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소인섭,오성국 濟州大學校 放射能利用硏究所 1990 연구보고 Vol.5 No.-
양파(Allium cepa) 細胞에서 分離한 原形質體의 vitality를 cytoplasmic streaming과 urea permeability로 測定하고 FDA法에 의해 viability를 測定한 結果와 比較했다. 한편, 大豆(Glycine max)葉에서 原形質體의 活性을 增進시키기 위해서 vibratome을 利用하여 single cell 分離條件을 確立하고 이로부터 分離한 原形質體의 vitality에 關해 檢討했다. 1. 양파에서 2% cellulase와 1% macerozyme을 處理했을 때 가장 좋은 原形質體 收率(7×10⁴protoplasts/g.fresh weight)을 얻었는데 生存率은 酵素 濃度가 增加할수록 減少했다. 2. Cellulase를 濃度別(1%, 2%, 3%, 4%)로 處理한 細胞의 cytoplasmic streaming速度는 對照區에서 6.5㎛/sec(100%)로 3時間 동안 변하지 않았고 1% cellulase에서는 vitality가 76.9% 그리고 4% cellulase에서는 43.1%로 그 差異가 33.8%(76.9∼43.1)이었는데 이 값은 FDA로 測定해서 얻은 6.8%보다 差異가 더 크기 때문에 細密한 vitality를 測定할 수 있다고 생각된다. 2% cellulase만을 處理(70%)했을 때 보다 BSA 또는 DTT를 함께 處理했을 때 vitality는 각각 89.2%, 93.8%로 增加했고, 한편 NaN₃나 KCN을 處理하면 37.9%, 31.8%로 減少했다. 3. Cellulase 濃度別(1%, 2%, 3%, 4%)로 處理해서 얻은 原形質體의 urea permeability를 測定한 結果 酵素濃度가 增加할수록 urea permeability가 增加했다. BSA 또는 DTT를 處理 했을 때 對照區에 比해서 urea permeability가 減少했다. 以上의 結果로 보아 cellulase 處理에 의한 膜損像은 urea permeability의 수동적 흡수를 증가시키는 것으로 생각된다. To investigate vitality of protoplasts isolated from onion (Allium cepa) bulb cells, cytoplasmic streaming, urea premeability and FDA staining method were compared. Also, whether single cells made by vibratome can produce more vitable protoplasts of soybean was examined with different levels of pectolyase and incubation times. 1. Protoplast yield was highest (7.4×10⁴protoplasts/g.fresh weight) at 2% cellulase and 1% macerozyme. And their viability decreased as cellulase concentrations increased. 2. The cytoplasmic streaming rate was 6.2 ㎛/sec in the control cell and did not change for 3 hrs. Provided that the vitality of control is 100%, vitality at 1% or 2% cellulase treatment was 76.9% or 43.1%, and at BSA, DTT, NaN₃, or KCN was 82.9%, 93.8%, 37.9% or 31.8% respectively. 3. Urea permeability (Ks) at 1% cellulase or 4% cellulase treatment was 5.0×10?? or 1.9×10?? ㎝/sec, and urea permeability increased as cellulase concentrations increased. When BSA or DTT was treated, urea permeability was 4.8×10?? or 1.7×10?? ㎝/sec, respectively.