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이온교환 칼럼 크로마토그래피를 이용한 난백에서 Lysozyme의 연속추출
박성준,김현석,김현위,안태회,박기문,최춘언,Park, Seong-Joon,Kim, Hyeon-Seok,Kim, Hyean-Wee,Ahn, Tae-Hoe,Park, Ki-Moon,Choi, Chun-Un 한국식품과학회 1990 한국식품과학회지 Vol.22 No.6
식품 및 의약품 원료로 이용되고 있는 Iysozyme을 난백으로부터 이온교환 크로마토그래프를 이용하여 연속추출하였다. 사용된 수지는 지금까지 수율, 순도, 작동용이성에서 가장 효과적이라고 밝혀져 있는 Duolite C-464 양이온교환수지를 선택하여 $Na^+$형으로 $pH\;7.9{\pm}0.1$로 평형화하여 사용하였다. 조제용 자동 Liquid Chromatography(LC) system(column size ; i.d. 50 mm, bed volumn ; 1020 ml)에서 수지 평형화, 난백접촉, rinse, lysozyme용출 순으로 cycle을 연속적으로 반복하면서 시행하고 그 재현성을 관찰하기 위해 각 cycle별 rinse끝점과 용출끝점의 UV level을 비교하였다. 그 결과 rinse끝점은 19 cycle까지 30% 이하를 유지하였다. 용출 끝점은 17 cycle까지는 30% 이하에서 비교적 안정하였으나 18 cycle 이후 부터는 50% 이상으로 용출능력이 현저하게 감소하였다. 또한, 회수율 비교에서 17cycle까지는 90% 이상을 유지하다가 18cycle에서는 72%, 19 cycle에서는 65%로 격감하였다. 본 추출 정제 lysozyme은 전기영동상 단일 band로 나타났고, densitometer로 측정한 순도는 99% 이상이었다. Continuous column chromatographic separation of lysozyme from egg white was investigated. A weak acid type cation exchange resin, Duolite C-464, was used because of high lysozyme recovery and ease of column operation in this experiment. The resin was equilibrated at $pH\;7.9{\pm}0.1$ in Na+form. Continuous lysozyme separation was processed by repeating cycles(one cycle : resin equilibration, flow egg white, rinse, lysozyme elution) in automated preparative Liquid Chromatography(LC) system(column size ; i.d. 50 mm, resin bed volumn ; 1020 ml). At comparison of UV levels in rinse end point and elution end point of every cycle, the UV levels of rinse end point are maintained below 30% for 19 cycles and that of elution end point are also maintained below 30% for 17 cycles, stably, but was increased above 50% after 18 cycle. That indicated the eluting ability of lysozyme was reduced conspicuously after 18 cycle in continuous cycling process. The recovery of lysozyme was maintained above 90% from one to 17 cycle, but was decreased to 72% and 65% in 18 cycle and 19 cycle, respectively.
김동욱,김현위,이병우,정창기,박기문,성하진,최춘언 한국산업미생물학회 1990 한국미생물·생명공학회지 Vol.18 No.2
사과향과 유사한 방향을 내는 미생물이 sludge로부터 분리되어 Geotrichum sp.로 동정되었다. 사과향 생성을 위한 아미노산으로는 leucine과 phenylalanine의 100:1 혼합물(1.5g/l)이 제일 좋았고 최적 ethyl alcohol 농도는 0.5-1.0%(v/v)이었다. Shaker에서 300㎖ 진탕 flask 속에 100㎖씩 배양시 200rpm, 2%(v/v) 접종상태에서 최적 사과향 생성조건은 배양온도 26℃, 배양시간 18시간, 초기 pH4.0이었다. Air 출구에 charcoal trap이 설치된 jar-fermentor(working volume, 3l:culture temp., 26℃; agitation speed, 400rpm; aeration rate, 3l/min: inoculum, 60㎖)로 36시간 발효시켜 aroma 화합물을 charcoal에 흡착시킨 후, propylene glycol(1,2-propanediol)을 사용해 수증기증류하여 얻은 증류액을 diethylether: n-pentane(2:1, v/v) 혼합용매로 추출하여 GC 및 GC-MS로 분석, 동정한 결과 leucine, phenylalanine으로부터 생성된 3-methylbutyl alcohol, phenethyl alcohol 및 2-hexen-l-ol 등을 비롯한 알콜류와 이러한 알콜류의 ester들, 그리고 ethyl alcohol로부터 유래된 여러 ester 화합물이 주된 aroma 구성성분인 것으로 밝혀졌다. A strain producing apple-like aroma was isolated from sludge and identified as Geotrichum sp. Optimum culture conditions for the aroma production were investigated and the major aroma components were identified by GS and GC-MS. The ratio of leucine to phenylalanine was 100:1(1.5 g/l) and ethanol concentration was 0.5-1.0%(v/v). The best aroma quality was obtained at 26℃ and pH 4.0. Major aroma compounds were alcohols including 3-methylbutyl alcohol, phenetyl alcohol, 2-hexene-l-ol and their esters, and esters originated from ethyl alchol.