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새로운 Baculoviurs 전이벡터를 이용한 Escherichia coli β-galactosidase 유전자의 발현
우수동,김우진,김혜성,진병래,강석권 한국미생물생명공학회 ( 구 한국산업미생물학회 ) 1996 한국미생물·생명공학회지 Vol.24 No.1
국내에서 분리된 BmNPV를 이용하여 제작된 새로운 전이벡터 pBmKSK1에 외래 유전자로서 E. coli lacZ 유전자를 클로닝하고 재조합 바이러스를 제작하였다. 재조합 바이러스에 대하여 Southern blotting 분석을 실시하여 lacZ 유전자의 존재를 확인하였으며, 재조합 바이러스가 접종된 세포의 SDS-PAGE 및 Western blotting 분석을 통하여 β-galactosidase의 발현을 확인하였다. 재조합 바이러스의 발현효율을 누에 세포주 및 유충에서 비교 조사한 결과, 유충에서 더욱 높은 발현량을 보임을 확인하였다. To investigate the expression efficiency of new transfer vector of Bombyx mori nuclear polyhedrosis virus (BmNPV), Escherichia coli lacZ gene was inserted into new transfer vector pBmKSK1, under the control of polyhedrin promoter and expressed in BmN-4 cells coninfected with transfer vector pBmKSK1-LacZ and vild type BmNPV genome, and analysed by Southern blotting. The expression of β-galactosidase was characterized by SDS-PAGE, Western blotting and β-galactosidase activity assay. The results showed that the level of expression in silkworn larvae was higher than that of BmN-4 cells.
곤충병원성 곰팡이 중심의 국내 천연식물보호제 연구 현황
우수동 한국농약과학회 2022 한국농약과학회 학술발표대회 논문집 Vol.2022 No.11
유기합성농약의 여러 가지 부작용에 따라 그를 대체하거나 보완하기 위한 수단으로서 다양한 천연식물보호제(생물농약)의 연구개발 및 실용화가 활발히 이루어지고 있다. 그 중, 살충제 분야에서는 곤충의 병원성 미생물을 이용한 미생물 살충제가 가장 널리 이용되고 있을 뿐만 아니라, 연구개발 또한 활발히 진행되고 있다. 미생물 살충제의 개발에는 곤충병원성 세균, 바이러스, 곰팡이나 선충 등 다양한 미생물들이 이용되고 있으며, 각 미생물의 특성에 따라 그리고 대상 해충에 따라 선택적으로 사용되고 있다. 현재까지는 곤충병원성 세균인 Bacillus thuringiensis (Bt)를 중심으로 미생물 살충제의 시장이 형성되고 있으나, 최근에는 곰팡이 살충제의 시장이 점차 확대되고 있다. Bt 살충제는 주로 나비목 해충의 유충에 대해서 높은 효과를 보이지만 그 적용 범위나 방제 대상의 확장에는 거의 한계에 이르고 있을 뿐만 아니라, 해충의 저항성 발생 또한 문제점으로 지적되고 있다. 그에 비해 곰팡이 살충제는 나방류, 딱정벌레류, 응애류, 가루이류, 노린재류, 깍지벌레류 등 매우 광범위한 해충에 대해 효과적일 뿐만 아니라, 알에서부터 성충 시기까지 거의 모든 발육단계에서 효과적이기 때문에 그 연구개발이 활발히 진행되고 있다. 아직 천연식물보호제로서 살충제의 이용이 활발하지 못한 국내에서, 최근 곰팡이 및 Bt를 이용한 미생물 살충제와 곰팡이의 대사산물과 식물추출물을 이용한 생화학 살충제의 제품화를 위한 연구개발이 진행 중이다. 이들 살충제는 관행적인 방법으로는 방제가 어려운 진딧물이나 응애류 그리고 깍지벌레와 같은 흡즙성 미소 해충들과 주요 나방류 해충들을 우선적인 방제 대상으로 연구개발을 수행중에 있다.
새로운 Baculovirus 전이벡터를 이용한 Escherichia coli ${\beta}$-galactosidase 유전자의 발현
우수동,김우진,김혜성,진병래,강석권,Woo, Soo-Dong,Kim, Woo-Jin,Kim, Hye-Seong,Jin, Byung-Rae,Kang, Seok-Kwon 한국미생물 · 생명공학회 1996 한국미생물·생명공학회지 Vol.24 No.1
To investigate the expression efficiency of new transfer vector of Bombyx mori nuclear polyhedrosis virus (BmNPV), Escherichia coli lacZ gene was inserted into new transfer vector pBmKSK1, under the control of polyhedrin promoter and expressed in BmN-4 cells and larvae of silkworm, Bombyx mori. The recombinant virus containing lacZ gene was isolated from BmN-4 cells coinfected with transfer vectro pBmKSK1-LacZ and wild type BmNPV genome, and analysed by Southern blotting. The expression of ${\beta}$-galactosidase was characterized by SDS-PAGE, Western blotting and ${\beta}$-galactosidase activity assay. The results showed that the level of expression in silkworm larvae was higher than that of BmN-4 cells.
우수동,김혜성,김우진,진병래,강석권 한국잠사학회 1995 한국잠사곤충학회지 Vol.37 No.2
To enhance expression of foreign gene by the novel expression vector, pBmKSK1, of Bombyx mori nuclear polyhedrosis virus, E. coli β-galactosidase gene expressing recombinant virus was infected in BmN-4 cells and various concentrations of silkworm hemolymph were added to the recombinant virus-infected BmN-4 cells containing fetal bovine serum. The expressione efficiency of foreign gene was determined by β-galactosidase activity in the culture media. The results showed that the silkworm hemolymph was effective to expression of foreign gene in the BmN-4 cells, suggesting that the silkworm hemolymph could be substituted for fetal bovine serum in the BmN-4 cells to enhance expression of foreign gene.
누에 및 Autographa californica 핵다각체병 바이러스에 대한 유전자 재조명
우수동,박범석,박지현,정인식,양재명,강석권 한국응용곤충학회 1993 한국응용곤충학회지 Vol.32 No.4
숙주범위가 서로 다른 Autographa californica NPV(AcNPV)와 Bombyx mori NPV(BmNPV)를 Spodoptera frugiperda(Sf9) 또는 Bombyx mori(BmN-4)의 세포에 동시감염(coinfection)시킨 후, 숙주범위가 확장된 재조합 바이러스를 Sf9세포에서 10종 BmN-4세포에서 2종씩 플라크 순화하여 선발하였다. 각 재조합 바이러스 DNA의 제한효소 분석결과는 한번 이상의 재조합이 일어났음을 보여주었다. 재조합 바이러스 RecB-8의 전자현미경 관찰결과는 다각체의 모양이 모바이러스인 AcNPV나 BmNPV와는 전혀 다른 정사면체 모양이었으며 또한, 모바이러스와는 달리 virion이 다각체에 거의 매립되어 있지 않은 특징을 보였다. Twelve recombinant viruses with wider host range were plaque purified after coinfectian of Autographa cahjornica and Bombyx mOT! NPVs into Sf9 ar BmN-4 cells. Restriction endonucleases analysis of the recombinant's DNAs showed that the recombinatIOn between AcNPV and BmNPV genomes had occurred more than once. When the recombinam RecB-8, derived from BrnN-4 cells, was observed by electron rntcroscopy, the shape of the polyhedron was a regular tetrahedron, and few virions were occluded into a polyhedron.
Characterization of the polyhedrin gene of Spodoptera litura nucleopolyhedrovirus isolated in Korea
우수동,Yeon-Ho Je,Byung-Rae Jin 한국응용곤충학회 2005 Journal of Asia-Pacific Entomology Vol.8 No.3
A local strain of Spodoptera litura nucleo-polyhedrovirus (SlNPV-K1) was isolated from in-fected larvae of a Korean population of S. litura.Degenerate PCR primer set for the polyhedrin gene successfully amplified the partial polyhedrin gene of SlNPV-K1. The sequencing results showed that the about 430 bp PCR product was a fragment of cor-responding polyhedrin gene. Southern blot analysis of SlNPV-K1 restriction fragments was performed by using 430 bp polyhedrin PCR product of SlNPV- K1 as a probe. As the result, we identified the loca-tion of the polyhedrin gene within the approximately 6 kb EcoR I-, 3.5 kb Hind III-, 20 kb Xho I- and 4 kb Cla I-digested fragments, respectively. TheHind III 3.5kb fragment was cloned for sequencing the complete polyhedrin gene. Nucleotide sequence analysis indicated the presence of an open reading frame of 747 nucleotides, which could encode 249 amino acids with a predicted molecular mass of 31 kDa. The nucleotide sequences within the codingregion of SlNPV-K1 polyhedrin shared maximum 94.0% similarity with the polyhedrin gene from pre-vious reported other SlNPVs but were most closely related to Spodoptera littoralis NPV with 99.0% sequence identity. These sugest that the SlNPVisolate from Korea is a different SlNPV strain.
Propagation of Bombyx mori Nucleopolyhedrovirus in Nonpermissive Insect Cell Lines
우수동,노종열,최재영,진병래 한국미생물학회 2007 The journal of microbiology Vol.45 No.2
This study addresses the susceptibility of Spodoptera frugiperda (Sf9 and Sf21), Trichoplusia ni (Hi5), and S. exigua (Se301) cells to the Bombyx mori nucleopolyhedrovirus (BmNPV). Although these cells have classically been considered nonpermissive to BmNPV, the cytopathic effect, an increase in viral yield, and viral DNA synthesis by BmNPV were observed in Sf9, Sf21, and Hi5 cells, but not in Se301 cells. Very late gene expression by BmNPV in these cell lines was also detected via β-galactosidase expression under the control of the polyhedrin promoter. Sf9 cells were most susceptible to BmNPV in all respects, followed by Sf21 and Hi5 cells in decreasing order, while the Se301 cells evidenced no distinct viral replication. This particular difference in viral susceptibility in each of the cell lines can be utilized for our understanding of the mechanisms underlying the host specificity of NPVs.