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머루종자의 적정 추출조건 및 추출 분획물의 Free Radical 소거능 효과
김난영(Nan-Young Kim),김영국(Young-Kuk Kim),배기자(Ki-Ja Bae),최재호(Jae-Ho Choi),문제학(Jea-Hak Moon),박근형(Geun-Hyung Park),오덕환(Deog-Hwan Oh) 한국식품영양과학회 2005 한국식품영양과학회지 Vol.34 No.6
식품 산업에서 발생되는 부산물의 가치를 재고하는데 있어서 머루 종자 에탄올 추출물을 대상으로 free radical 소거능을 탐색하여 머루종자의 기능성을 찾고자 본 실험을 수행하였다. 그 결과, 추출수율은 에탄올 농도, 추출온도 및 시간에 따라 전반적으로 4~12%를 나타내었으며 90% 에탄올로 70℃에서 12시간 추출한 추출물의 수율은 11.9%로 가장 높았지만 free radical 소거능(RC_(50))은 40.42 ㎍/mL로 나타났다. 그러나 70% 에탄올로 70℃에서 6시간 추출을 하였을 때 추출수율은 6.9%를 나타냈지만 RC_(50)은 20.93 ㎍/mL로 가장 높았고 총 페놀 함량도 330.71 mg GAE/g으로 가장 높게 나타났다. 본 연구결과, free radical 소거능이 높을수록 총 페놀 함량이 가장 높은 것으로 나타났으며 머루종자 에탄올 추출물의 free radical 소거능이 총 페놀 함량과 밀접하게 관련이 있는 것으로 나타났다. 한편, 70% 에탄올을 70℃, 6시간 추출물로부터 유기 용매별로 순차적으로 분획한 결과, 추출수율은 폴리페놀 화합물들을 많이 함유하고 있는 ethyl acetate 분획층에서 약 28%로 높았으며, RC_(50)도 ethyl acetate 분획층에서 8.65 ㎍/mL로 가장 높았고 총 페놀 함량도 ethyl acetate분획층에서 636.77 mg GAE/g으로 가장 높게 나타났다. Wild grape is a traditional medicine plant in north-eastern part of Asia and has been known to have healing properties for various illnesses. This study was to determine the optimum extraction condition and antioxidant activity of ethanol extracts of wild grape (V. coignetiae) seed. Also, organic solvent fractions of hexane, chlo- roform, ethyl acetate and butanol were obtained from the ethanol extract of wild grape seed at different temperatures. Total ethanol extraction yield of wild grape seed ranged from 4% to 12% depending on the ethanol concentration, extraction temperature and time condition. The highest extraction yield of 11.9% was obtained at 90% ethanol condition for 12 hour at 70℃. However, the strongest free radical scavenging effect (RC_(50)) with 20.93 ㎍/mL was observed in 70% ethanol extract of wild grape seed extracted for 6 hour at 70℃, while RC_(50) with 40.42 ㎍/mL was observed in 90% ethanol extract for 12 hour at 70℃. Antioxidant activity of ethanol extracts of wild grape seed increased as total phenol contents increased. Among each fraction obtained from organic solvents, ethyl acetate fraction was found to have the strongest RC_(50) (8.6 ㎍/mL) and 636.77 mg GAE/g phenol contents.
LPS로 유도된 RAW 264.7 세포와 마우스 귀 조직에 대한 주름까막살 에탄올 추출물의 항염증 효과
배난영(Nan-Young Bae),김민지(Min-Ji Kim),김꽃봉우리(Koth-Bong Woo-Ri Kim),박선희(Sun-Hee Park),장미란(Mi-Ran Jang),안동현(Dong-Hyun Ahn) 한국식품영양과학회 2016 한국식품영양과학회지 Vol.45 No.8
본 연구는 해조류 중에서도 홍조류인 주름까막살 에탄올 추출물(GCEE)의 항염증 효과를 확인하기 위한 실험으로 proinflammatory cytokines의 분비량 및 iNOS, COX-2, NF-κB와 MAPKs의 발현량을 관찰하고 마우스모델에서 항염증 효과를 확인하였다. GCEE가 세포 생존율에 있어 독성을 나타내지 않음을 MTT assay를 통해 확인한 후 같은 농도로 추후실험을 진행하였다. NO 분비량이 GCEE에 의해 농도의존적으로 감소하였으며 전염증성 매개물질인 사이토카인(IL-6, TNF-α 및 IL-1β)의 분비량 또한 유의적으로 감소하였다. 이러한 결과가 전염증성 매개인자의 전사인자인 NF-κB와 MAPKs 경로에 의한 것인지 확인하기 위하여 발현량을 관찰한 결과, GCEE가 LPS 처리로 현저히 증가한 염증 관련 효소인 iNOS와 COX-2의 단백질 발현을 농도 의존적으로 유의성 있게 억제하였고 전사인자인 NF-κB 및 MAPKs의 발현을 억제하였다. 또한, GCEE는 croton oil로 부종을 유발한 마우스모델에서 귀 부종 억제 효과를 나타내었고 250 mg/kg 농도에서 조직의 경피 및 진피 두께의 발달을 prednisolone 50 mg/kg 처리구와 유사한 정도까지 현저히 억제하고 염증성 세포인 mast cell의 침윤 억제 효과도 확인하였다. 이를 통해 주름까막살 에탄올 추출물은 염증반응의 전사인자인 NF-κB와 MAPKs의 발현을 조절함으로써 iNOS와 COX-2의 발현을 억제하고 그에 따라 전염증성 매개인자인 NO, IL-6, TNF-α 및 IL-1β의 분비를 억제하여 항염증 활성을 가지는 것을 확인하였으며, 이 결과를 종합해 볼 때 주름까막살 에탄올 추출물이 염증 치료제의 소재로 이용될 가치가 충분할 것으로 생각한다. The anti-inflammatory effects of ethanol extract from Grateloupia crispata (GCEE) were investigated in lipopolysaccharide (LPS)-stimulated murine macrophages. Anti-inflammatory effects were detected by enzyme-linked immunosorbent assay, Western blotting, and immunohistochemistry. There was no cytotoxic effect on proliferation of macrophages treated with GCEE compared to the control. GCEE significantly inhibited production of pro-inflammatory cytokines [interleukin (IL)-6, tumor necrosis factor-α, and IL-1β] as well as nitric oxide in LPS-stimulated RAW 264.7 cells. In addition, GCEE suppressed expression of inducible nitric oxide synthase, cyclooxygenase-2, and nuclear factor-κB in a dose-dependent manner. GCEE significantly reduced activation of mitogen-activated protein kinases. In the in vivo test, evaluation of anti-inflammatory activity of GCEE was performed using croton oil-induced ear edema in ICR mice. Oral administration of 10 mg/kg to 250 mg/kg of GCEE significantly reduced ear edema in a dose-dependent manner compared to croton oil-induced mice. Moreover, GCEE reduced ear thickness and the number of mast cells compared to croton oil-induced mice in the histological analysis. These data suggest that GCEE could be used as a potential source for anti-inflammatory agents.
LPS로 유도된 RAW 264.7 세포와 마우스 귀 조직에 대한 참도박 (Grateloupia elliptica Holmes) 에탄올 추출물의 항염증 효과
배난영(Nan-Young Bae),김민지(Min-Ji Kim),김꽃봉우리(Koth-Bong-Woo-Ri Kim),안나경(Na-Kyung Ahn),최연욱(Yeon-Uk Choi),박지혜(Ji-Hye Park),박선희(Sun-Hee Park),안동현(Dong-Hyun Ahn) 한국식품영양과학회 2015 한국식품영양과학회지 Vol.44 No.8
본 연구에서는 참도박 에탄올 추출물(GEHEE)의 항염증 효과를 알아보기 위해 lipopolysaccharide에 의해 활성화된 대식세포로부터 분비되는 염증매개인자들의 발현량과 마우스 모델을 이용한 귀 부종 및 조직학적 관찰 실험을 진행하였다. 그 결과 염증을 유발하는 대표적 물질인 NO 및 사이토카인[interleukin(IL)-6, IL-1β 및 tumor necrosis factor receptor-α]의 분비량이 GEHEE 농도 의존적으로 유의적 감소를 보였다. 또한 전사인자인 nuclear factor-κB의 활성과 인산화효소인 mitogen-activated protein kinases (p38, JNK 및 ERK)의 발현량이 억제됨을 확인함에 따라 염증작용 기전에서 이들의 활성 억제가 NO 및 사이토카인 분비량 조절에 영향을 미침을 확인하였다. 동물모델을 이용한 실험에서는 croton oil로 부종을 유발한 마우스 귀 조직에 GEHEE를 처리하였을 때 항염증제인 prednisolone 처리구와 유사한 수준으로 경피 및 진피의 두께가 감소한 것을 확인하였으며, 조직 내 침윤되는 mast cell의 수도 현저히 억제됨을 확인하였다. 따라서 본 연구 결과는 참도박 에탄올 추출물의 항염증 효능을 가진 기능성 소재로의 이용 가능성을 제시한다. This study investigated the anti-inflammatory effects of ethanol extract from Grateloupia elliptica Holmes (GEHEE) on the lipopolysaccharide-induced inflammatory response. Anti-inflammatory effects were detected by enzyme-linked immunosorbent assay, Western blotting, and immunohistochemistry. There were no cytotoxic effects on proliferation of macrophages treated with GEHEE compared to the control. GEHEE remarkably suppressed NO and pro-inflammatory cytokines (interleukin-6, tumor necrosis factor-α, and interleukin-1β) production and reduced expression of inducible nitric oxide synthase, cyclooxygenase-2, and nuclear factor-κB (NF-κB) proteins in a dose-dependent manner. GEHEE also significantly reduced activation of mitogen-activated protein kinases (MAPKs). The formation of edema in mouse ears was reduced at the highest dose compared to the control. GEHEE also reduced dermal thickness and mast cell numbers based on histological analysis. These results suggest that GEHEE exerts significant anti-inflammatory activity via inhibition of NF-κB and MAPKs activation and may be a potential anti-inflammatory therapeutic material.
Lipopolysaccharide로 유도된 RAW 264.7 세포와 마우스모델에 대한 진두발 에탄올 추출물의 항염증 효과
배난영 ( Nan Young Bae ),김민지 ( Min Ji Kim ),김꽃봉우리 ( Koth Bong Woo Ri Kim ),박지혜 ( Ji Hye Park ),박선희 ( Sun Hee Park ),성낙윤 ( Nak Yun Sung ),변의홍 ( Eui Hong Byun ),안동현 ( Dong Hyun Ahn ) 한국미생물생명공학회(구 한국산업미생물학회) 2016 한국미생물·생명공학회지 Vol.44 No.3
본 연구는 COHEE의 항염증 효과를 확인하기 위한 실험으로써 pro-inflammatory cytokine의 분비량 및 iNOS, COX-2, NF-κB와 MAPKs의 발현량을 관찰하였다. 먼저 MTT assay를 통해 COHEE가 세포 생존율에 있어 독성을 나타내지 않음을 확인한 후 동일한 농도로 추후실험을 진행하였다. COHEE에 의해 NO 분비량이 농도 의존적으로 감소하였으며 IL-6, TNF-α 및 IL-1β의 분비량 또한 유의적으로 감소하였다. 특히 100 μg/ml의 농도에서 LPS 단독처리구인 대조구에 비하여 IL-6, TNF-α 및 IL-1β의 분비량을 각각 66%, 43% 및 93% 억제시켰다. 이러한 결과가 전염증성 매개인자의 전사인자인 NF-κB와 MAPKs 경로에 의한 것인지 확인하기 위하여 발현량을 관찰한 결과, COHEE가 LPS 처리에 의해 현저히 증가한 단백질의 발현을 농도 의존적으로 유의성 있게 억제하였다. 또한 COHEE는 croton oil로 부종을 유발한 마우스모델에서 귀부종 억제효과를 나타내었고 250 mg/kg 농도에서 조직의 경피 및 진피 두께의 발달을 prednisolone 10 mg/kg 처리구와 유사한 정도까지 현저히 억제시키고 염증성 세포인 mast cell의 침윤 억제 효과도 확인하였다. 이를 통해 COHEE는 염증 반응의 전사인자인 NF-κB의 발현을 조절함으로써 iNOS와 COX-2의 발현을 억제하고 그에 따라 전염증성 매개인자인 NO, IL-6, TNF-α 및 IL-1β의 분비를 억제하여 항염증 활성을 가지는 것을 확인하였으며, 이 결과를 종합해볼 때, COHEE가 염증 치료제로써의 소재로 이용될 가치가 충분할 것으로 사료된다. This study aimed to investigate the anti-inflammatory effect of the ethanol extract from Chondrus ocellatus Holmes (COHEE) in RAW 264.7 cells and in a mouse ear edema model, by measuring the production of lipopolysaccharide-induced inflammatory response mediators. There were no cytotoxic effects on the proliferation of macrophages treated with COHEE compared with the control. COHEE inhibited the production of nitric oxide and pro-inflammatory cytokines [interleukin (IL)-6, tumor necrosis factor-α, and IL-1β]. The extract also reduced the expression of inducible nitric oxide synthase, cyclooxygenase 2, nuclear factor-κB p65, and phosphorylated mitogen-activated protein kinase in a dose dependent manner. In the croton-oil-induced ear edema model, COHEE decreased the formation of mouse ear edema at the highest dose compared with the control, and histological analysis revealed that the epidermal/dermal tissue thickness and mast cell numbers were reduced. Therefore, these results suggest that COHEE may be a promising topical anti-inflammatory therapeutic material through its action of modulating NF κB and the MAPK signaling pathway.