약물의 주기능 · 부작용

김상건,Kim, Sang-Geon 한국과학기술단체총연합회 2004 과학과 기술 Vol.37 No.11

Thiazole 또는 Pyrazine유도성 Microsomal Epoxide Hydrolase의 순수정제: Epoxide Hydrolase-관련성 43 kDa 단백질의 유도증가

김상건,Kim, Sang-Geon 대한약리학회 1993 대한약리학잡지 Vol.29 No.2

Microsomal epoxide hydrolase (mEH)은 epoxide형 중간대사물을 해독화하는 효소이다. 본 실험실에서는 thiazole 또는 pyrazine을 rat에 투여할 때 mEH mRNA수준이 증가되고 mEH가 유도증가한다는 것을 밝힌바 있다(Carcinogenesis, Kim et al, 1993). 본 연구에서는 Thiazole처리를 한 rat의 간 microsome 분획으로 부터 DEAE-cellulose column chromatography를 이용하여 mEH를 순수분리하였고, 이를 SDS-PAGE분석 및 N 말단 amino acid 서열분석으로 확인하였다. Pyrazine처리를 한 rat의 간 microsome분획에서는 mEH와 더불어 이와 관련된 43 kDa 단백질이 함께 정제되었다. 정제된 thiazole 유도성 mEH를 토끼에 주사하여 항체를 생산하였고, 이 항체를 이용한 immunoblot 분석을 하였을 때 간 microsome 분획의 mEH가 thiazole투여군에서는 대조군에 비하여 10배, pyrazine 투여군에서 7배 증가하였다. Pyrazine처치한 rat의 간 microsome 분획에서는 mEH 관련성 43 kDa 단백질이 동시 유도증가하는 것을 면역화학적 반응으로도 확인하였다. 이때 Pyrazine으로 유도된 rat의 간 microsome 분획 또는 정제분획에 존재하는 43 kDa 단백질과 mEH의 비율은 1 : 15로 나타났다. 정제된 mEH와 43 kDa 단백질의 N 말단 amino acid 서열을 분석하였을때 43 kDa 단백질의 N 말단이 mEH와 동일하게 나타나 관련 단백질임을 확인하였다. 이러한 mEN 유도현상에 종차가 있는지를 알아보기 위하여 thiazole과 pyrazine을 각각 rabbit에 투여하였을 때 rabbit에서 는 mEH의 유도증가가 일어나지 않았으며, pyrazine 투여군에서 43 kDa 단백질의 증가는 관찰 되었다. 본 연구는 thiazole 또는 pyrazine 투여후 mEH 발현이 유도증가되며, pyrazine 투여 후에는 mEH 및 이와 관련된 43 kDa 단백질이 동시유도되고, 이러한 mEH 유도발현에 rat와 rabbit간에는 종차가 있음을 보여준다. Liver microsomal epoxide hydrolase (mEH) is active in the detoxification of epoxide-containing reactive intermediate. Previous studies in this laboratory have shown that thiazole and pyrazine are efficacious inducers of mEH in rats with large increases in mEH mRNA levels (Carcinogensis, Kim et al, 1993). mEH was purified to electrophoretic homogeneity from thiazole-induced rat hepatic microsomes using DEAE-cellulose column chromatography whereas another protein $({\sim}43\;kDa)$ was co-purified with mEH from pyrazine-induced rat hepatic micrsomes (200 mg/kg body weight/day, ip, 3d). The antibody raised from a rabbit against mEH protein purified from thiazole-induced rat hepatic microsomes appeared to specifically recognize mEH protein in rat hepatic microsomes, as assessed by immunoblotting analysis. Immunoblotting analyses revealed a 10- and 7-fold increase in mEH levels in the hepatic microsomes isolated from thiazole- and pyrazine-treated rats, respectively. Moreover, immunoblotting analysis showed cross-reactivity of the mEH antibody with a 43 kDa protein in pyrazine-induced rat hepatic microsomes and with co-purified 43 kDa protein in purified fractions. The ratio between the 43 kDa protein and mEH in pyrazine-induced rat microsomes or in purified fractions was ${\sim}1$ to 15. N-terminal amino acid sequence analysis of both purified rat mEH and 43 kDa protein revealed that 10 out of 12 amino acids in N-terminus of the 43 kDa protein were identical with the mEH sequence with two amino acid residues of the 43 kDa protein undetermined. Either thiazole or pyrazine treatment, however, failed to increase the levels of mEH protein in rabbits while pyrazine caused elevation of the 43 kDa protein in this species, as determined by irnrnunoblotting analysis. These results demonstrated that treatment of rats with either thiazole or pyrazine causes elevation in hepatic mEH expiession whereas pyrazine treatment results in induction of another mEH-related 43 kDa protein and that a distinct species difference exists between rats and rabbits in the induction of mEH by these xenobiotics.

Gender-Related Expression of Rat Microsomal Epoxide Hydrolase during Maturation

김상건,김영희 덕성여자대학 약학부 1993 약운 Vol.13 No.-

處方箋의 枚數와 件數, 件數와 劑數 關聯性

金相建,嚴基和,李惠淑,趙南春,金洛斗 한국병원약사회 1985 병원약사회지 Vol.2 No.1

초등학교주변 보 · 차 미분리 가로에서의 보행자 · 차량의 점유실태와 보행자 거동분석

김상건,전상민,정헌영(Hun Young Jung) 대한교통학회 2000 대한교통학회 학술대회지 Vol.38 No.-

Dimethyl-4,4'-dimethoxy-5,6,5',6',-dimethylenedioxybiphenyl-2,2'-dicarboxylate(PMC)의 약리작용에 관한 연구 : PMC와 마늘유복합제의 알콜성지방간 형성에 미치는 영향 Effects of PMC in Combination with Garlic oil against Liver Fat Infiltration in Rats

김상건,류지연 德成女子大學校 藥學硏究所 1996 藥學論文誌 Vol.7 No.1

Dimethyl-4,4′-dimethoxy-5,6,5′,6′-dimethylenedioxy-biphenyl-2,2′-dicarboxylate(PMC)의 간장보호효과 기전의 일부를 규명하기 위하여 PMC가 cytochrome P450(P450), microsomal epoxide hydrolase(mEH), glutathione S-transferase(GST) 효소발현에 미치는 효과를 관찰하였다. PMC를 5∼100㎎/㎏의 용량으로 5일간 투여한 후 간조직중의 효소발현을 측정하였을 때 P450 2B1/2 단백질발현이 PMC 투여용량에 의존적으로 증가하여 1일 50 또는 100 ㎎/㎏용량에서 4∼5배 증가하였다. P450 2E1의 단백질 양은 PMC를 고용량으로 투여한 군에서만 감소하였다. P450 1A1/2의 발현은 PMC투여에 의하여 변화하지 않았으나, P450 2C11은 PMC를 투여한 후 용량의존적으로 감소하였다. mEH와 GST 단백질발현은 PMC투여 약물용량에 관계없이 대조군과 유사하였다. PMC를 단독으로 EH는 garlic oil(GO)과 병용하여 투여할 때의 알콜성지방간 형성에 미치는 효과를 측정하였다. PMC와 GO (1:2 비율)의 혼합물 150㎎/㎏을 3일간 전처치하였을 때 ethanol투여로 유발되는 간장중의 triglyceride (TG) 함량증가를 대조군에 비하여 71%로 감소시켰다. PMC, GO를 각각 전처치할 때에는 isopropanol에 의하여 유도되는 TG 함량증가가 각각 50%, 0%로 감소되었으나, 이들 약제를 병용투여할 때는 감소되는 효과가 소실되었다. Ethanol로 유발되는 지방간 모델에서 cholesterol함량을 측정한 결과 PMC, GO 또는 PMC+GO를 전처치 한 동물군에서 cholesterol증가를 각각 22%, 33% 또는 26%로 감소시켰으며, isopropanol을 투여하여 유발되는 cholesterol의 함량증가는 동일한 전처치에 의하여 각각 30%, 0%, 80%로 저하되었다. 요약하면, PMC는 간장 대사효소중 P450 2B1/2를 유도발현하며, P450 2C11은 억제적으로 발현시키나, mEH, GST의 발현에는 영향을 미치지 않는 것으로 나타났으며, PMC와 GO을 병용하여 투여할 때 지방간형성에 대한 약한 방어효과가 있는 것으로 보인다.

Evidence Based Pharmaceutical Services

김상건 韓國病院藥師會 2005 병원약사회지 Vol.22 No.2

혈전치료제의 종류와 약리작용

김상건 약업신문사 1995 의약정보 Vol.1995 No.1

The Effects of Isopropyl 2-(1,3-dithioetane-2-ylidene)-2-[N-(4-methyl-thiazol-2-yl)carbamoyl]acetate (YH439) on Potentiated Carbon Tetrachloride Hepatotoxicity

김상건,조주연,Kim, Sang-Geon,Cho, Joo-Youn The Korean Society of Pharmacology 1996 대한약리학잡지 Vol.32 No.3

간독성물질인 $CCl_4$의 대사에서 반응성이 높은 대사중간체의 증가가 P450 2E1의 활성 및 발현증가와 관련된다. YH439는 랫트에서 사염화탄소에 의하여 유발된 간 손상에 보호효과가 탁월하였고, 각종 독성물질에 의하여 발생하는 간염을 억제하며 P450 2E1의 발현을 억제하는 것으로 나타났다. P450 2E1의 발현억제가 YH439의 간장보호작용의 일부기전으로 해석되나 free radical 공격의 제어, 방어과정에 관련된 탐식세포의 역할등 간장독성에 관련된 YH439의 영향 및 관련된 기초연구는 완전히 확립되어 있지 않다. 본 연구에서는 상승적인 화학적 독성에 대한 YH439의 보호효과를 관찰하였다. Retinoyl palmiate (Vit-A)를 전처러하고 YH439를 처리한 rat의 경우 $CCl_4$ 단독투여군에 비하여 혈장 alanine aminotransferase (ALT)활성이 5배로 증가하여 $CCl_4$에 의한 간독성을 현저히 강화시켰으나, YH439와 Vit-A를 동시에 전처리한 rats에 있어서는 Vit-A에 의하여 강화된 독성이 94% 감소하였다. Vit-A에 의한 혈장 ALT 활성 증가는 Kupffer cell 활성을 선택적으로 억제하는 $GdCl_3$의 투여에 의해 완전히 차단되어 YH439가 Kupffer cell 활성억제를 매개로 상승적 간손상에 대하여 보호효과가 있음을 지지한다. Propyl sulfide의 전처치는 $CCl_4$에 의해 유도되는 간독성을 $CCl_4$ 단독투여와 비교했을때 5배 이상 증가시켰으나, Propyl sulfide와 YH439를 병용투여할 경우 propyl sulfide에 의해 강화되는 간독성이 YH439의 투여용량에 의존적으로 감소하였고, propyl sufide와 $CCl_4$에 의한 지질과산화의 증가가 YH439에 의하여 용량의존적으로 억제되는 것으로 나타났다. Propyl sulfide에 의하여 강화된 간독성의 차단은 YH439가 P450 2E1 발현조절을 통하여 간독성을 제어함을 지지한다. 그러나 YH439는 pyridine과 $CCl_4$에 의한 독성을 억제시키지 못하였다. 이는 Pyridine에 의해 유도되는 다른 형의 P450발현이 YH439에 의해 억제되지 못하는 이유로 해석된다. 중금속에 의해 유도되는 간독성에 대한 YH439의 보호효과를 ICR mice에서 관찰하였을 때 $CdCl_2$를 1회 투여할때 ALT와 aspartate aminotransferase (AST)활성이 $5{\sim}6$배 증가하였으나 YH439를 투여한 후 $CdC1_2$를 투여한 동물에 있어서는 투여후 6시간에 AST의 증가가 유의성 있게 억제되었다. 그러나 YH439는 thioacetamide에 의하여 유발된 liver fibrosis에는 개선효과가 없는 것으로 나타났다. 이러한 결과는 YH439가 Kupffer cell 불활성화를 통하여 Vit-A에 의해 유도되는 간독성을 효과적으로 방어하고, YH439에 의한 P450 2E1의 발현억제는 propyl sulfide를 경유하는 간독성 차단과 관계되며, YH439는 중금속으로 유도된 조직독성에 방어효과가 있음을 지지한다. The reactive intermediates formed during the metabolism of therapeutic agents, toxicants and carcinogens by cytochromes P450 are frequently capable of covalently binding to tissue macromolecules and causing tissue damage. It has been shown that YH439, a congener of malotilate, is effective in suppressing hepatic P450 2E1 expression. The present study was designed to further establish the mechanistic basis of YH439 protection against toxicant by assessing its effects against chemical-mediated potentiated hepatotoxicity. Retinoyl palmitate (Vit-A) pretreatment of rats for 7 days substantially enhanced carbon tetrachloride hepatotoxicity, as supported by an ${\sim}5-fold$ increase in serum alanine aminotransferase (ALT) activity, as compared to $CCl_4$ treatment alone. The elevation of ALT activity due to Vit-A was completely blocked by the treatment of $GdCl_3$ a selective inhibitor of Kupffer cell activity. Concomitant pretreatment of rats with both YH439 and Vit-A resulted in a 94% decrease in Vit-A-potentiated $CCl_4$ hepatotoxicity. YH439 was also effective against propyl sulfide-potentiated $CCl_4-induced$ hepatotoxicity. Whereas propyl sulfide (50 mg/kg, 7d) enhanced $CCl_4-induced$ hepatotoxicity by >5-fold, relative to $CCl_4$ treatment alone, concomitant treatment of animals with both propyl sulfide and YH439 at the doses of 100 and 200 mg/kg prevented propyl sulfide-potentiated $CCl_4$ hepatotoxicity by 35% and 90%, respectively. Allyl sulfide, a suppressant of hepatic P450 2E1 expression, completely blocked the propyl sulfide-enhanced hepatotoxicity, indicating that propyl sulfide potentiation of $CCl_4$ hepatotoxicity was highly associated with the expression of P450 2E1 and that YH439 blocked the propyl sulfide-enhanced hepatotoxicity through modulation of P450 2E1 levels. Propyl sulfide- and $CCl_4-induced$ stimulation of lipid peroxidation was also suppressed by YH439 in a dose-related manner, as supported by decreases in malonedialdehyde production. The role of P450 2E1 induction in the potentiation of $CCl_4$ toxicity and the effects of YH439 were further evaluated using pyridine as a P450 2E1 inducer. Pyridine pretreatment substantially enhanced the $CCl_4$ hepatotoicity by 23-fold, relative to $CCl_4$ alone. YH439, however, failed to reduce the pyridine-potentiated toxicity, suggesting that the other form(s) of cytochroms P450 inducible by pyridine, but not suppressible by YH439 treatment, may play a role in potentiating $CCl_4-induced$ hepatotoxicity. YH439 was capable of blocking cadmium chloride-induced liver toxicity in mice. These results demonstrated that YH439 efficiently blocks Vit-A-enhanced hepatotoxiciy through Kupffer cell inactivation and that the suppression of P450 2E1 expression by YH439 is highly associated with blocking of propyl sulfide-mediated hepatotoxicity.

電算을 利用한 醫藥品集作成

金相建 한국병원약사회 1986 병원약사회지 Vol.3 No.1