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황덕호 啓明大學校 醫科大學 1996 계명의대학술지 Vol.15 No.1
The technique of cryoultramicrotomy was introduced by Tokuyasu in 1980. The main processes are conducted at low temperature, so it has an advantage to preserve the antigenicity. The procedures are fixation, infusion of sucrose, cutting, immunolabelling and heavy metal staining. The advantages of cryoultramicrotomy are the high success rate to label immunogold and short course (less than 2 days), easy to cut with glass knives, because it is performed at low temperature. And it also gives a chance to perform immunohistochemical staining under light microscope. The disadvantages of cryoultramicrotomy are the high cost (the cryo unit requires around US $ 50,000), constant supply of cheap liquid nitrogen and technical difficulty(the period of training needs more than 3 months in a case of an expert in eletronmicroscopy).
발생중인 생쥐 뇌의 열충격단백질70 mRNA 발현에 대한 조직화학적 연구
장철호(Cheol Ho Chang),임형수(Hyoung Soo Lim),권오현(Ohyun Kwon),김남희(Nam Hee Kim),박홍석(Hong Suk Park),이영일(Young Il Lee),박웅양(Woong-Yang Park),황덕호(Douk Ho Hwang),백상호(Sang Ho Baik),박경한(Kyeong Han Park) 대한해부학회 2001 Anatomy & Cell Biology Vol.34 No.3
출생 전후의 생쥐 뇌의 발생과정에서 열충격단백질70 mRNA 발현 세포의 분포 양상에 대하여 riboprobe를 이용한 하이 브리드조직화학기법 (in situ hybridization technique)을 적용하여 형태학적 연구를 시행하였다. 열충격단백질70 mRNA 양성세포가 특이적으로 관찰된 표본을 분석하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 발생 16일군에서는 열충격단백질70 mRNA 양성 반응이 척수에서 강하게, 넷째뇌실 주위의 뇌실막세포와 소뇌 등에서 는 중등도로, 대뇌겉질, 후각망울과 사이뇌와 같은 상위 중추의 세포에서는 약하게 관찰되었다. 2. 발생 18일군에서는 열충격단백질70 mRNA 양성 반응이 16일군에서보다 상위에 위치한 사이뇌 등의 중추신경계통에서도 중등도로 발현되었지만 대뇌겉질에서는 여전히 약하게 발현되었다. 3. 출생 0일군에서는 열충격단백질70 mRNA 양성 반응이 중추신경계통의 전반에 걸쳐 중등도로 또는 강하게 발현되었으며 특히 대뇌겉질에서 겉질판의 과립모양세포위층과 밑판, 해마 등에서 뚜렷한 중등도의 양성 반응이 관찰되었다. 4. 출생 2일군에서는 출생 0일군에서와 유사하였으며 대뇌겉질과 소뇌의 분화가 더욱 진행된 양상을 나타내었다. 5. 열충격단백질70 mRNA는 세포분열이 활발한 부위나 분화과정이 진행중인 부위의 세포에서 강하게 발현되었으며 발생과정이 진행됨에 따라 하위의 중추신경계통으로부터 상위의 중추신경계통으로 발현 범위가 확대되는 양상을 보였다. 이상의 결과로 미루어볼 때 열충격단백질70은 중추신경계통의 발생 및 분화에 있어서 중요한 역할을 수행할 것으로 생각된다. Using in situ hybridization technique with digoxigenin-labelled riboprobe, study on the expression of hsp 70 mRNA in the developing mouse brain was performed. The results obtained are as follows; 1. In embryonic day 16 group, cells with strong reactivity to hsp70 mRNA were found in spinal cord. In neuroepithelial layer lining fourth ventricle and external granular layer of cerebellum, moderate reactivity was observed. But the reactivity was weak in the forebrain including cerebral cortex, diencephalon and olfactory bulb. 2. In embryonic day 18 group, the regional pattern of hsp70 mRNA expression was similar to that of embryonic day 16 group. In medulla oblongata, however, stronger reactivity was found in the embryonic day 18 group. 3. In postnatal day 0 mice group, cells with moderate or strong reactivity to hsp70 mRNA were found in the overall area of central nervous system, Especially, cells with moderate reactivity were found in the dentate gyrus of hippocampus, and the supragranular cortical plate and subplate neocortex. 4. In postnatal day 2 mice group, cells with moderate or strong reactivity to hsp70 mRNA were found in the same pattern as in postnatal day 0 group. Further differentiation of cerebral cortex and cerebellum was found. 5. Strong expression of hsp70 mRNA was found in the areas with high rate of cell division. In general, the area of expression moved to more rostral area in central nervous system as development proceeds. Above results suggest that hsp70 play an important role in the development and differentiation of central nervous system.