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β-galactosidase를 생성하는 고온성(高溫性) 세균(細菌)의 생리적(生理的) 특성(特性)에 관한 연구(硏究)
이종수,김찬조,Lee, Jong Soo,Kim, Chan Jo 충남대학교 농업과학연구소 1982 Korean Journal of Agricultural Science Vol.9 No.1
고온균(高溫菌)의 생리적(生理的) 특성(特性)과 내열기구(耐熱機構)에 관한 기초자료(基礎資料)를 얻고자 온천토양(溫泉土壤)에서 ${\beta}$-galactosidase를 생산(生産)하는 고온균(高溫菌)을 분리(分離)하여 동정(同定)하고, 몇가지 주요(主要)한 생리적(生理的) 특성(特性)을 검토(檢討)하였으며, 그의 균체지방산(菌體脂肪酸) 조성(組成)을 gas chromatography로 분석(分析)하여 다음과 같은 결과(結果)를 얻었다. 1. ${\beta}$-galactosidase를 생산(生産)하는 공시(供試) 균주(菌株)는 Thermus속(屬)으로 동정(同定)되었다. 2. 분리선정(分離選定)한 균주(菌株)의 최적(最適) 생육온도(生育溫度)는 $65^{\circ}C$이었고, $37^{\circ}C$에서 생육(生育)하지 않는 절대(絶對) 고온균(高溫菌)이었으며 최적(最適) pH는 6.5내외(內外)이었다. 3. NaCl에 대(對)한 내성(耐性)은 NaCl 1% 이상(以上)에서 생육(生育)하지 못했다. 4. 공시균주(供試菌株)의 항생물질(抗生物質) 내성(耐性)은 Penicillin G는 $10{\mu}g/m{\ell}$, Chloramphenicol은 $0.5{\mu}g/m{\ell}$이었다. 5. Vitamin 요구성(要求性)은 Ca-pantothenate와 pyridoxine-HCl을 절대적(絶對的) 생육인자(生育因子)로 요구(要求)하였고 niacin을 자극적(刺戟的) 생육인자(生育因子)로 요구(要求)하였다. 6. 공시균주(供試菌株)는 최대(最大) 흡수파장(吸收波長)이 420nm 부근(附近)의 색소(色素)를 생성(生成)하였고 그의 생성능(生成能)은 약(弱)하였다. 7. 공시균주(供試菌株)의 균체 지방산(脂肪酸) 조성(組成)은 palmitic acid 60.20%, lauric acid 11.80%, myristic acid 7.56%, behenic acid 4.25%, capric acid 1.77%, stearic acid 2.13%, arachidic acid 1.53%이었다. This experiment was carried out to elucidate the thermotolerant properties of a thermophilic bacterium which was isolated from soils of the hot springs area and selected for the ${\beta}$-galactosidase production. This bacterium was identified as a strain belong to the genus Thermus. Biochemical and physiological characteristics of this strain were studied, including the investigation of the fatty acid composition of its neutral fats. The results obtained were summarized as follows. 1. Optimal temperature and pH for growth of this strain were $65^{\circ}C$ and pH 6.5 respectively, and it was found to be an absolute thermophilic bacterium which could not grow at the temperature below $43^{\circ}C$. 2. No growth was obtained in the medium which contained more than 1.0% of sodium chloride. 3. The tolerable concentration of antibiotics were 10mg of penicillin G per ml of medium and 0.5mg of chloramphenicol per ml respectively. 4. This strain had auxotrophilic requirements for calcium-pantothenate and pyridoxin-HCl as an essential factor and for niacin as a stimulative factor. 5. Yellow pigment was released into the liquid culture of this strain, which showed maximum absorption at 420 nm. 6. Fatty acid composition of neutral fats of the strain was palmitic acid, 60.20%; lauric acid, 11.80%; myristic acid, 7.56%; behenic acid, 4.25%; capric acid, 1.77%; stearic acid, 2.13%; arachidic acid, 1.53%; and others unidentified, 10.7%.
Staphylococcus aureus Phage Type 29에 대한 오골계 난백 Lysozyme의 용균성
오홍록,이종수,김찬조,Oh, Hong Rock,Lee, Jong Soo,Kim, Chan Jo 충남대학교 농업과학연구소 1987 Korean Journal of Agricultural Science Vol.14 No.2
오골계 난백 lysozyme의 용균특성을 조사하고, 이를 식품보존료로 이용하기 위한 자료를 얻고자 오골계 난백으로부터 추출 분리한 lysozyme의 각종 미생물에 대한 용균성을 조사하였다. 그 결과, 공시균중 Gram 양성균인 Staphylococcus aureus phage type 29와 Bacillus subtilis ATCC 6633에 대하여는 용균성이 인정되었으나, Gram 음성균인 E. coli를 비롯한 여타의 균종과 Staphylococcus aureus phage type 57은 lysozyme에 대한 용균 감수성이 인정되지 않았다. 분리된 lysozyme은 S. aureus phage type 29를 공시균주로 하여 이를 육즙배지에 접종하고, $37^{\circ}C$에서 24시간 정치배양하여 세포를 회수한 후 540nm에서 흡광도가 0.6이 되도록 0.05M 초산완충액(pH 4.5)에 현탁시켜, 여기에 0.05%의 lysozyme을 가하여 $30^{\circ}C$, 30분간의 조건으로 반응시킬 때 용균성이 가장 좋았다. 또한 0.05%의 lysozyme은 반응액 중에 glycine(1%)을 첨가하므로서 공시균에 대한 용균효과가 양자의 상승작용에 의하여 그 단용시보다 현저히 증대(<50%) 되었으나, 기타 다른 첨가제와 금속이온 및 lysozyme과의 혼용효과는 인정되지 않았다. This experiment was carried out to investigate the bacteriolytic action of the egg white lysozyme isolated from Korean native Ogol fowl and to obtain the data for utilization of the enzyme as a food preservative. Staphyococcus aureus phage type 29 and Bacillus subtilis ATCC 6633 among the microorganisms tested were lyzed by the treatment with 0.05% lysozyme, but Staphylococcus aureus phage type 57 in addition to E. coli etc. was found to be a lysozyme- insensitive species. The lysis of S. aureus phage type 29 was maximized when incubated in nutrient broth (pH 7.0) at $37^{\circ}C$ for 24 hours and suspended it to absorbance 0.6 at 540nm in 0.05M sodium acetate but fer (pH 4.5) and then treated it with the 0.05% lysozyme for 30 min. at $30^{\circ}C$. It was found that the effect of 0.05% lysozyme in combination with 1% glycine on the growth inhibition of S. aurecus phage type 29 increased more 50% than that in the absence of glycine, but not effect with other any additeves and metal ions tested.
미생물에 의한 난분해성 유기염소계 오염물질의 분해 -각종 PCBs 및 유기염소계 농약의 분해와 분해산물-
김찬조,오만진,이종수,Kim, Chan-Jo,Oh, Man-Jin,Lee, Jong-Soo 한국응용생명화학회 1987 한국농화학회지 Vol.30 No.1
Alcaligenes aquamarinus에 의한 각종 PCBs와 유기염소계 농약 및 토양중의 PBC-42 분해 등을 검토하고 TLC 등으로 분해산물을 검정한 결과 PCBs에서는 염소화도가 낮은 PCBs가 더 쉽게 분해되었고 유기염소계 농약에서는 p,p'-DDT>r-BHC>Thiolix 순으로 분해되었다. 토양중의 PCB-42의 분해는 살균하지 않은 토양시료에서 $25^{\circ}C$, 25일 배양으로 약 40%가 분해되었다. PCB-42의 분해로 생성된 황색물질의 최대 흡수파장은 pH 4.5에서 258nm와 295nm이었고 분해산물의 일종인 p-chlorobenzoic acid가 TLC와 GC에 의하여 확인되었다. Degradation of polychlorinated biphenyls(PCBs) and organochlorine pesticides by Alcaligenes aquamarinus has been studied and also degradation product of PCB-42 was investigated by TLC and GC. The less chlorinated members of PCBs such as Aroclor 1016 was degraded readily by the strain and rates of the microbial degradation of several organochlorine pesticides were found to decrease in the order of p,p'-DDT, r-BHC and Thiolix. Approximately 40 percent of PCB-42 was degraded when incubated with non-autoclaved soil for 25 days at $25^{\circ}C$. The yellow compound from PCB-42 was tentatively identified as p-chlorobenzoic acid.
Mucor sp. 에 의한 응유효소생산(凝乳酵素生産)과 그의 성질(性質)에 관하여
염동길,김찬조,이종수,Yeum, Dong Kil,Kim, Chan Jo,Lee, Jong Soo 충남대학교 농업과학연구소 1987 Korean Journal of Agricultural Science Vol.14 No.1
A potent fungus producing milk clotting enzyme with fairly weak proteolytic activity was isolated from various soil and sewage, which the selected strain, SA-101, was identified as Mucor sp. with microbiological characteristics. Its milk clotting enzyme production was maximized when grown on 10g of wheat bran media added to 8ml of tap water containing 0.1M HCl for 60hrs at $30^{\circ}C$. This enzyme production was stimulated by addition of 6% lactose, 0.05% NaCl and reached a maximal level of 9810 unit/g wheat bran. The crude enzyme product could be produced effectively by salting out with ammonium sulfate fractionation and lyophilization. The ratio of milk clotting activity to proteolytic activity of crude enzyme product was lower than Hansen rennet, but resembled to Meito rennet. The optimal temperature of milk clotting activity of crude enzyme product was abound $60^{\circ}C$ on a substrate of 10% reconstituted skim milk containing 1/100M $CaCl_2$. 토양(土壤) 및 하수(下水)에서 단백분해활성(蛋白分解活性)이 약하고 응유활성(凝乳活性)이 강한 SA-101 균주(菌株)를 분리(分離), 선정(選定)하여 Mucor sp. 동정(同定)하였다. 사용균주(使用菌株)에 의한 응유효소생산(凝乳酵素生産)은 밀기울 10 g에 0.1M HCl 을 함유한 수도수 8 ml를 가하여 $30^{\circ}C$에서 60시간의 배양(培養)이 가장 좋았다. Lactose 6%, NaCl 0.05%를 첨가(添加)하였을때 효소생산(酵素生産)이 촉진(促進)되었고 밀기울 g당(當) 9,810 단위(單位)의 효소생산(酵素生産)을 보였다. 유안염석(硫安鹽析)과 동결건조(凍結乾燥)등으로 조제한 조효소제품(粗酵素製品)의 MCA/PA비(比)는 Hansen rennet 보다 낮았으나 Meito rennet과 유사하였고 응유활성(凝乳活性)의 최적온도(最適溫度)는 1/100M $CaC1_2$를 함유한 10% 환원탈지유(還元脫脂乳)를 기질로 하였을 때 $60^{\circ}C$ 부근이었다.