunjeong),최효식(Choi, Hyosik),추병완(Chu, Beong Wan) 한국도덕윤리과교육학회 2021 도덕윤리과교육 Vol.- No.71

이 논문은 장차 학교 현장에서 시민교육을 담당하게 될 예비교사의 Big Five 시민성을 조사한 결과를 분석한 것이다. 연구진은 온라인 설문 조사 방법을 통해 전국 26개 대학교의 예비교사 1,082명을 대상으로 하여, 2021년 1월 15일부터 1월 22일까지 자료를 수집하였다. 이 논문은 예비교사의 시민성과 관련 변인 간의 상관성을 밝히기 위해 대학 생활 만족도, 그릿, 희망, 대학 입학 전형을 변인으로 설정하여 조사한 결과는 다음과 같다. 첫째, 예비교사의 시민성은 Big Five 시민성의 구성 요소에 따라 수준 차이가 있었으며, 구체적으로 디지털, 글로벌, 다문화, 생태, 민주 시민성 순으로 평균 점수가 높은 것으로 나타났다. 둘째, 배경 변인인성별, 대학 입학 전형 유형에 따라 Big Five 시민성 수준에 차이가 있는 것으로 드러났다. 셋째, Big Five 시민성은 희망, 그릿, 삶의 만족도에 정적인 영향을 미치는 것으로 확인되었다. 넷째, 성별, 대학 입학 전형 유형에 따라 Big Five 시민성이 희망, 그릿, 삶의 만족도에 영향을 미치는 정도에 차이가 없는 것으로 밝혀졌다. 이 논문에서 밝힌 Big Five 시민성 조사 결과는 교원 양성 과정에서 시민교육을 강화하는 것에 덧붙여 예비교사의 정신건강과 웰빙을 향상하는 다양한 교육 프로그램이 병행적으로 이루어질 때 시민교육의 성과가 더욱 제고될 수 있음을 보여준다. This article analyzes survey results on the Big Five citizenship among pre-service teachers who will be in charge of civic education at schools in the near future. The survey results as follows. First, the level of citizenship of pre-service teachers differed according to the components of Big Five citizenship, and specifically, the average score was high in order of digital, global, multicultural, ecological, and democratic citizenship. Second, the level of Big Five citizenship varies depending on the gender and the type of college admission. Third, Big Five citizenship has been identified as having a positive effect on hope, grit, and college life satisfaction. Fourth, depending on the gender and type of college admission, there is no difference in the degree to which Big Five citizenship affects hope, grit, and college life satisfaction. In addition to strengthening civic education in the process of training and nurturing pre-service teachers, the results of the Big Five Citizenship Survey revealed that the performance of civic education can be further enhanced when various educational programs to improve mental health and well-being of pre-service teachers are conducted in parallel.

과수 신기술 시범사업 미도입 요인분석

박계원(Kyewon Park),방윤정(Yunjeong Bang),최성희(Seonghui Choe),조성연(Seongyeon Jo),민병익(Byungik Min) 한국원예학회 2018 한국원예학회 학술발표요지 Vol.2018 No.10

Characterization of the fecal microbiota differs between age groups in Koreans

( Sun-young Kook ),( Yunjeong Kim ),( Ben Kang ),( Yon Ho Choe ),( Young-ho Kim ),( Seokjin Kim ) 대한장연구학회 2018 Intestinal Research Vol.16 No.2

Background/Aims: Tens of trillions of microorganisms constitute the gut microbiota of the human body. The microbiota plays a critical role in maintaining host immunity and metabolism. Analyses of the gut microbial composition in Korea are limited to a few studies consisting of small sample sizes. To investigate the gut microbial community in a large sample of healthy Koreans, we analyzed the 16S ribosomal RNA of 4 representative bacterial genera Lactobacillus, Bifidobacterium, Bacteroides, and Clostridium. Methods: A total of 378 DNA samples extracted from 164 infants and 214 adults were analyzed using quantitative real-time polymerase chain reaction. Results: Analysis of 16S ribosomal RNA of 4 representative bacterial genera Lactobacillus, Bifidobacterium, Bacteroides, and Clostridium showed that the gut microbiota in infants had higher relative abundances of Bifidobacterium and Lactobacillus than that in adults, which was dominated by Bacteroides and Clostridium. Conclusions: To the best of our knowledge, this was the first study evaluating the distinct characteristics of the microbial community of Korean infants and adults. The differences between the 2 populations suggest that external factors such as age, diet, and the environment are important contributing factors to the change in gut microbial composition during development. (Intest Res 2018;16:246-254)

조직 괴사 활성을 지닌 Aeromonas hydrophila 의 분비 단백질에 관한 연구

김규리(Kyu Lee Kim),최윤정(Yunjeong Choe),강호영(Ho Young Kang) 한국생명과학회 2015 생명과학회지 Vol.25 No.2

Aeromonas hydrophila는 수생계에 흔히 존재하는 병원체로서 출혈성 패혈증, 수종, 궤양 등의 질병을 유발한다. A. hydrophila는 효과적인 감염과 다양한 환경에서 적응하기 위해 세포 외 물질(Extracellular products, ECPs)을 분비한다. 본 연구에서 사용한 A. hydrophila CK257은 매우 독성이 강한 균주로 균이 분비하는 ECP 역시 쥐, 토끼, 금붕어를 포함한 동물 모델에게 조직 손상을 일으키며 독성을 보였다. 이러한 괴사 반응을 일으키는 원인 요소를 찾기 위해 ECP의 특성을 분석하였고 그 결과, 원인 요소가 단백질이라는 것을 확인하여 이후 단백질 분리 및 정제에 초점을 맞추어 실험을 진행하였다. 균체를 제거한 배양액 상의 분비 단백질을 얻기 위하여 ammonium sulfate 침전법을 사용하였고, 이후 겔 거르기 크로마토그래피(Gel filtration chromatography)를 이용하여 단백질을 정제하였다. 정제 후 단백질은 다섯 개의 분획으로 나뉘었고 이 중 한 개의 분획이 동물 모델에 괴사와 같은 피부손상을 일으키는 것을 확인하였다. 괴사 활성을 가진 분획의 단백질 4개의 밴드를 MALDI-TOF 시스템을 통해 분석한 결과, Peptidase M35와 Peptidase M28로 밝혀졌으며 이들은 각각 금속촉매효소(metalloprotease)임을 확인할 수 있었다. Peptidase M35와 Peptidase M28의 단백질 분해 효소로써의 기능을 확인하기 위해 카제인 분해 활성을 확인하였고, 다양한 금속 이온을 처리함에 따라 그 활성이 달라지는 것을 관찰할 수 있었다. 또한 조직에 존재하는 단백질의 한 종류인 엘라스틴(elastin) 분해능 역시 확인해 보았다. 본 연구에서는 A. hydrophila가 분비하는 물질 가운데 조직 괴사 활성을 일으키는 것으로 추정되는 Peptidase M35와 Peptidase M28의 두 가지 인자를 확인하여 동정하였다. 이후 두 가지 인자를 결손 시킨 돌연변이주를 구축하여 조직 괴사에 이들이 직접적으로 작용하는지 확인 할 예정이다. Aeromonas hydrophila is the most common water fish pathogen and cause diseases such as hemorrhagic septicemia, dropsy, ulceration and asymptomatic septicemia. A. hydrophila secretes many extracellular products (ECPs) which contribute to effective infection, wide distribution and great adaptability to environmental changes. Crude ECPs of A. hydrophila CK257, a strain used in this study, exhibits a toxic activity to the animals including mouse, rabbit and fish. Toxic symptoms were indicated by tissue damage and skin injuries in animal. When ECPs were subcutaneously injected to animals, skin damages were observed, appearing like necrosis. Preliminary research demonstrated that the active factors are protein component. The crude ECPs were collected after ammonium sulfate precipitation of cell-free culture supernatant. ECPs were fractionated with the use gel filtration chromatography. Five ECP fractions were obtained, of which one fraction was found to be toxic to goldfish. MALDI-TOF analyses provided two interesting proteases called M35 and M28. Both M35 and M28 are known as metalloprotease. Accordingly, proteins in an active fraction exhibited caseinolytic activity. These proteins were difference of caseinolytic activity under different metallic ions. Also active fraction has elastolytic activity. These results suggested that peptidase M28 and M35 may be a candidate factor for tissue necrosis activity about infection with A. hydrophila.

Profile of animal health monitoring system of DGMIF laboratory animal center

Eui-Suk Jeong,Chungsu Kim,Minji Seong,Yunjeong Choe,Min-Soo Seo,Taekwan Lee,Dae-Yong Han,Woo Suk Koh,Kil-Soo Kim 한국실험동물학회 2020 한국실험동물학회 학술발표대회 논문집 Vol.2020 No.2

Tuning the optical and electrical properties of MoS₂ by selective Ag photo-reduction

Kim, Eunpa,Lee, Yoonkyung,Ko, Changhyun,Park, Yunjeong,Yeo, Junyeob,Chen, Yabin,Choe, Hwan Sung,Allen, Frances I.,Rho, Junsuk,Tongay, Sefaattin,Wu, Junqiao,Kim, Kyunghoon,Grigoropoulos, Costas P. American Institute of Physics 2018 APPLIED PHYSICS LETTERS Vol.113 No.1

OmpR Is Essential for Growth and Expression of Virulence-related Genes in the Fish Pathogen Edwardsiella piscicida

Durga Ray(듀르가 레이),Yeon Ha Kim(김연하),Yunjeong Choe(최윤정),Ho Young Kang(강호영) 한국생명과학회 2021 생명과학회지 Vol.31 No.1

Edwardsiella piscicida는 어류의 출혈성 패혈증 및 사람의 위장 감염의 중요한 원인균이다. 세균이 생존을 하기 위해서는 환경변화에 적응하기 위한 특수한 메커니즘이 필요하다. 따라서 E. piscicida가 삼투압 변화 환경을 감지하고 이에 반응하는 메커니즘을 이해하기 위하여 본 연구에서는 다양한 염도 조건에서 단백질 발현 형태와 세균의 생리적 특성을 분석하였다. EnvZ–OmpR의 two-component 조절 시스템의 일부인 OmpR 단백질은 세균의 염분 스트레스 감지와 관련이 있다. 이 단백질이 E. piscicida에서 어떤 생리적 역할을 하는지는 밝혀지지 않고 있다. 이 연구에서는 염분 스트레스에 대한 OmpR 단백질의 기능을 조사 하였다. OmpR을 발현하지 못하는 돌연변이체를 분석한 결과 구연산염 이용, H2S 생성 및 인돌 생산의 능력이 야생형과 비교했을 때 차이가 나는 것으로 확인되었다. 전체 ompR 유전자를 가지는 플라스미드를 돌연변이 균주에 도입하여 분석한 결과 위의 세가지 표현형은 야생형과 같아졌다. 지연된 성장률도 부분적으로 회복되었음을 볼 수 있었다. 이 연구에서 OmpR이 세포운동성과의 관련성을 찾아볼 수 없었다. 이 연구의 결과들을 종합하면, 돌연변이 분석, 성장 분석, MALDI-TOF MS, qRT-PCR 및 표현형 연구 결과는 E. piscicida의 OmpR이 삼투압 조절, 생육, 포린 발현, 독성 관련 유전자(eseC, eseD 및 evpC) (ETAE_1826) 및 기능을 알 수 없는 특정 유전자(ETAE_1540 및 ETAE_2706)와 관련이 있다고 사료된다. Edwardsiella piscicida is a significant cause of hemorrhagic septicemia in fish and gastrointestinal infections in humans. Survival bacteria require specialized mechanisms to adapt to environmental fluctuations. Hence, to understand the mechanism through which E. piscicida senses and responds to environmental osmolarity changes, we determined the protein expression profile and physiological properties under various salinity conditions in this study. The OmpR protein is a part of the EnvZ-OmpR two-component system that has been implicated in sensing salt stress in bacteria. However, the physiological role played by this protein in E. piscicida remains to be elucidated. Therefore, in this work, the function of the OmpR protein in response to salt stress was investigated. Phenotypic analysis revealed that, in the mutant, three of the biochemical phenotypes were different from the wild type, including, citrate utilization, hydrogen sulfide, and indole production. Introduction of the plasmid containing the entire ompR gene to the mutant strain returned it to its parental phenotype. The retarded growth rate also partially recovered. Furthermore, in our studies, OmpR was not found to be related to cell motility. Taken together, our results from the mutational analysis, the growth assay, MALDI-TOF MS, qRT-PCR, and the phenotype studies suggest that the OmpR of E. piscicida is implicated in osmoregulation, growth, expression of porins (ETAE_1826), virulence-related genes (EseC, EseD and EvpC), and certain genes of unknown function (ETAE_1540 and ETAE_2706).

Guidance of animal health monitoring system of DGMIF Laboratory Animal Center

Eui-Suk Jeong,Chung Su Kim,Do-Young Kim,Yunjeong Choe,Min-Soo Seo,Taekwan Lee,Dae-Yong Han,Woo Suk Koh,Kil-Soo Kim 한국실험동물학회 2019 한국실험동물학회 학술발표대회 논문집 Vol.2019 No.1