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신동일,박희성,Shin Dong-Il,Park Hee-Sung Korean Society of Life Science 2005 생명과학회지 Vol.15 No.6
배추 종자 및 유묘에 대하여 GUS발현 또는 hepatitis B surface antigen (HBsAg)발현 벡터를 지니는 Agrobacterium tumefaciens LBA4404 세포를 이용하여 진공침윤(agroinfiltration)에 의한 형질전환을 시도하였다. 특히 ELISA를 이용한 HBsAg발현의 정량적 분석에서 agroinfiltration방법은 형질전환효율이 매우 저조하게 나타났다. 그러나 차아염소산나트륨 용액을 발아 전 또는 발아 중인 배추종자에 처리한 후 agroinfiltration을 실시한 경우 형질전환 효율이 $2\~5$배 증가하였다. 따라서 차아염소산나트륨 등의 화학연마제에 의한 종자의 상처발생이 Agrobacterium의 감염을 용이하게 함으로써 배추유묘에서의 일시유전자발현을 증대시키는 것으로 제안되고있다. Chinese cabbage (Brassica campestris ssp. napus var. pekinensis Makino) seeds/seedlings were transformed via vacuum-infiltration with recombinant Agrobacterium tumefaciens LBA4404 cells. The agroinfiltration method was determined to be unsuccessful for Chinese cabbage transformation during the analysis of hepatitis B surface antigen expression by ELISA. However, treatment of sodium hypochlorite solution, prior to agroinfiltration, to pregerminated or germinating 1 day- or 2 days-old seeds was proven effectively to enhance transformation efficiency, suggesting that chemical wounding caused by sodium hypochlorite reaction might facilitate Agrobacterium infection and, therefore, transient gene expression in Chinese cabbage sprouts.
미류나무 잎절편체 조직배양을 통한 식물체 재분화에 미치는 요인
신동일,설일환 한국생명과학회 1997 생명과학회지 Vol.7 No.2
미류나무 잎절편 조직배양에 의한 식물체 재분화에 관한 여러 가지 여인을 조사한 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. 5가지 각기 다른 농도를 가진 培地에 줅,절편을 치상하여 側牙의 발달을 유기시킨 결과, WPM이 MS배지 보다 더 좋은 반응을 보였고 또한 배지내의 NH$_{4}$NO$_{3}$의 양은 측아 증식에 큰 영향을 미치지 않는 것으로 관찰되었다. 2. 기내에서 증식된 잎을 3부분으로9윗, 중간 그리고 및) 절단하여 2종류의 식물성장 절물질(TDZ와NAA)의 16가지의 농도배합을 사용하여 배양한 결과 TDZ0.01mg/1와 NAA 0.02 mg/1에서 가장 높은 부정줄기 형성체들이 생성되었다. 또한 잎의 윗 부분 보다는 중간과 밑부분에서 높은 부정줄기 형성체들이 생성되었는 것을 관찰하였다. 3. 3가지 탄수화물을 사용하여 부정줄기의 유기를 관찰한 바, sucrose 나 glucose보다 fructose를 첨가한 배지에서 좋은 반응을 보여 주었다. We have investigated several factors influencing adventitious shoot induction from the Populus deltodies bartr. leaf segments. To obtain in vitro materials, at first, stem segments from ex vivro were tested for axillary bud breaking on the five macronutrients levels of two differenr media. WPM was better both in bud breaking and leaf expansion than MS medium. The amount of NH$_{4}$NO$_{3}$ added in the medium did not seem to affect axillary bud breaking, significantly and subsequent shoot elongation from the stem segments of P. deltodies. However, other components in WPM might have played important roles in axillary bud breaking and shoot elongation. Regenerability from three sections (the distal, the middle and the base) of leaves cultured on WPM supplemented with TDZ and NAA combinations appeared to be different; middle and basal sections of leaves produced more organogenic sites than those of top section on WPM and those sesctions produced the highest ogranogenic sites on the same medium supplemented with 0.01 mg/l TDZ and 0.02mg.l NAA. Among 3 carbon sources tested for adventitious shoot elongation, fructose seemed to be stimulating the elongation of adventitious shoots. Sucrose and glucose added in the medium resulted in the necrosis which caused dying of adventitious shoots, eventually.