Effects of Osmolality and $Ca^{2+}$ on Sperm Motility in Marbled Sole, Limanda yokohamae

고강희,장영진,임한규,KHO Kang Hee,CHANG Young Jin,LIM Han Kyu The Korean Society of Fisheries and Aquatic Scienc 1997 한국수산과학회지 Vol.30 No.5

문치가자미의 성숙한 수컷 15마리를 재료로 하여 삼투질농도와 $Ca^{2+}$이 정자의 운동성에 미치는 영향을 파악하였다. 문치가자미 정자는 전해질 및 비전해질 용액에서 정장의 삼투질농도인 $351{\pm}23.4mOsm/kg$ 이하의 저장액에서 운동이 억제되었으나, 삼투질농도 $466\~l,185mOsm/kg$에서는 활발한 운동을 보였으며, 1,698 mOsm/kg 이상에서 다시 운동이 중지되었다. 인공해수를 희석액으로 하여 pH를 달리하였을 때, 정자는 $pH\;5\~9$에서 운동지수 $3.75\~4.00$로 운동성이 활발하였으나, pH 4에서는 운동지수 2.50로 미약하였다. $Ca^{2+}$의 특이 chelator인 EGTA가 포함된 $Ca^{2+}$ 결여 인공해수 (tris-HCl, pH 7.4)에 정액을 희석하였을 때, EGTA의 농도 증가에 따라 정자 운동성이 낮아졌으며, 3mM 이상의 농도에서는 완전히 정지되었다. 운동이 억제된 정자에 $Ca^{2+}$을 서서히 첨가한 결과, $Ca^{2+}$ 농도 0.25mM 이상부터 운동이 재개되었다. 또한 인공해수속의 정자는 calmodulin 억제제인 TFP의 농도의 증가에 따라 운동성이 감소하여 0.5mM에서 완전히 정지하였다. A series of experiments were conducted to study effects of osmolality and $Ca^{2+}$ on sperm motility in marbled sole, Limanda yokohamae. Spermatozoa were immotile when the milt was mixed with solutions (electrolyte or non-electrolyte) of lower osmolality than the average seminal plasma osmolality (351 mOsm/kg), but became motile after mixing milt with an hyperosmotic solution. However, with the osmolality above 1,639 mOsm/kg spermatozoa ceased their movement. When the milt was suspended in the $Ca^{2+}$ free artificial seawater (ASW) containing ethylenglycoltriamine (EGTA), the percentage of motile spermatozoa decreased in proportion to the increase of EGTA. Most spermatozoa were quiescent in a medium containing 3 mM EGTA. The motility of spermatozoa prevented by 3 mM EGTA was recovered by the subsequent addition of $Ca^{2+}$ over the concentration of 0.25 mM. Effects of calmodulin antagonist, trifluoperazin (TFP) on spermatozoa were examined to elucidate the possible functions of calmodulin in sperm motility. TFP immobilized spermatozoa 5n ASW at the concentration of 0.5 M. These findings suggest that calcium is an effective external factor in the initiation process of sperm motility.

브라운송어 (Salmo trutta) 정자의 냉장보존 및 인공수정액 개발을 위한 생리학적인 검토

고강희 ( Kang Hee Kho ) 한국어류학회 2004 韓國魚類學會誌 Vol.16 No.3

피라미, Common minnow, Zacco platypus의 혈중 칼슘 항상성에 미치는 비스페놀 A의 영향

고강희 ( Kang Hee Kho ) 한국어류학회 2004 韓國魚類學會誌 Vol.16 No.4

Effects of Cryoprotectants and Freezing Rates on Cryopreservation of Catfish, Silurus asotus Sperm

고강희(Kang Hee Kho),강경호(Kyoung Ho Kang) 한국수산과학회 양식분과 2004 韓國養殖學會誌 Vol.17 No.1

단보 : 졸복, Takifugu pardalis 정액의 성상과 정자 운동성

고강희 ( Kang Hee Kho ) 한국어류학회 2007 韓國魚類學會誌 Vol.19 No.2

희석액별 감성돔, Acanthopagrus schlegeli 정자의 단기보존 효과

임한규,고강희,장영진,LIM Han Kyu,KHO Kang Hee,CHANG Young Jin 한국수산과학회 1997 한국수산과학회지 Vol.30 No.2

Experiments were performed to find out the proper conditions of diluents for the short-tenn storage of sperm of black seabream, Acanthopagrus schlegeli. For milt collection, brood stock was reared in a recirculating seawater system. The following results indicated that short-term storage methods with fresh condition could tie employed in black seabream sperm. When the black seabream's serum was used as a diluent for the fresh storage, sperm activity index (SAI), fertilization rate and survival rate derived the best result in $7\~10\;days$ of storage. pH 7 and 8 showed the highest SAI in the same storage condition. In order to keep high SAI and survival rate of the sperm, addition of 800 ppm neomycine into the diluent revealed the best storage results. 감성돔, Acanthopagrus schlegeli 정자의 단기보존을 위한 기초자료를 얻기 위하여, 순환여과사육 시스템에서 사육한 전장 $25.9{\pm}1.7cm$, 체중 $292.8{\pm}53.7g$의 성숙한 어미로부터 정액을 채집하여 정자의 액상보존 효과를 조사하였다. 희석액별 단기 액상보존 실험에서 혈청을 사용하였을 때 보존 10일후 정자의 SAI와 생존율은 각각 0.3, $55.6\%$로 가장 좋았으며, 보존 7일후의 감성돔 알에 대한 수정률도 $47.7\%$로 혈청이 가장 좋았다. 정자를 pH $7\~8$의 희석액에서 보존하였을 때 가장 높은 SAI를 보였으며, 정자의 생존율과 SAI를 높이기 위한 항생제로는 neomycine(800ppm)이 효과적인 것으로 나타났다.

바지락, Ruditapes philippinarum의 먹이 섭취에 미치는 수온과 염분의 영향

김철원 ( Chul Won Kim ),고강희 ( Kang Hee Kho ) 한국환경생물학회 2004 환경생물 : 환경생물학회지 Vol.22 No.1

여름철 고수온기와 집중강우로 인하여 염분의 급격히 감소하는 시기에 바지락의 일간먹이밀도 감소량, 여수율, 소화율을 조사하였다. 실험결과 바지락은 수온과 염분에 의하여 일간먹이밀도 감소량, 여수율, 소화율이 영향을 받는 것으로 나타났다. 수온의 경우 소형그룹의 27℃에서 각각 5.8×10⁴cells ml^(-1), 16.96 liter hr^(-1)g^(-1), 12.04×10^7 cells hr^(-1)g^(-1)로 가장 높은값을 보였으며 대형그룹에서도 27℃에서 각각 15.60×10⁴ ce11s ml^(-1), 11.85 1iter hr^(-1)g^(-1), 26.30×10^7 cells hr^(-1)g^(-1)로 가장 높은 값을 보였다. 염분에 따른 소형그룹의 일간 먹이밀도 감소량, 여수율과 소화율은 12‰에서 0.10×10⁴cells ml^(-1), 0.19 liter hr^(-1)g^(-1), 0.18×10^7 cells hr^(-1)g^(-1)로 가장 낮은값을 보였으며 대형그룹에서도 12‰에서 0.45×10⁴cells ml^(-1), 0.24 liter hr^(-1)g^(-1), 0.71×10^7 cells hr^(-1)g^(-1)로 가장 낮은값을 보였다. 본 실험결과 여름철 고수온과 저염분이 바지락의 대량 패사 원인으로 작용하며 안정적인 생산을 방해하는 요인임을 알수 있었다. The feeding, clearance rate, and ingestion rate of Manila clam (Ruditapes philippinarum) were investigated with small group (10.8?.58 mm in shell length) and large group (37.5?.8 mm in shell length) under combination in water temperature (24, 27, 33, 36?) With salinity (12, 15, 24, 27‰). The maximum feeding, clearance rate, and ingestion rate in small and large groups were 27? and 27‰, respectively. While, The minimum feeding, clearance rate, and ingestion rate in both groups were 36? and 12‰, respectively. There results were suggested that the feeding, clearance rate, and ingestion rate of Manila clam were significantly influenced by external factors such as water temperature and salinity. The reason for the mass mortality of Manila clam during the heavy rainfall in summer season can be explained by high temperature and low salinity.

능성어, Epinephelus septemfasciatus와 자바리, E. bruneus의 정자동결보존에 관한 연구

김효근,김수철,김두용,김정우,고강희,Kim, Hyo Gun,Kim, Soo Chel,Kim, Doo Yong,Kim, Jung Woo,Kho, Kang Hee 한국해양생명과학회 2017 한국해양생명과학회지 Vol.2 No.1

The purpose of this research is to develop the simple freezing method for sperm cryopreservation in the Sevenband grouper and Kelp grouper. The motility and survival rate were checked to investigate the effects of diluent and cryoprotectant on sperm cryopreservation.In cryopreservation experiments, 300 mM glucose and 15% dimethyl sulfoxide (DMSO) were used as a diluent and a cryoprotectant, respectively. As a results of cryopreservation, the motility rate of Sevenband grouper was found to be more than 90%, and that of Kelp grouper was found to be more that 60% in sperm 5 months after cryopreservation.

삼세기(Shaggy sea raven, Hemitripterus villosus)의 carbonic anhydrase III에 관한 연구

권록은(Rok Eun Kweon),고강희(Kang Hee Kho) 한국생명과학회 2014 생명과학회지 Vol.24 No.2

본 논문에서는 삼세기(Shaggy sea raven, Hemitripterus villosus)를 실험 재료로 선택하여 Carbonic Anhydrase Isozymes (CAs) 중의 하나인 CA III에 대한 연구를 SDS-PAGE, Isoelectric Focusing (IEF), Western blot analysis의 방법을 통하여 진행하였다. SDS-PAGE와 Western blot 결과 삼세기 아가미, 혈액, 장, 간, 신당, 근육, 심장조직에서 CA III의 분자량인 30 kDa의 band가 확인되었다. 삼세기의 근육과 아가미에 대한 등전점 전기영동(IEF)과 Western blot analysis 결과 pI 7.0 부근에서 band가 형성되는 것을 확인할 수 있었다. 특히 SDS-PAGE와 IEF 실험 결과 삼세기의 아가미 조직에서 CA III의 발현량이 다른 조직들에 비하여 우세하게 나타났다. 이는 아가미가 다른 조직들과 달리 어류의 생체기관 중 유일하게 외부와 직접 접촉이 가능한 조직으로서 활성산소에 대한 손상을 최소화하기 위한 것으로 사료된다. Carbonic anhydrase isozymes (CAs) are widespread zinc-containing metalloenzyme family. The enzyme catalyzes the reversible interconversion of CO2 and HCO3. This reaction is the main role of CA enzymes in physiological conditions. CA III, one of the CA isozymes, has been identified in many tissues. It is distinguished from the other isozymes by several characteristics, particularly by a lower specific activity and by its resistance to acetazolamide. However, the physiological function of CA III in fish is unknown. In this study, we examined the detection of CAs in the Shaggy sea raven Hemitripterus villosus, using SDS-PAGE, isoelectric focusing (IEF), and western blot analysis. We detected a significant protein band with molecular weight about 30 kDa from the tissues of H. villosus by SDS-PAGE and western blotting. A specific band of CA III with pI 7.0 was detected by IEF and western blotting in gill and muscle. The immunoreaction of anti-CA III expressed in the gill of H. villosus was much stronger than other tissues. One explanation for this result is that the fish gill is the only organ that is exposed to the external environment and that plays an important role in acid-base relevant ion transfer, the transfer of H+ and/or HCO3 ?, for the maintenance of systemic pH. This is the first report on the identification of a carbonic anhydrse III-like protein from H. villosus.

피조개, Scapharca broughtonii (Schrenck) 정자의 동결보존

라성주,한경호,최명락,고강희,Rha, Sung-Ju,Han, Kyeong-Ho,Choi, Myeong-Rak,Kho, Kang-Hee 한국패류학회 2010 The Korean Journal of Malacology Vol.26 No.4

피조개, Scapharca broughtonii (Schrenck) 정자의 동결보존 위해 동결높이에 따른 예비동결 (0, 2, 4, 6 cm), 희석제 (150 mM NaCl, 300 mM glucose, Ringer's solution)와 동해방지제(glycerol, dimethylsulfoxide (DMSO), dimethylacetamide (DMA), methaol) 에 따른 효과를 정자의 운동성과 생존율로 비교하였다. 피조개 정자 동결보존에 있어 예비동결은 액체질소표면으로부터 2 cm가 가장 효과적이었으며, 희석제로는 Ringer's solution이 동해방지제로는 DMSO 10% 농도가 가장 적합하였다. This study was conducted to investigate protocol standardization for spermatozoa cryopreservation of the Scapharca broughtonii (Schrenck). Among the freezing rates, freezing at a height of 2 cm above liquid nitrogen surface for 5 minute gave higher activity and survival rate. Among the various diluents, Ringer's solution was the best for S. broughtonii sperm cryopreservation. The suitability of cryoprotectants dimethylsulfoxide (DMSO), dimethylacetamide (DMA), glycerol and methanol were tested against three freezing rates. DMSO gave significantly higher activity and survival rates than others.