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- 저자 : 강원대(Won Dae Kang) (검색결과 4 건)
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Bacillus sp. J105 유래 β-lactamase 유전자의 cloning 및 E. coli 내에서의 발현 분석
강원대(Won Dae Kang),임학섭(Hak Seob Lim),서민정(Min Jeong Seo),김민정(Min Jeong Kim),이혜현(Hye Hyeon Lee),조경순(Kyeong Soon Cho),강병원(Byoung Won Kang),서권일(Kwon Il Seo),최영현(Yung Hyun Choi),정영기(Yong Kee Jeong) 한국생명과학회 2008 생명과학회지 Vol.18 No.11
β-Lactam계 항생물질에 강한 내성을 가지는 균주 Bacillus sp. J105가 생산하는 β-lactamase의 유전자를 E. coli DH5α에 cloning하였다. Cosmid vector pLAFR3을 이용하여, Sau3AI으로 부분 분해한 chromosomal DNA와 BamHI으로 처리한 pLAFR3을 ligation하였다. In vitro packaging kit를 사용하여 E. coli에 형질도입 하였으며 β-lactamase양성 clone주를 획득하였다. 이 recombinant plasmid (β-lac+)를 pACYC184 (4.2 kb) vector를 사용하여 subcloning 하여 최종 β-lactamase의 활성이 있는 6.4 kb 단편이 포함된 pKL11-Δ4.6을 제작하였다. 이 단편을 DNA 염기서열을 분석한 결과 309개의 아미노산으로 구성된 β-lactamase를 코딩하는 927 bp를 포함하고 있었다. 클로닝된 β-lactamase 유전자의 upstream을 포함하는 170 bp의 염기서열을 분석한 결과, B. thuringinesis와 B. cereus 유래의 β-lactamase 유전자의 upstream 부위와 97%의 일치를 보였다. 본 연구에서 클로닝된 β-lactamase의 아미노산을 서열을 NCBI BLAST program을 이용하여 분석해 본 결과 B. thuringinesis와 B. cereus의 β-lactamase와 각각 97%와 94%의 일치를 보였다. 또한 계통도 분석 결과 역시 본 연구에서 클로닝된 β-lactamase의 아미노산을 서열은 B. thuringinesis와 B. cereus와 유전학적으로 아주 밀접한 관계를 보여주었다. 이 pKL11-Δ4.6를 E. coli에서 형질전환 시켜 발현 양상을 조사해 본 결과 β-lactamase의 secretion efficiency는 약 4~5%였다. E. coli의 세포 내 단백질로부터 β-lactamase를 정제하여 분자량을 확인한 결과 31 kDa로 wild type의 분자량과 일치함을 확인하였다. The β-lactamase gene was cloned into E. coli DH5α from Bacillus sp. J105 with strong resistance against β-lactam antibiotics. The chromosomal DNA was partially digested with Sau3AI and ligated to BamHI digested pLAFR3. β-Lactamase positive clones were obtained by using in vitro packaging kit. The pKL11-Δ4.6 with β-lactamase activity was obtained by subcloning of the recombinant plasmid (β-lac +). The 6.5 kb fragment in the subcloned plasmid was sequenced. The DNA fragment that contains the β-lactamase gene encodes 309 amino acids. The 0.17 kb upstream region was similar to those of B. thuringinesis and B. cereus with 97% identity. The deduced amino acids sequence was also similar to those of β-lactamase from B. thuringinesis and B. cereus with 97% and 94% identity, respectively. The phylogenetic tree also showed the relationships of the β-lactamase gene of Bacillus sp. J105 to genetically related that of other Bacillus strains. Analysis of expression pattern of the pKL11-Δ4.6 in E. coli, revealed that the secretion efficiency of β-lactamase was 4~5% and the molecular weight was as same as that of original β-lactamase (31 kDa) from Bacillus sp. J105.
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이담자균 효모의 성분화 과정중 인지질의 작용과 배지조성의 제한이 성분화에 미치는 영향
정영기,강원대,남수완 동의대학교 기초과학연구소 1997 基礎科學硏究論文集 Vol.7 No.1
The action of phospholipid on the rhodotorucine A(Rh.A) acceptance by heterobasidiomyceteous yeast Rhodospori-dium toruloides mating type a cells and the effect of medium composition during sexual differentiation were investigated. Activation of trigger peptidase(TPase) was very sensitive to the originated phospholipid from R. toruloides and was more sensitive to phospholipid liposome made up of phospholipid. Phospholipid present on the membrane of mating type a cells consists of phospatidylglycerol(PG), phosphatidylethanolamine(PE), phospatidylcholine(PC), phospatidylinositol(PI), and phosphatidylserine(PS) of 12.9, suprisingly 45.4, 11.0, and 13.9%, respectively. As the result of using C-1 and N-1 mediums which limited C and N sources capable of inhibiting the synthesis of phospholipid. it resulted inhibiting sexual differentiation and production of Rh.A from mating type A cells.
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이담자 효모의 세포간 성응집의 특성과 표면단백질의 관련성
정영기,이태호,최용락,강원대 동의대학교 기초과학연구소 1996 基礎科學硏究論文集 Vol.6 No.1
When mating type A and a cells of heterobasidiomycetous yeast Rhodosporidium toruloides were mix-cultured, both of the mating type cells have shown strong agglutination. But this agglutination was not detactable when the A and a cell were cultured separately. From reagglutination made just after the result of disassembling the agglutination by sonication, we knew that the agglutination was sexual-agglutination, not simple physical cell agglutination. The sexual agglutination was progressed actively on logarithmic phase and, in addition, progressed faster on mating type a cell treated with rhodotorucine A. These sexual agglutination have been inhibited by several protease such as trypsin, pronase, chymotrpysin and thermolysin and inhibited by 5 mM DTT as well.
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이담자 효모의 세포간 성응집의 특성과 표면단백질의 관련성
정영기,이태호,최용락,강원대 한국산업미생물학회 1995 한국미생물·생명공학회지 Vol.23 No.3
이담자 효모 Rhodosporidium toruloides의 접합형 A세포와 a세포를 혼합 배양했을 때 양 세포는 강한 응집현상을 보였다. 이 응집은 A와 a세포를 각각 배양했을 때는 일어나지 않았다. 초음파처리로 세포의 응집을 해체해 보았으나 곧 바로 재응집되는 것으로 보아 본 응집현상은 단순한 물리적인 세포 응집이 아닌 성응집 현상인 것을 알 수 있었다. 성응집 반응은 대수증식기의 세포에서 활발히 진행되었으며, a세포를 rhodotorucine A로서 처리한 세포에 대해서는 성응집이 빠르게 진행되었다. 이들 응집반응은 trypsin, pronase, chymotrypsin, thermolysin 등의 각종 protease(25∼200 ㎍/㎖)에 대하여 저해되었다. 또 5 mM의 DTT에 대해서도 저해되었다 이들 결과는 양 접합형세포의 성응집에는 세포표면 단백질의 변화가 큰 역할을 하고 있다는 것을 시사한다. When mating type A and a cells of heterobasidiomycetous yeast Rhodosporidium toruloides were mix-cultured, both of the mating type cells have shown strong agglutination. But this agglutination was not detactable when the A and a cell were cultured separately. From reagglutination made just after the result of disassembling the agglutination by sonication, we knew that the agglutination was sexual-agglutination, not simple physical cell agglutination. The sexual agglutination was progressed actively on logarithmic phase and, in addition, progressed faster on mating type a cell treated with rhodotorucine A. These sexual agglutination have been inhibited by several protease such as trypsin, pronase, chymotrpysin and thermolysin and inhibited by 5 mM DTT as well.
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