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고추의 조직을 이용한 생장조절제 처리가 식물체 재분화 효율에 미치는 영향
이문중,권태룡,신동현,한증술,김경민,김창길,오중열,Lee, Moon-Jung,Kwon, Tae-Roung,Shin, Dong-Hyun,Harn, Jung-Sul,Kim, Kyung-Min,Kim, Chang-Kil,Oh, Jung-Youl 한국생명과학회 2006 생명과학회지 Vol.16 No.5
The study was carried out to develop efficiency of transformantion in pepper plants. We used cotyledons of two native varieties, 'Subicho' and 'Kumtap' to establish some conditions of plant regeneration. Differentiation rate of shoot was higher in 2 to 4 mg/l zeatin and 0.05 mg/l NAA than in other treatments. Meanwhile, differential rate of roots was the highest in 0.5 mg/l NAA. 재래종 고추인 '수비초'와 ‘금탑’의 자엽을 이용한 식물체재분화 조건을 구명하기 위해 시험한 결과, shoot 분화율은 $2{\sim}4\;mg/l$ zeatin 에서 0.05 mg/l NAA 혼용에서 분화율이 높았고, 뿌리 분화율은 0.5 mg/l NAA 에서 높았다.
고추의 역병 저항성 품종 개발을 위하여 Agrobacterium tumefaciens를 이용한 elicitin 유전자 도입
권태룡,이문중,한증술,신동현,오중열,김경민,김창길,Kwon, Tae-Ryong,Lee, Moon-Jung,Han, Jung-Sul,Shin, Dong-Hyun,Oh, Jung-Youl,Kim, Kyung-Min,Kim, Chang-Kil 한국식물생명공학회 2007 식물생명공학회지 Vol.34 No.1
고추 형질전환은 Agrobacterium (LBA4404/pBI101 cyc600-syna-elicitin)을 이용한 cyc600 promoter에 구축된 elicitin 유전자의 형질전환시 shoot의 형성율은 수비초의 경우 3 mg/L zeatin과 0.05 mg/L NAA 함유 배지에서 11.1%, 4 mg/L zeatin과 0.05 mg/L NAA 함유 배지에서 12.8%였다. 전배양 3일, 공동배양 $3{\sim}4$일에서 재분화율이 높았다. 자엽으로부터 재분화된 형질전환체의 NPTII 유전자의 primer를 이용한 PCR 반응에서 형질전환된 재분화 식물체는 536 bp의 밴드를 확인하였다. Membrane에 blot하여 NPTII gene을 probe로 사용하여 Southern blot 분석에서 고추형질전환 식물체는 536 bp 부위에 강한 signal을 보였다. elicitin 유전자를 이용한 역병 저항성 형질전환체 수비초 $T_{0}$세대의 생육은 계통간에 다소 차이는 보였고, 계통 모두 생육은 저조한 반면 개화 및 수정 등의 임성은 정상적이었다. 자식을 통해 채종한 $T_{1}$ 식물체의 유전자 도입을 확인하기 위하여 PCR을 수행한 결과 $T_{0}$ 식물체 $S1{\sim}S5$ 계통에서 elicitin 밴드가 나타나 형질전환체임을 확인하였고, $T_{1}$식물체인 S1-1 등 7계통에서 elicitin 밴드가 나타났고, S1-2 등 4계통에서는 밴드가 나타나지 않아 형질전환체가 후대에서 분리가 일어남을 확인할 수 있었다. Syn ${\alpha}$ clone을 이용하여 Southern blot analysis를 한 결과 band가 나타난 300 bp 정도의 위치에서 blot이 나오는 것을 관찰할 수 있었다. 위의 결과에서 cyc600 promoter-syn ${\alpha}$의 construct가 수비초의 genomic DNA에 삽입되었는 것을 확인할 수 있었다. 고추형질전환체의 유묘에 역병균을 접종한 결과 유주포자 $10^{3}$개/mL에서 형질전환체의 저항성 계통선발이 가능하였다. The study was carried out to develop transformants resisting to Phyophthora blight disease in the domestic pepper cultivar Subicho. In transforming of syn600 promoter with elicitin gene using Agrobacterium (LBA4404/pBI101 syn600-syn${\alpha}$-elicitin) to cotyledons of pepper, rate of shoot formation in 'Subicho' was 11.1% in medium containing 3 mg/L zeatin and 0.05 mg/L NAA, and also 12.8% in medium containing combination of 4 mg/L zeatin and 0.05 mg/L MAA. For PCR reaction using elicitin gene primer of transformants regenerated from cotyledons, we detected a specific band of 536 bp, and also showed strong signal at position of 536 bp in accordance with NPTII gene used as probe in Southern blot. Transformants pepper shown resistance to blight fungus was inoculated to seedlings of the $T_{1}\;and\;T_{2}$ transformants by concentration (density: zoo spore $10^{3}/mL$).