Mouse models of systemic lupus erythematosus

Jeehee Youn(윤지희) 한국실험동물학회 2022 한국실험동물학회 학술발표대회 논문집 Vol.2022 No.1

류마티스 관절염 환자에서 Conserved T 세포 수용체의 CDR3 motif를 표현하는 제2형 콜라겐 특이 T세포주의 형성과 유지

김승훈,조미라,윤지희,박성환,조철수,황수연,김호연,Kim, Seung-Hoon,Cho, Mi-La,Youn, Jeehee,Park, Sung-Hwan,Hwang, Sue-Yun,Cho, Chul-Soo,Kim, Ho-Youn 대한면역학회 2001 Immune Network Vol.1 No.1

Background: To determine the molecular structure of type II collagen-specific T-cell receptors associated with rheumatoid arthritis (RA). Methods: We generated CII-specific T-cell lines of 8 RA patients by prolonged in vitro culture with bovine CII (bCII) and the immunogenic peptide (256-270) of human CII. The proliferation response towards CII stimulation was measured from the uptake of 3H-thymidine. Changes in the secretion of Th 1 and Th2 cytokines in the culture supernatent were measured by ELISA. The TCR clonotypes of these T-cells were examined by RT-PCR/SSCP analyses of all 22 $V_{\beta}$ chains. Results: T-cells from patients' tissue exhibited strong proliferation index upon CII stimulation, which was maintained up to 6 months in the culture. The secretion of INF-$\gamma$from these T-cells increased along with the duration of culture time, while the amount of IL-4 production did not show significant changes. The SSCP band patterns of patients' T-cells appear as discrete bands unlike the smeary streak produced from normal samples. Some SSCP bands, each representing selected expansion of a TCR containing certain subtype of $V_{\beta}$ peptides, appeared to be identical in more than one patients. Among these, the expansion of SSCP band representing the $V_{\beta}$ 14 CDR3 region persisted after switching the antigen to the immunogenic human peptide (256-270). Conclusion: CII-reactive T-cells expressing distinct CDR3 motifs are selectively expanded in the peripheral blood and synovial fluid of RA patients, and their persistent proliferation upon CII stimulation, as well as the production Th 1-type cytokines, may play pivotal roles in RA pathogenesis.

사이토카인 리포터생쥐 시스템을 이용한 소수 인터루킨-12 p40 발현 면역세포의 확인

기미아(Mia Gi),김정은(Jungeun Kim),임우석(Wooseok Im),윤지희(Jeehee Youn),홍석만(Seokmann Hong) 대한체질인류학회 2009 해부·생물인류학 (Anat Biol Anthropol) Vol.22 No.1

인터루킨(IL)-12는 p35와 p40 단백질로 구성된 사이토카인으로, 선천면역과 적응면역을 서로 연결시켜주는 매우 중요한 면역학적 기능을 한다. p35 유전자는 지속적으로 발현되지만, p40 유전자의 발현은 외부자극에 의해 유도되는 점에 착안하여, 최근 IL-12 p40 유전자를 발현하는 세포를 형광 발현으로 동정할 수 있는 형광리포터생쥐 모델이 만들어졌다. 본 연구에서는 형광리포터 시스템을 이용하여 생체 내에 매우 적은 수로 존재하는 미세아교세포와 B 세포 소수 집단의 IL-12 p40 발현을 확인하고자 하였다. 먼저, IL-12 p40 형광리포터생쥐의 지라로부터 유래한 가지돌기세포와 복강으로부터 분리한 큰포식세포를 Toll-유사수용체(Toll-like receptor, TLR) 리간드로 자극한 후 IL-12 p40 발현 정도를 황색 형광단백질(yellow fluorescence protein, YFP) 발현으로 조사하였다. 그리고 뇌에 분포하는 큰포식세포의 한 종류인 미세아교세포를 신생 생쥐로부터 분리 증폭하여 IL-12 p40 발현을 조사하였다. 또한 지라의 B 세포에서 IL-12 발현이 유도되는지를 조사하였다. 지라 유래 가지돌기세포와 복강 유래 큰포식세포에서 IL-12 p40 형광리포터생쥐 시스템의 유용성을 확인하였다. 그리고 분리 증폭한 미세아교세포의 일부 세포가 TLR 리간드인 CpG oligodeoxynucleotides, lipopolysaccharide, peptidoglycan 그리고 polyinosinic-polycytidylic acid의 자극에 대해 IL-12 p40이 발현되는 것을 YFP 형광단백질 발현으로 확인할 수 있었다. 마지막으로 B 세포의 경우, B 세포의 소수 집단이 CpG 자극에 특이적으로 IL-12 p40을 발현하는 것을 확인하였다. 종합하면, 본 연구결과는 IL-12 p40 형광리포터생쥐 시스템을 통하여 뇌에 존재하는 미세아교세포의 일부와 소수의 B 세포집단에서 적절한 TLR 자극 시 IL-12 p40 유전자가 발현됨을 보였다. 이상의 결과는 IL-12 p40 형광리포터생쥐 시스템은 최근 새로이 발견되고 있는 소수 선천면역세포들을 효과적으로 동정하는 데 유용함을 제시한다. Interleukin-12 (IL-12), consisting of p35 and p40, plays important roles in linking innate and adaptive immunity. While p35 is constitutively expressed, IL-12 p40 gene expression is induced upon activation by Toll-like receptor ligands. Recently, with gene targeting technology, the cytokine IL-12 p40 reporter mouse has been developed to express the p40 gene linked via a viral IRES element with yellow fluorescence protein (YFP) fluorescent reporter. We investigated whether this novel system would be useful to reveal IL-12 p40-producing immune cells. We first investigated whether macrophages and dendritic cells from these mice faithfully reported p40 induction. Next, we tested if microglial cells, macrophages in the brain, could induce IL-12 p40. Finally we tested whether B cells could produce IL-12 p40 because there were very few reports for IL-12 production by B cells. Our results confirmed that macrophages and dendritic cells are main producer of IL-12 p40. Then, we found that microglial cells could produce IL-12 p40 upon stimulation with various TLR ligands. Finally we found that a subset of B cells could produce IL-12 p40 in TLR9-dependent manner. Taken all together, our system will be a valuable tool to identify the type of immune cells that produce IL-12 p40.

발생과정중 흰쥐 넙다리곧은근에서 Laminin의 발현과 분포에 대한 연구

정호삼(Ho-Sam Chung),서윤경(Yun-Kyung Suh),윤지희(Jeehee Youn),김원규(Won-Kyu Kim),백두진(Doo-Jin Paik),김종관(Chong-Kwan Kim),신규석(Kyu-Suk Shin) 대한해부학회 2000 Anatomy & Cell Biology Vol.33 No.3

Laminin은 생체조직의 세포밖바탕질에 존재하는 구조단백질의 일종으로 세포 혹은 조직의 결합, 이동, 발생 및 분화에 유기적인 역할을 한다고 알려져 있다. 이에 저자는 흰쥐의 넙다리곧은근의 발생과 분화과정에서 laminin의 생성과 분포를 성숙한 근육조직이 될 때까지 추적하고자 하였다. 실험동물로 SD계 흰쥐를 사용하였으며, 실험군으로 14일, 16일, 20일 및 22일의 태자군과 출생 1일, 3일, 5일 및 7일의 신생흰쥐군으로 분류하였다. 각 실험군에서 적출된 넙다리곧은근에서 나타나는 laminin의 생성과 분포는 면역조직염색법 과 면역금도금법을 이용한 전자현미경적 방법으로 관찰하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 제 14일의 흰쥐 태자의 원시넙다리곧은근에서는 근육모세포와 중간엽세포가 관찰되었으며 금과립이 세포질에 고르게 분포되었다. 2. 제 16일의 흰쥐 태자의 넙다리곧은근에서는 세포밖바탕질, 근육모세포 및 중간엽세포 등에서 laminin에 대한 강한 면 역반응이 관찰되었고, 근육모세포와 중간엽세포의 세포질에 금과립이 분포되었다. 3. 제 18일 및 20일의 흰쥐 태자의 넙다리곧은근에서는 근육세포의 바닥판에서 강한 면역반응이 나타났고, 근육세포의 바닥판에 금과립이 분포되었다. 4. 제 22일군의 흰쥐 태자와 출생 제 1일군의 흰쥐의 넙다리곧은근에서는 바닥판에서 강한 면역반응이 관찰되었고, 근육 세포의 바닥판과 근육속막내의 섬유모세포에 다량의 금과립이 분포되었다. 5. 출생 제 3일, 5일 및 7일군의 흰쥐 넙다리곧은근에서는 바닥판에 중등도의 면역반응이 관찰되었고, 근육세포의 바닥판 과 근육속막에 위치한 섬유모세포의 과립세포질세망에서 다량의 금과립이 관찰되었다. 이상과 같은 결과를 종합하면 흰쥐 넙다리곧은근의 근육조직내의 laminin은 근육모세포가 근육세포로 분화되기전에 바 닥판과 근육속막에 다량 분포되어 있었고, 출생후에는 바닥판에는 소량 분포됨을 알수 있었다. 따라서 근육조직에서 laminin 분비는 태자시기에는 근육조직내 근육모세포에서 분비하나 출생후에는 근육조직내 섬유모세포가 대부분을 분비 하는 것으로 사료된다. Laminin is an extracellular matrix-associated protein, which is largely present in the basement membranes of the human placenta, striated muscle and Schwann cell. Laminin has been proposed to promote attachment, spread, motility, growth and development of tissues or cells. In this study, we investigated the formation, localization and migration of the laminin in developing rectus femoris muscle of fetal and newborn rats. Experimental animals, fetal or newborn rats (Sprague-Dawley strain), were divided into 8 groups (14 day-old, 16 day-old, 18 day-old, 20 day-old and 22 day-old fetal rats, 1 day-old, 3 day-old, 5 day-old and 7 day-old newborn rats). The specimens of each group were prepared for detection of the laminin by immuno- histological and immunogold electron microscopic methods. 1. The primitive rectus femoris muscle of 14 day-old fetal rats consisted of mesenchymal cells and myoblasts. Laminin stained with a few gold particles were observed in the cytoplasm of myoblasts and rough endoplasmic reticulum of mesenchymal cells. 2. In the rectus femoris muscle of 16 day-old fetal rats, laminin was strongly expressed in myoblasts and mesenchymal cells. Gold particles were distributed in the cytoplasm of myoblasts and mesenchymal cells. 3. In the rectus femoris muscle of 18 and 20 day-old fetal rats, strong laminin immune reactions were observed in the basement membrane of muscle cells. A few gold particles distributed on the basal lamina of muscle cells and in the RER of fibroblasts. 4. In the rectus femoris muscle of 22 day-old fetal rats and 1 day-old newborn rats, strong laminin immune reactions were seen in the basement membrane of muscle cells. Numerous gold particles were located on the basal lamina of muscle cells and the RER of fibroblasts. 5. In the rectus femoris muscle of 3 day, 5 day and 7 day-old newborn rats, moderate laminin immune reactions were detected in the basement membrane of the muscle cell. A few gold particles were located on the basal laminae of muscle cells and RER of fibroblasts. These results suggest that the distribution of laminin in the rectus femoris muscle is related to myogenicity. Laminin seemed to be secreted by myoblasts of rectus femoris muscle at the fetal stage, but by fibroblasts in the muscle at neonatal and adult stages.

Adriamycin투여로 유발된 콩팥병증 흰쥐에서 Cilazapril과 Losartan 처치에 따른 Laminin β1 chain 분포변화

김태진(Tai-Jin Kim),정호삼(Ho-Sam Chung),백두진(Doo-Jin Paik),윤지희(Jeehee Youn),김원규(Won-Kyu Kim) 대한해부학회 2002 Anatomy & Cell Biology Vol.35 No.5

세포외기질의 주요 구성단백질인 laminin은 콩팥에서 토리바닥막에 분포되어 있어 토리의 발생과 분화에 영향을 미치 고 최근의 연구에서는 토리의 거름기능에도 주요 역할을 하는 것으로 알려져 있다. 이에 저자는 adriamycin 투여로 콩팥이 손상된 흰쥐에 콩팥보호작용이 있는 것으로 알려진 cilazapril (angiotensinconverting enzyme inhibitor, ACEi)과 losartan (angiotensin II receptor blockade, ARB)을 투여한 후 콩팥조직의 회복과 함께 콩팥의 신사구체와 요세관에서 laminin β1 chain 분포의 변화와 합성세포 등을 관찰하고자 하였다. 1. Adriamycin 투여 후 6주 및 12주 경과군에서는 콩팥의 토리쪽곱슬세관 (proximal convoluted tubule)의 상피세포에 laminin β1 chain에 반응한 면역금과립이 다량 분포되었으며, 토리의 족세포와 혈관사이세포의 세포질에서도 면역금과립이 대조군에 비하여 증가되었다. 토리쪽곱슬세관의 상피세포내에 laminin β1 chain mRNA 발현도 증가되었다. 2. Adriamycin 콩팥병증 흰쥐에 cilazapril을 투여한 흰쥐 콩팥에서는 토리쪽곱슬세관의 상피세포와 족세포 및 혈관사이 세포에서 면역금과립이 감소되었으며, 토리쪽곱슬세관 및 집합관의 상피세포에서 laminin β1 chain mRNA 발현이 현저히 감소되었다. 3. Adriamycin 콩팥병증 흰쥐에 losartan을 투여한 흰쥐 콩팥에서는 족세포와 혈관사이세포에서 면역금과립이 감소되어 있었고, 요세관의 상피세포에서 면역금과립과 laminin β1 chain mRNA 발현이 현저하게 감소되었다. 4. Adriamycin 콩팥병증 흰쥐에 cilazapril 및 losartan을 복합투여한 흰쥐 콩팥에서는 족세포, 혈관사이세포 및 요세관 상피세포에서 면역금과립이 감소되었으며, 전 요세관 상피세포에서 laminin β1 chain mRNA발현은 거의 사라졌다. 이상과 같은 결과에서, adriamycin에 의한 콩팥 손상 및 회복과정에서 laminin β1 chain은 토리쪽곱슬세관의 상피세포, 족세포 및 혈관사이세포에서 합성되며, 손상된 콩팥조직에서는 급속히 증가되지만 손상이 치유되면 정상적인 세포내 분포로 복원되므로 손상된 콩팥조직의 회복과정에 중요한 작용을 하는 것으로 생각되었다. Laminin, an extracellular matrix glycoprotein, is distributed in the basement membrane of renal glomerulus. Laminin has been demonstrated to regulate the development and differentiation of glomeruli and play an important role in the filtering function of glomeruli. To address whether laminin β1 chain is associated with the pathogenic states of renal injury and recovery, nephropathy were induced by intravenous adriamycin injection and subsequently cured by treatment with antihypertensive drugs, cilazapril (angiotensin-converting enzyme inhibitor, ACEi) and lozartan (angiotensin receptor blockade, ARB), which have been known to be effective on renal protection. The results we obtained were as follows: 1. At 6 and 12 weeks after adriamycin injection, epithelial cells of proximal convoluted tubules exhibited intensive deposition of laminin β1 chain reactive gold particles. Cytoplasm of podocytes and mesangial cells in glomeruli showed an increase in the gold particle deposition as compared with that of controls. The mRNA level of laminin β1 chain was enhanced in the epithelial cells of proximal convoluted tubules. 2. Following cilazapril administration to adriamycin-induced nephropathy rats, laminin β1 chain reactive gold particle deposition was reduced in the epithelial cells of proximal convoluted tubules, podocytes, and mesangial cells. The level of laminin β1 chain transcripts was remarkably decreased in the epithelial cells of proximal convoluted tubules. 3. Following losartan administration to adriamycin-induced nephropathy rats, podocytes and mesangial cells were deposited with reduced number of laminin β1 chain reactive gold particles. The laminin β1 chain reactive gold particles and level of laminin β1 chain mRNA transcripts were remarkably reduced in the epithelial cells of proximal convoluted tubules. 4. Treatment with mixture of cilazapril and losartan to adriamycin-induced nephropathy rat resulted in a decrease in laminin β1 chain reactive gold particle deposition within the epithelial cells of proximal convoluted tubules, podocytes, and mesangial cells. Laminin β1 chain mRNA expression in the epithelial cells of proximal convoluted tubules nearly disappeared. These results consequently suggest that laminin β1 chain may be synthesized within the epithelial cells of proximal convoluted tubules, podocytes and mesangial cells and laminin β1 chain may play an important role on tissue recovery of the renal tissues injured by adriamycin.

Retinoic acid가 흰쥐 입천장발생에 미치는 영향에 관한 전자현미경적 연구

김원규(Won-Kyu Kim),우봉식(Bong-Sik Woo),남용석(Yong-Seok Nam),백두진(Doo-Jin Paik),윤지희(Jeehee Youn),배성만(Sung-Man Bae),정호삼(Ho-Sam Chung) 대한체질인류학회 2001 대한체질인류학회지 Vol.14 No.3

Retinoic acid(RA)는 피부과 영역에서 여드름의 치료제로 많이 사용되고 있으나 임신 모체에 다량 노출되면 태아의 머리얼굴부위를 포함한 옴의 여러 장기에서 기형을 유발하는 것으로 알려져 있어 그 사용이 제한되고 있는 약제이다. 특히 입천장의 발생파정에서 RA는 상피세포와 간엽세포의 분화에 직정적인 영향을 주어 입천장틈새를 일으키는 것으로 알려져 있으나 미세구조의 변화에 관한 보도는 드물다. 이에 연구자는 정상 적인 입천장발생과 비교하여 RA를 투여 받은 흰쥐태아에서 입천장돌기 상피세포와 입천장돌기 내 간엽세포에 서 미세구조의 변화를 관창하고자 본 실험을 시행하였다 온 실험에서는 체중 200gm 내외의 Sprague-Dawley계 암수 흰쥐를 교배시켜 임신된 태아를 실험동물로 사용하였다. 실험군은 임신 제10일에 100mg/kg의 RA(Sigma Co.)를 olive oil에 녹여l회 경구 투여하였고, 대조 문에는 olive oil을 경구 투여하였다. 입천장돌기가 융합되지 않은 시기인 임신 제14일의 태아흰쥐와 입천장돌기가 융합한 제16일의 태아에서 입천장돌기를 적충하고 전자현미경용 조직표본을 제작, 관찰하여 다음과 같은 결과를 얻었다 l. 대조군 입천장상파는 태영 재14일에는 두 층으로 구성되어 있었고, RA 투여군에서는 세포가 증식된 소견을 보였다 태령 제16일 대조군에서 정중융합선상과 구강상피가 인정한 지역에서는 다양한 형태의 자사세포가 많이 관창되었으나 RA 여문에서는 입천장돌기가 융합되지 않았고 중층의 상피세포로 이루어져 있었으며, 세포자멸은 거의 관찰되지 않았고 괴사중인 세포가 관창되었다. 2. 대조군 입천장돌기 내중간엽세포 (mesenchymal cell)는 세포외기질을 향하여 돌출된 세포줄기와 난원형의 핵이 관찰되었고, 세포질 내에는 잘 발달된 과립세포질세망(rough endoplasmic reticulum), Golgi 복합체와 사립체가 관찰되었다. RA 투여군에서는 수조가 극도로 위축된 Golgi 복합체와 수조가 단절 및 낭상화되거나 ribosome이 탈략된 과립세포질세망과 이중막이 파괴되고 사립체능선이 용해되거나 종장된 사렵체가 관찰되었으며 뭇소 포체와 같은 이차용해소체와 당원과립이 세포질 전반에 경쳐 산재된 소견을 보였다. 이상의 경과를 종항하면 RA를 투여받은 발생 중인 입천장돌기의 상피세포에서는 대조군과 달리 세포자멸이 거의 관찰되지 않았고, 중간엽세포에서는 세포내소기관이 극도로 손상받은 소견을 나타낸 바 RA는 중간엽세포에 직접적인 독성으로 작용하여 입천장틈새를 유발하는 것으로 생각되며, 특히 입천장상피에서 세포자멸이 거의 관창되지 않는 것은 RA가 입천장의 정상발생에 필수적인 과정인 세포자멸에 영향을 주는 것으로 생각된다.

류마티스관절염 환자로부터 분리한 윤활막섬유모세포의 TRALL에 대한 세포사멸 반응 및 TRAIL 수용체 발현 양상에 대한 조사

조원길(Won-Gil Cho),임현성(Hyun-Sung Leem),백두진(Doo-Jin Paik),정호삼(Ho-Sam Chung),김원규(Won-Kyu Kim),최충혁(Chung-Hyuk Choil),윤지희(Jeehee Youn) 대한체질인류학회 2001 해부·생물인류학 (Anat Biol Anthropol) Vol.14 No.3

류마티스관절염은 염증성 자가면역 질환의 일종으로 윤활막이 증식(hyperplasia)되는 소견을 나타내며, 이는 일부 형질전환된 특성을 지닌 윤활막세포에서 apoptosis의 장애가 일어나는 경과로 알려졌다. TNF-related apoptosis inducing ligand (TRAIL)은 TNF ligand superfamily의 일원으로, 두 수용체(TRAILR-l과 2)를 통해 세포사영 신호를 세포 내로 전달한다. 반면 두 decoy 수용체인 TRAILR-3와 4는 TRAIL 유도 세포사멸 경로를 방해한다. 류마티스관절염 판자의 윤활악서 1 포가 TRAIL 에 의하여 세포사영 반응이 일어나는지 조사하기 위하 여, 각각 두 명의 류마티스관절염 환자와 골관정염 환자로부터 분리 애양한 윤활약섬유오세포주들은 human TRAIL호 자극한 후 Mteassay를 실행하였다. 두 류마티스관정염 세포들은 TRAIL 에 반응하여 세포 생존융이 강소한 반면 , 골관정염 세포들은 TRAIL에 우반응을 보이거나 류마티스관정엽 세포에 비해 현저히 감소된 민강 성율 보였다 RT-PCT 과 연역조직화학적 분켜 결과 , TRAILR-I, -2 , -3의 발현 양상은 모든 세포주에서 유사했 으나 , TARILR-4 의 발현 정도는 류마티스 관절엽 세포에서 골판절엽 세포에 비해 강소한 경과를 보였다 그러므로, 이상의 결과들은 윤활막섬유모세포는 류마티스관절염 진행 과정 중 TRAIL을 통한 세포사멸에 대하여 민감성을 획득하며, 이런 세포사멸 신호는 TRAILR-4 발현의 조정에 일부 의존적일 것 2. 로 추정된다

아황산가스가 흰쥐 허파조직내 Laminin 활서에 미치는 영향에 대한 면역조직학적 연구

배성만,정호삼,서윤경,백두진,김원규,윤지희 한양대학교 의과대학 2000 한양의대 학술지 Vol.20 No.2

Sulfur dioxide (SO_2), a kind of air pollutant, causes harmful damage to human body. In particular, inhalation of sulfoxide dioxide has been demonstrated to result in the injury to the upper respiratory duct. However, mechanisms by which SO_2 affects these tissues remain to be clarified. In the present study, to investigate the mechanism of SO_2 effects, the influence of SO_2 exposure was examined in terms of the injury of lung and the expression pattern of laminin in the basal lamina. The basal lamina is an important tissue for the regulation of internal respiration by composing of air-blood barrier. Sprague-Dawley rats repetitively exposed to a mixture of O_2 gas and SO_2 gas (250 ppm) for 30 minutes a day were sacrificed to observe the distribution of laminin in the alveolar septum as well as the morphological alteration of alveoli using immunohistological methods. The resutls we observed were as follows: 1. Alveoli from SO_2-exposed rats (for 5 days) were strongly stained with anti-laminin antibody, suggesting laminin expressed at the high level, at week 1 to 3 upon exposure to SO_2 2. At week 1 to 3 after exposure of rats to SO_2, alveolar septa were collapsed, leading to the reduction of alveolar volume along with morphological changes to irregular shapes. 3. At week 4 to 6 after exposure of rats to SO_2, alveoli were weakly stained with anti-laminin antibody, suggesting laminin expression was decreased during this period. 4. Rats sacrificed at week 7 upon exposure to SO_2 exhibited the expansion of new alveoli and the expression of laminin was partially recovered up to the intermediate level. Taken together, these results demonstrate that the expression of laminin was enhanced in the early phase, followed by downregulation in the late phase. Moreover, lung injury and resolution were correlated with the level of laminin. Thus, these results suggest that SO_2 suppresses the expression of laminin, which may be associated with the neo-generation of lung tissue.

Retinoic Acid가 흰쥐 태자 혀조직의 분화와 Laminin 합성에 미치는 영향에 대한 연구

김혜주,정호삼,서윤경,백두진,김원규,윤지희,이방헌 대한췌담도연구회 2000 대한췌담도연구회지 Vol.5 No.4