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      • KCI등재

        신규 수입 승인 6개 유전자변형작물의 검출기법 개발

        설민아,조범호,최원균,신수영,엄순재,김일룡,송해룡,이중로,Seol, Min-A,Jo, Beom-Ho,Choi, Wonkyun,Shin, Su Young,Eum, Soon-Jae,Kim, Il Ryong,Song, Hae-Ryong,Lee, Jung Ro 한국식물생명공학회 2017 식물생명공학회지 Vol.44 No.1

        일반적으로 유전자를 재조합하는 생명공학기술이 널리 이용되고 있는 것은 유전자변형 작물 분야이다. LM 제품에 대한 의존도가 높아짐에 따라 한국에서는 LMO의 안전성에 대한 우려가 지속적으로 증가하고 있다. 따라서, 우리는 자연환경 내 비의도적으로 방출된 LMO를 판별할 수 있는 검출기법을 확립하였다. JRC 정보를 토대로 6개 LM 이벤트(캐놀라 1, 옥수수 1, 콩 4개)의 유전자를 검출할 수 있는 PCR 조건을 확립하였다. 각 LM 시료에서 genomic DNA를 분리하였고, 이벤트 특이적인 프라이머를 사용하여 PCR 실험을 수행하였다. 또한 자체적으로 확립된 검출법에 의해 모든 LMO의 이벤트 특이적 유전자가 검출되었다. LM 유전자의 삽입 위치를 분석하기 위해 PCR 생성물을 이용하여 염기서열을 분석하였다. 이 결과는 LM 이벤트의 특이적인 유전자를 효율적으로 검출할 수 있음을 나타낸다. 게다가 본 연구결과 확립된 검출기법은 자연환경 내 LM 작물의 모니터링 및 사후 관리에 활용될 것이다. Living modified crops are genetically modified living organisms and are widely used in biotechnical research and desired goods. As the reliance on LM products, concerns about safety of LMOs have been continuously increased in South Korea. We established the detection methods for unintentional released LMOs in environmental conditions. To detect six LM event genes of 1 canola, 1 maize and 4 soybeans, PCR conditions were based upon consideration of the Joint Research Centre information. Genomic DNAs were isolated from LM samples and PCR analysis were performed using each event-specific primer pair. Event-specific genes of all events were efficiently recognized by our methods. To investigate the insertion site of LM genes in each genome, we verified PCR product sequence by DNA sequencing. These results suggest that the LM event-specific gene amplification can be efficiently developed. In addition, our detection method is fit for monitoring and post-management of LM crops in the environment.

      • KCI등재

        국내 승인 LM면화의 자연환경 모니터링을 위한 multiplex PCR 개발

        조범호,설민아,신수영,김일룡,최원균,엄순재,송해룡,이중로,Jo, Beom-Ho,Seol, Min-A,Shin, Su Young,Kim, Il Ryong,Choi, Wonkyun,Eum, Soon-Jae,Song, Hae-Ryong,Lee, Jung Ro 한국식물생명공학회 2016 식물생명공학회지 Vol.43 No.1

        면화(cotton)는 섬유를 수확하고, 면실유는 식용으로 가공 후 남은 것은 다시 사료로 이용되어 다방면으로 다양하게 활용되는 작물이다. LM 면화는 옥수수, 대두, 캐놀라와 달리 아시아권(중국, 인도 등)에서 가장 많이 재배되고 있으며, 우리나라는 2013년까지 세계 1위의 LM 면실(사료용) 수입국이며, 세계 4위의 면실박 수입국으로 해마다 증가하는 LM 면화의 수입량과 맞물려 유통 및 소비과정에서의 비의도적으로 유출 가능성이 증가함에 따라 LM 면화의 자연생태계 위해성 평가 및 안전관리가 요구된다. 본 연구에서는 국내 수입 승인 LM 면화 6개 이벤트(MON15985, MON531, GHB614, LLCOTTON25, MON88913, MON1445)의 동시증폭 검출법(multiplex PCR)을 개발하여 보다 신속하고 명확한 검출기법을 확립하고자 하였다. 최적 multiplex PCR 반응 조건은 2개 LM 면화 이벤트 MON15985 (214 bp), MON531 (270 bp)와 4개 LM 면화 이벤트 GHB614 (119 bp), LLCOTTON25 (164 bp), MON88913 (276 bp), MON1445 (389 bp)가 한번의 반응에 명확하게 검출되는 최적 반응 조건 및 primer 반응 농도의 조절을 통해 서로 다른 생성물 크기로 명확히 구분되도록 하였고, 최적 primer 농도는 반응액 최종농도 0.2~0.66 pmol로 primer 쌍 마다 각각 다른 최적 농도 조합의 cocktail을 만들어 활용하였다. Duplex PCR 반응 조건은 초기 $95^{\circ}C$ 5분 반응 후, $95^{\circ}C$ 15초, $55^{\circ}C$ 20초 15회 반응하고, 다시 $95^{\circ}C$ 15초, $60^{\circ}C$ 20초 25회 반응하였을 때 최적 검출이 이루어졌고, tetraplex PCR 반응 조건은 $95^{\circ}C$ 5분 반응 후, $95^{\circ}C$ 15초, $60^{\circ}C$ 20초 50회 반응하였을 때 최적 검출이 이루어졌다. 본 연구에서 개발된 multiplex PCR 검출법은 국내 수입 유통 LM 면화의 자연환경 모니터링에 활용함에 있어 요구되는 연구인력, 시간 및 비용을 보다 효율적으로 개선하는데 적용될 수 있을 것으로 사료된다. The growth area of living modified (LM) cotton has steadily increased every year, since its first commercialization in 1996. Development of environmental risk assessment tools and techniques for LM cotton is required for ecosystem safety. We therefore developed multiplex PCR assays for simultaneous detection of two (MON15985, MON531) and four (GHB614, LLCOTTON25, MON88913 and MON1445) LM cotton events approved in Korea, with event specific primer pairs. The PCR reactions were optimized by using event specific primers of six LM cottons at various concentrations. The reactions allows amplification of estimated amplicons of MON15985 (214 bp), MON531 (270 bp), GHB614 (119 bp), LLCOTTON25 (164 bp), MON88913 (276 bp), and MON1445 (389 bp) from multiplex PCR reactions. The multiplex PCR assay developed allowed that two annealing steps (15 cycles at $55^{\circ}C$ and 25 cycles at $60^{\circ}C$) were performed for amplification of distinguished two LM cottons, and only one annealing step (50 cycles at $60^{\circ}C$) was necessary for tetraplex PCR. Primer extension step of all PCR reactions was skipped for time-effective amplification. Our methods suggest that two multiplex PCR assays can be cost-effective and a rapid diagnostic tool for environmental LMO monitoring of six LM cottons.

      • KCI등재

        유전자변형생물체(Living Modified Organisms, LMOs)의 자연생태계 위해성 평가심사 현황 및 신기술 개발에 따른 향후 과제

        최원균 ( Won Kyun Choi ),조범호 ( Beom Ho Jo ),설민아 ( Min A Seol ),엄순재 ( Soon Jae Eum ),박준형 ( Jun Hyung Park ),송해룡 ( Hae Ryong Song ) 한국국제농업개발학회 2014 韓國國際農業開發學會誌 Vol.26 No.3

        Living Modified Organisms (LMOs) and derived feed products are subject to a risk assessment and regulatory approval before entering the market in South Korea. In this process, the role of the National Institute of Ecology (NIE) is to assess any possible risks that the use of a LMO may pose to the environment. The scientific risk analyses are carried out by Expert Panel on LMOs which consists of 15-20 scientific experts from LMO-associated research institutes and universities. The applications from a LMO-producing company are throughly assessed by the Panel in accordance with Annex 10-1 attached in the Law on Transboundary Movement of LMO, and then the Panel decides whether declared conflicts require further scientific explanations. Modern developments of New Plant Breeding Technologies (NPBTs) make ambiguous and difficult to define whether or not LMOs derived from NPBTs fall within or outside the legislations for LMO. Actually, Japan has recently concluded that the maize DP-32138-1 derived from Seed Production Technology (SPT, developed by DuPont) is not subject to legislations for LMOs and will consider if products developed by NPBTs are within or outside the LM legislations on a case-by-case basis. However, the occurrence of unintended effects associated to the use of NPBTs can not be ruled out. Therefore, now is the right time not only to build up the update version of Annex 10-1 to cover the lack of current risk assessment criterions but to think about unknown adverse effects with NPBTs through both international and national LMO working group experts.

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