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Src Kinase requires for SPIN90 phosphorylation
여명구(Myeong Gu Yeo) The Research and Information Service 2012 남부대학교 논문집 Vol.12 No.-
Src kinase is a member of Src family kinase and mediated various cellular signaling including embryonic development, cell adhesion and spreading, cell proliferation, and cell migration and protection from apoptosis. SPIN90 (SH3 protein interacting with Nck, 90 kDa) is an Nck binding protein and functioning as actin cytoskeleton dynamics. The purpose of the study is examining the SPIN90 phosphorylation depends upon Src kinase using SYF (Src, Yes, Fyn deficient) mouse embryo fibroblast (MEF). This study clearly showed that SPIN90 did not phosphorylated in SYF MEFs, but Src reintroduced SYF MEFs showed SPIN90 phosphorylation in immunoprecipitation examination. In addition, when investigate direct interaction between SPIN90 and focal adhesion proteins, SPIN90 was associated with pl30CAS (Crk associated substrate) but not with FAK (focal adhesion kinase). This result indicated that Src kinase requires for SPIN90 phosphorylation, and SPIN90 linked with p130CAS protein during the cellular signaling. Additionally, SPIN90 localized in peripheral membrane areas in cells v-Crk expressing p130CAS MEFs. This finding suggests that SPIN90 participated in membrane dynamics thus regulating cell spreading.
류영숙(Young Suk Ryu),여명구(Myeong Gu Yeo) 한국산학기술학회 2023 한국산학기술학회논문지 Vol.24 No.4
본 연구는 6종류의 천연 추출물이 구강질환 예방 및 치료 소재로 활용 가능성을 평가 하였다. 치주질환에 효과적인 물질을 선별하기 위해 죽엽(BBL), 여주열매(BMF), 석류열매(POF), 옥수수수염(CSF), 우엉뿌리(BR), 민들레뿌리(DR) 추출물에 대한 일련의 검사를 실시했다. 항산화 활성은 2,2-디페닐-1-피릴하이드라질(DPPH), 슈퍼옥사이드 디스무타아제(SOD) 유사 활성에 의해 평가하였다. 구강질환 관연 미생물을 선정하여 한천배지확산법을 수행하였다. 세포독성 시험은 3-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-2,5-디페닐-2H-테트라졸륨 브롬화물(MTT) 분석법을 사용하여 측정되었다. RAW 264.7 세포에서 지질 다당류(LPS)에 의해 산화질소(NO) 생성에 대한 억제율을 그리스(griess) 시약으로 조사하였다. 항산화능 결과에서 POF 추출물은 125 μg/mL 농도에서 68 %의 가장 높은 항산화 억제율을 보였다. SOD 효소 활성은 POF 추출물이 높은 활성을 보였으며, BBL 추출물은 SOD 활성을 나타내지 않았다. POF 추출물은 구강점막 표면에 증식하는 칸디다 알비칸스(Candida albicans )와 충치유발균 스트렙토코쿠스 뮤탄스(Streptococcus mutans), 스트렙토코쿠스 소브리누스(Streptococcus sobrinus) 의 감소에 효과적이었다. 세포생존률 측정 결과 POF 및 CSF 추출물은 25 ug/ml 미만의 농도에서 90 % 이상의 세포 생존율이 확인되었다. NO 실험 결과 POF 추출물 2.5 μg/mL 농도에서 58.2 %의 NO 억제 효과가 나타났다. 또한, DR 추출물은 L929 세포에 대한 세포독성을 보이지 않은 반면, DR 추출물이 FaDu세포(하인두 편평암세포)에 미치는 영향은 5-100 μg/mL 범위에서 세포성장 억제를 보이는 것으로 나타났다. 따라서, POF와 DR추출물은 구강질환 예방 또는 치료에 도움을 줄 수 있는 소재임을 확인할 수 있었다. This study evaluated the effect of six natural extracts on oral disease prevention by screening effective materials for periodontal disease. Bamboo leaf (BBL), bitter melon fruit (BMF), pomegranate fruit (POF), corn silk flower (CSF), burdock root (BR), and dandelion root (DR) extracts were subjected to various assays. Antioxidant activities were determined through the 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) and superoxide dismutase (SOD)-like activity assays, whereas cytotoxicity was assessed using the 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl –2H-tetrazolium bromide (MTT) assay. The anti-inflammatory activity was examined by subjecting RAW 264.7 cells to the lipopolysaccharide (LPS) inhibition assay and determining nitric oxide (NO) inhibition by Griess reagent. The POF extract showed highest DPPH inhibition (68%) at 125 μg/mL. In addition, high SOD enzyme activity was obtained with the POF extract, whereas the BBL extract showed no SOD activity. Treatment with POF extract was also effective in reducing the bacterial loads of Candida albicans, Streptococcus mutans, and Streptococcus sobrinus. Furthermore, over 90% cell viability was confirmed at concentrations less than 25 μg/mL of POF and CSF extracts. The result showed 58.2% inhibition of NO production at 2.5 μg/mL of the POF extract. Although the DR extract showed no cytotoxicity to L929 cells, the extract exerted toxicity on FaDu cells (head and neck carcinoma cells) in the range of 5-100 μg/mL. Our results indicate the potential application of POF and DR extracts for the prevention or treatment of oral diseases.
Pseudomonas sp. PY002에서 Exotoxin A의 생성에 미치는 철 이온의 영향과 Exotoxin A 유전자의 클로닝
최선아,김호상,최지영,강정숙,김춘성,김덕례,김영주,여명구,박열,Choi, Sun-Ah,Kim, Ho-Sang,Choi, Ji-Young,Kang, Jeong-Suk,Kim, Chun-Sung,Kim, Duck-Lae,Kim, Young-Ju,Yeo, Myeong-Gu,Park, Yeol 한국미생물학회 1999 미생물학회지 Vol.35 No.1
Pseudomons sp. PY002의 exotoxin A 의 발현 양상을 관찰하기 위하여 P.aeruginosa PAO1의 anti-exotoxin A와 immunoblot hybridization을 실시한 결과 배지내에 유용 가능한 철이 고갈됨에 따라 exotoxin A의 발현양은 점차적으로 증가하는 양상을 보였으며, CAS 배지에 점적한 배양 상층액에서 siderophore의 발현양도 증가함을 보였다. P.sp.PY002 의 genomix library를 제조하여, exotoxin A를 분비하는 2개의 클론을 선별하려 pETA23과 pETA42 로 명명한 후, 반응성이 강한 Peta42를 선발하였다. pETA 42는 약 1.7kb 크기의 insert를 가지며, 양쪽 말단에 cloning site 인 pstI site 가 존재하며 2개의 NcoI, 1개의 PvuII, 1개의 SstI , 3개의 SmaI, 1개의 KpnI, 3개의 HaeII, 1개의 EcoRI site가 존재하였다. By SDS-polyacrylamide gel elcctrophoresis (SDS-PAGE) and immunoblot analysis that a protein with 66,000 daltons in size was recognized by P. aeruginosa anti-exotoxin A from P. sp. PY002. The yields of exotoxin A in P. sp. PY002 culture were influenced by the concentration of iron in the culture media. Increasing of the exotoxin A production and siderophore production was made slight increasing in the MKB medium. On the other hand, to clone the gene encoding the exoloxin A genomic library of P. sp. PY002 was constructed in pBluescript SK(+). From this library a exotoxin A homologous gene was isolated by immunological hybridization method using P. aemginosa anti-exoloxin A as a probe. Two putative clones were isolated and designated pETA23 and pETA42. Thc restriction analysis ol pETA42 demonstrated that thc 1760 bp insert contained one NcoI, PvuII, SstI, Kpnl and EcoRI site and three SmaI and HaeD sites.
McCoy 세포에서 Chlamydia trachomatis의 병원성 인자에 관한 연구
강정숙,최지영,차영주,김영주,김덕례,여명구,박열 조선대학교 생명과학연구소 1998 생명과학 연구 Vol.6 No.-
본 연구는 병원성 세균인 Chlamydia trachomatis(C. trachomatis)가 숙주세포에침습시 C. trachomatis의 병원성 인자와 C. trachomatis와 상호작용하는 숙주 세포막의 인자를 규명함으로써 숙주세포에 대한 감염율을 향상시켜 보다 향상된 진단 방법을 개발하기 위하여 수행하였다. C. trachomatis로 감염된 세포에서 기본소체의 막 단백질을 분리한 결과 각 혈청형의 39 kDa과 42 kDa에서 major outer membranes(MOMPs)이 관찰되었으며, 혈청형 E와 G의 MOMPs는 42.5 kDa으로 동일하였지만 혈청형 F, H, I, 그리고 K의 MOMPs는 각각 다르게 관찰되었다. C. trachomatis가 숙주세포로 침습시 관련된 병원성 인자에 대하여 조사하고자 단층세포로 배양된 배양용기에 C. trachomatis를 24, 48 그리고 73시간대별로 접종시켜 관찰한 결과 72시간의 MOMPs의 양이 가장 많이 증가하였으며 이 결과로 MOMPS이 C. trachomatis 병원성에 중요한 작용을 함을 확인할 수 있었다. C. trachomatis가 침습시 숙주세포의 막 단백질 변화양상을 관찰하기 위해 정상세포와 C. trachomatis로 1, 2, 3 그리고 4시간대별로 접종 시간을 달리한 숙주세포의 막 단백질을 분리한 결과 42 kDa의 단백질 양이 Chlamydia에 감염된 세포 내에서 증가됨을 관찰할 수 있었다. 이로 42 kDa의 막 단백질이 침습시 숙주세포 표면에 대한 수용체로서 작용함을 알 수 있었다. The present study was performed to analyze the pathogenic factors involved in the invasion process of Chlamydia trachomatis(C. trachomatis) into McCoy cells. In this study, elementary bodies(EBs) of C. trachomatis serotypes(E, F, G, H, I, K and LGV) could be isolated by the method of Percoll density gradient centrifugation and the pathogens of serotypes were also compared from whole-cell lysates by using sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel elelectrophoresis. All chlamydial serotypes showed a single predominant protein ranging from 39 to 42 kDa. The major outer membrane proteins(MOMPs) of the E and G serotypes had an identical molecular weight of 42.5 kDa. In contrast, the MOMPs of the F, H, I and K serotypes were showed different molecular weights of MOMPs. By immunoblotting with anti-MOMP antibody it was revealed that the quantify of MOMPs was time-dependently increased when McCoy cells were infected with Chlamydia for 24, 48 and 72 hr. These results indicated that MOMPs are closely related to chlamydial infection into the host cell.