포스터 발표 : Erythropoietin에 저항성을 보인 유지 혈액투석 환자에서 발견된 진성 적혈구 무형성증 1예

한지숙 ( Han Ji Sug ),권순길 ( Kwon Sun Gil ),김혜영 ( Kim Hye Yeong ),신경섭 ( Sin Gyeong Seob ) 대한신장학회 2003 춘계학술대회 초록집 Vol.22 No.1

급성백혈병에서 다제약제내성 인자(P-glycoprotein)의 표현과 치료예측

정현철 ( Jeong Hyeon Cheol ),한지숙 ( Han Ji Sug ),고은희 ( Go Eun Hui ),이선주 ( Lee Seon Ju ),김주항 ( Kim Ju Hang ),노재경 ( No Jae Gyeong ),고윤웅 ( Go Yun Ung ),김병수 ( Kim Byeong Su ) 대한내과학회 1993 대한내과학회지 Vol.44 No.3

연구배경 : 급성백혈병은 진단후 1차 관해유도 약물치료에 의해 60~80에서 완전관해가 유도되나 1년내에 50%의 환자에서 재발하며, 이들에게 재차 관해유도 치료가 시도되어도 관해율은 30~50%에 불과하다. 그리고 1차 관해유도치료에 불응성인경우 2차 약제로 관해유도 약물요법이 시행되나 그 성적 역시 저조하여 백혈병환자의 5년 무병생존율은 25%에 불과하다. 이같이 백혈병 치료실패율이 높은 원인중 항암약제내성이 중요인자이며, 약제내성중에서도 특히 다제 약제 내성 유전자(multidrug resistant gene; MDR1)의 활성화에 의해서로 고차내성이 없는 4가지 약제에 내성을 나타내는 다제약제내성이 중용한 원인이다. 방법 : 본 연구에서는 급성 백혈병환자에서 MDR1 유전자의 다제약제내성이 표현되는 과정중 DNA와 mRNA는 dot blot 분석으로, 최종산물인 P-glycoprotein은 면역조직화학적염색법(immunohistochemical staining method)으로 유전자의 증폭(amplification) 혹은 과표현(overexpression) 여부를 관찰하여 다제약제내성의 존재를 증폭 혹은 과표현 과정중 용이하게 진단할 수 있는 방법을 조사하고, 아울러 다제약제내성의 발현도를 백혈병 각 질병상태별로 조사하였다. 그리고 다제약제내성의 환자 치료결과 예측 및 치료약제 선택기준으로서의 임상적 유용성을 조사하기 위하여 다제약제내성 발현여부와 치료결과와의 상관성 및 다제약제내성 발현여부와 생체외 약제감수성 검사에 의한 약제내성과의 상관성을 조사하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 결론 : 1) 다제약제내성은 DNA에서는 0%(0/26), mRNA에서는 7.7%(2/26), P-glycoprotein에서는 55.4%(41/74)관찰되었다. 2) P-glycoprotein 과표현은 원발성 백혈병 진단시 33.3%, 재발시 78.6%, 치료 불응성시 88.9%에서 관찰되어 약제에 노출시 발현빈도는 증가하였다(p<0.01). 3) 속발성 백혈병은 원발성 백혈병에 비해 P-glycoprotein 과표현 빈도가 높은 경향이었다(p=0.18). 4) 진단시 P-glycoprotein을 과표현하는 경우 관해유도율이 낮은 경향이었다(p=0.11). 5) P-glycoprotein을 이용한 관해유도실패 예측도는 수용할 만 하였으나(84%), 관해유도 예측도는 낮았다(54%). 6) P-glycoprotein 과표현시 adriamycin, vincristine에 대한 약제내성 발현 빈도가 P-glycoprotein을 과표현하지 않는 경우보다 높았다(p=0.44). 7) P-glycoprotein을 이용한 adriamycin, vincristine에 대한 약제내성 예측도는 수용할 만 하였으나(각각 75%, 81%), 약제 감수성 예측도는 낮았다(각각 57%, 43%). 8) P-glycoprotein을 과표현시 verapamil 병용에 의한 다제약제내성의 변화는 adriamycin에서 33.3%, vincristine에서 16.7%였다. 결론 : 이상의 결과로 면역조직화학적염색에 의한 P-glycoprotein 과표현 여부 관찰이 다제약재내성 존재 확인의 간편한 검사방법이며, 이를 치료결과 예측의 유용한 기준으로 사용할수 있을 것으로 생각된다. 그리고 다제약제내성이외의 약제내성 기전을 고려하여 생체외약제 감수성 검사를 병행, 적절한 약제선택을 함으로써 급성백혈병의 치료효과를 증가시킬 수 있을 것으로 기대된다. Background : The complete remission rate of the first induction chemotherapy is 60~80% in acute leukemia. Most patients who achieve complete remission will ultimately relapse within the first year and are much less responsive to the therapy with a brief second remission in a minority. Acquisition of drug resistance in cellular level is the major cause of treatment failure. Therefore, the identification of the mechanisms of drug resistance is an important goal of current treatment. One mechanism that has been extensively studied in vitro is a multidrug resistance (MDR) mediated by P-glycoprotein which is the product of the MDR1 gene, but there is a little information on it`s clinical application. Methods : In order to find out the suitable method for detecting MDR, and furthermore, to see if the detection of MDR can be used in predicting treatment results, here, the existence of MDR1 amplification/overexpression in DNA, RNA and P-glycoprotein level was studied. Results : P-glycoprotein overexpression by immunohis-tochemical staining method was more sensitive (55.4%) than KNA amplification (0.0%) and mRNA overexpression (7.7%) in detecting MDR in acute leukemic patients. The incidence of P-glycoprotein overexpression was higher in relapsed (78.6%) and in refractory patients (88.9%) than in initial state (33.3%). There was a tendency of low complete remission rate in patients with primary P-glycoprotein overexpression. The incidence of acquired P-glycoprotein overexpression was 71.4%. When comparing the correlation between the P-glycoprotein overexpressin and the clinical results, the predictability for th treatment failure in P-glycoprotein overexpressing patients was acceptable (84%), but the predictability for the remission in P-glycoprotein non-expressing patients was low (54%). These predictability were similar to the predictability for drug resistance by comparing the correlation between the P-glycoprotein overexpression and in vitro cytotoxic assay results; the predictability for drug resistance to adriamycin in P-glycoprotein overexpressing patients was acceptable (75%), but the predictability of drug sensitivity in P-glycoprotein non-expressing patients was low (57%). Combination of verapamil and cytotoxic drug reversed MDR in 33.3% for adriamycin and 16.7% for vincristine in P-glycoprotein overexpressing patents. Conclusions : These results suggest the P-glycoprotein by immunohistochemical staining method could be a useful method for predicting treatment results. However, the low predictability for the remissionn in P-glycoprotein non-expressing patients, suggested by some other drug resistance mechanisms, can be overcome by combination with in vitro cytotoxic assay. This fact might contribute to the better treatment results in acute leukemia by optimization of drug selection.

과립구-단구 집락촉진인자가 급성백혈병 골수세포 장기배양에 미치는 영향 - 백혈병세포 생체외 골수정화법에의 적용가능성 검토 (1) -

민유홍 ( Min Yu Hong ),고윤웅 ( Go Yun Ung ),이선주 ( Lee Seon Ju ),한지숙 ( Han Ji Sug ) 대한내과학회 1993 대한내과학회지 Vol.44 No.3

연구배경 : 급성백혈병골수세포 장기배양시 백혈병전구세포의 증식을 소실되고, 정상조혈기능은 회복되는 백혈병세포 조혈상의 변화가 관찰될 수 있다. 실제로 일부 급성 백혈병환자의 골수를 장기배양한 후, 배양된 세포로 자가골수이식을 시행하여 골수생착 및 재발없이 경과 관찰중에 있음을 보고한 예가 있다. 그러나 장기골수 배양에 의한 자가골수이식술이 보다 효과적이 되기 위해서는 백혈병세포 정화효과 및 정상 조혈기전의 회복이 보다 증가되는 등 장기골수배양법의 개선이 필요하다. 본 연구에서는 자가골수이식을 위한 장기골수배양 골수정화 효과를 증가시키고 배양세포수를 증가시키는 방법의 일환으로 급성백혈병 골수세포를 유전자재조합 과립구-단구 집락촉진인자(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor; rhGM-CSF)로 24시간 단기배양후 장기배양하여, 배양기내 백혈병세포 감소 및 과립구-단구 조혈기능 변화를 검토하였다. 방법 : 급성백혈병환자 22예의 골수단핵세포를 rhGM-CSF (100ng/ml)로 24시간 단기배양 후 장기골수배양을 시행하였다. RHGM-CSF로 자극하지 않은 동일한 수의 백혈병세포는 대조군으로 하였으며, 배양전기간에 걸쳐 정상골수세포 장기배양상과 비교하였다. 장기골수배양은 25㎠ 배양기내 2~3×10^7개의 세포를 10ml 배양액에 부유시켰으며, 배양액은 12.5% fetal bovine serum, 12.5% horse serum이 포함된 배양액을 사용하였다. 매주 배양상을 역위현미경으로 관찰 후 배양액의 반을 교환하였으며, 추출한 배양액내 배부착세포는 세포수 측정, 형태학적 관찰 및 조혈전구세포배양을 시행하였다. 배양종료시에는 부착세포도 역시 같은 방법으로 실험하였다. 결과 : 1) 배양 1주째 GM-CSF 자극군에서 유의한 비부착세포의 증가가 관찰되었으며 이러한 증가는 분화성숙된 대상 및 분절과립구의 증가에 기인하였다. 백혈병아세포의 차이는 없었다. 배양 2주 이후 부착세포층의 형성 및 융합이 완료된 후에는 비부착세포수의 차이는 소실되었다. 2) GM-CSF 자극군에서 대상 및 분절과립구가 정상골수세포 장기배양시의 수준으로 증가하였던 경우는 GM-CSF 자극군에서 배양 1주째 8예(36%), 배양 2주째 13예(59%)로 대조군의 각각 4예(19%), 8예(36%)에 비해 많은 경향을 보였다. 과립구 및 골수아구가 정상화되는 경우는 배양 2주째가 가장 많았다. 3) 장기골수배양 조혈전구세포배양시 배양 1주째 정상세포집락을 보인 자극군 6예의 골수구-단구계 세포집락은 배양기당 평균 5,275±1,156로 대조군의 3,039±1,024에 비해 유의하게 많았다. 백혈병세포집락이 관찰되었던 4예의 평균 세포집락은 GM-CSF 자극군에서 240±196으로 대조군의 497±400에 비해 통계적 의의는 없었으나 감소되는 경향을 보였다. 배양 2주 이후의 이러한 차이는 관찰되지 않았다. 4) 배양 4주째 부착세포수 및 부착세포 조혈전구세포 배양 결과는 양군간의 유의한 차이를 보이지 않았다. 결론 : 급성백혈병 골수세포의 장기배양전 GM-CSF의 단기자극은 부착세포층이 완전히 형성되어 조혈조절작용을 하기 전인 배양 1주째 일부 예에서 자극된 골수계 조혈전구 세포의 장기배양내 증식 및 분화를 유도하여 비부착세포층내 분화성숙된 과립구 및 정상조혈전구세포를 증가시키며, 백혈병전구세포의 감소를 유도할 수 있는 가능성을 제시하였다. 그러나 배양기내 조혈조절작용에 의해 배양 2주 이후 초기 자극효과가 상쇄되었으며 본 실험 결과상 배양 2주째가 세포채집 시기로 적당한 바, 골수정화 효과를 지속적으로 증가시키기 위해서는 배양기내 간질세포 및 간질세포와 연관된 원시조혈모세포 수준에까지 작용할 수 있는 다양한 조혈촉진인자의 병용이 검토되어야 하겠다. Background : Significant changes in leukemic cell behaviour have been reported to occur during long-term cultures of bone marrow from patients with AML. Recent reports of intensive therapy and hematopoietic rescue with autologous marrow cells grown in the long-term bone marrow culture (LTBMC) system have aroused much attention. But its effectiveness ans a means to purging leukemic cells and expansion of regenerating normal hemopoietic series should be increased for better autotransplant outcomes. Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) is crucial in the regulation of proliferation and maturation of normal hematopoietic progenitor cells. It also exerts profound stimulative effects on leukemic cells, and renders them more susceptible to purging agents. To evaluate the effects of GM-CSF on the LTBMC-mediated myelopoietic recoveries and purging of leukemic cells, we studied the effects of GM-CSF priming on long-term cultures of acute leukemic bone marrow cells. Methods : The mononuclear bone marrow cells of 22 patients with acute leukemia were incubated with 100ng/ml GM-CSF for 24 hours. After preincubation, the LTBMCs were started in 25 ㎠-culture flask in 10 ml culture medium supplemented with 12.5% fetal bovine serum and 12.5% horse serum at 37℃. Over a period of 4 weeks, the LTBMCs were demipopulated and replaced by fresh medium weekly. Adherent layers were examined in situ by inverted microscopy of flask bases during the course of the study. Nonadherent cells recovered after feeding were counted, and plated in clonogenic assays and differentail morphologic counts were performed on cytospin preparation. Adherent layer cells were obtained by detaching at the termination of cultures by incubation with collagenase. Results : We found GM-CSF predomination influenced initial increase in (a) the number of nonadherent cells, (b) the number of terminally differentiated granulocytes (band and segmented neutrophils), and (c) the number of nonadherent granulocyte-macrophage colony-forming units (CFU-GM) consisted of myeloid cells morphologically identical to normal control cultures considerably (p<0.05) in LTBMC before the establishment of a confluent adherent layer. And GM-CSF priming tended to decrease the number of nonadherent leukemic colony-forming units in 1-week-old LTBMC, which is not statistically significant. These effects were lost after 2 weeks of LTBMC. Conclusion : GM-CSF priming of leukemic cells prior to LTBMC may be more effective for purging leukemic cells and expanding myeloid recoveries than without GM-CSF, but its effects were restricted before the establishment of confluent adherent layers. Its transient effects suggest that GM-CSF may not be active on primitive hemopoietic stem cells responsible for LTBMC propagation. Alternatively, stromal cells may exert tight regulatory control over progenitor cells. Further analysis will be required to enhance recovery of normal myelopoiesis and to decrease survival of leukemic progenitor cells more effectively on the basis of combined use with different hemopoietic growth factors or with other various cytokines.

근육주사에 의한 Paraquat 중독증

임성우 ( Im Seong U ),이원익 ( Lee Won Ig ),한혜숙 ( Han Hye Sug ),한지숙 ( Han Ji Sug ),김민옥 ( Kim Min Og ),권순길 ( Kwon Sun Gil ),김혜영 ( Kim Hye Yeong ),신경섭 ( Sin Gyeong Seob ) 대한신장학회 2004 Kidney Research and Clinical Practice Vol.23 No.3

Paraquat intoxication is a fatal problem. Most of paraquat intoxications happen through oral administration. But there is no clinical data for parenteral paraquat intoxication, so we will describe its fatal progression and clinical course. A 52-year-old male injected paraquat solution on his thigh. Initial serum level of paraquat was 42.7 ug/mL and urgent hemoperfusion was performed and his serum level of paraquat was reduced by 5.2 ug/mL. But the patient expired due to respiratory failure and hypoxemia. Different from oral paraquat poisoning, serum level of the drug increases rapidly in intramuscular intoxication. So the paraquat in blood rapidly accumulates in tissue, especially lung parenchyme. We removed his paraquat in blood rapidly, but could not get rid of tissue concentration, so we lost him even with lowered serum paraquat level. Through this case, it is thought that the paraquat intoxication via intramuscular injection can make up a extremely poor prognosis even with very a little amount of paraquat. (Korean J Nephrol 2004;23(3):505-508)

스테로이드 단독치료 후 호전된 경화성 복막염

윤수인 ( Yun Su In ),김혜영 ( Kim Hye Yeong ),김민옥 ( Kim Min Og ),김학의 ( Kim Hag Ui ),문기원 ( Mun Gi Won ),한정호 ( Han Jeong Ho ),한지숙 ( Han Ji Sug ),채희복 ( Chae Hui Bog ),권순길 ( Kwon Sun Gil ),배일현 ( Bae Il Hyeon ) 대한신장학회 2004 Kidney Research and Clinical Practice Vol.23 No.1

Sclerosing peritonitis is a rare but fatal complication of peritoneal dialysis (PD). Management of sclerosing peritonitis includes cessation of PD, total parenteral nutrition, and surgery. Recently, a few reports have indicated immunosuppression might be beneficial in sclerosing peritonitis. In these reports, all of patients had the combination therapy of steroid and immunosuppressant. A 37-year old man develped sclerosing peritonitis 3 months after switching from PD to hemodialysis because of uncontrolled peritonitis. An abdominal computed tomography (CT) scan demonstrated massive ascites with multilocuated fluid collection and extensive enhancement of the peritoneum. A peritoneal biopsy showed proliferation of fibrous collagenous tissue with infiltration of lymphocytes. We started corticosteroid for one month. A follow-up CT scan showed complete resolution with absence of peritoneum thickness and fluid collection 16 months after corticosteroid therapy. The paient currently remains free of symptoms in an outpatient hemodialysis unit. To our knowledge, this is the first case of sclerosing peritonitis successully treated with corticosteroid therapy alone in Korea. (Korean J Nephrol 2004;23(1):169-173)