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Agrobacterium tumefaciens을 이용한 대두 형질전환체 개발
조미애,최필선,유장렬,최동욱,Tom Clemente 한국식물생명공학회 2004 JOURNAL OF PLANT BIOTECHNOLOGY Vol.31 No.4
Agrobacterium tumefaciens-mediated cotyledonary node transformation was used to produce transgenic soybean. Cotyledonary node explants of three cultivars and one genotype were co-cultivated with strains Agrobacterium (LBA4404, GV3101, EHA101, C58) containing the binary vectors (pCAMBIA3301 and pPTN289) carrying with CaMV 35S promoter-GUS gene as reporter gene and NOS promoter-bar gene conferring resistance to glufosinate (herbicide Basta) as selectable marker. There was a significant difference in the transformation frequency depend on bacteria strain. The EHA101 strain of the bacterial strains employed gave the maximum efficiency (3.6%). One hundred-six lines transformed showed the resistance in glufosinate. Histochemical GUS assay showed that at least 11 plants transformed with the GUS gene were positive response. The soybean transformants were obtained from the Thorne (5 plants), 1049 (5 plants) and Bakun (1 plant), respectively. Southern blot analysis and leaf painting assay revealed that the GUS and bar gene segregated and expressed in their progeny. Agrobacterium과 자엽절 공동배양으로 대두 형질전환체를 생산하였다. 대두 배양재료는 3개의 품종과 1개의 genotype의 자엽절 절편을 사용하였으며, bar유전자와 GUS유전자로 제작된 pPTN289와 pCAMBIA3301벡터를 LBA4401, GV3101, EHA101, C58에 각각 형질전환하여 공동 배양하였고 모든 형질전환 방법은 약간 변형된 Zhang 등(1999)의 방법에 따라 수행 하였다. 형질전환빈도는 아그로박테리움의 종류에 따라 현저한 차이가 있었으며, 특히 사용한 균주 중 EHA101에서 3.6%로 최대치를 보였다. Glufosinate가 첨가된 선발배지에서 106개의 식물체를 얻었으며, 이중 Thorne에서 5개체, 1049에서 5개체, 백운콩에서 1개체 등 모두 11개로부터 GUS양성반응을 확인하였다. Southern분석과 basta검정법에 의하여 T1세대 식물체로부터 GUS유전자와 bar유전자가 발현되고 있음을 확인하였다.
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Agrobacterium tumefaciens 공동배양법을 이용한 옥수수 형질전환체 생산
조미애,김진석,유장렬,최필선,민황기,박윤옥,박기진,Tom Clemente 한국식물생명공학회 2005 JOURNAL OF PLANT BIOTECHNOLOGY Vol.32 No.2
Agrobacterium tumefaciens-mediated immature embryo transformation was used to produce transgenic maize. Immature embryo of Hi II genotype were co-cultivated with strains Agrobacterium tumefaciens (C58C1) containing the binary vectors (pPTN290) carrying with Ubiquitin promoter-GUS gene as reporter gene and NOS promoter-nptII gene conferring resistance to paromomycin as selective agent. Seven embryogenic callus lines transformed showed the resistance in paromomycin antibiotics. Histochemical GUS assay showed that 7 individual lines transformed with the GUS gene were positive response among the transformants. Southern blot analysis revealed that the nptII gene segregated and expressed in their progeny. 옥수수 미숙배배양과 Agrobacterium tumefaciens공동배양법에 의해 형질전환체를 생산하였다. Hi II계통의 미숙배를 Ubiquitin 1 promoter-GUS유전자와 선발마커로서 nptII유전자로 제작된 pPTN290벡터를 C58C1에 도입한 후 형질전환 균주로 사용하였다. 7개의 paromomycin저항성 배발생캘러스를 얻었으며, GUS양성반응을 나타내는 7개의 독립적인 식물체를 얻었다. Southern분석법에 의하여 T1세대 식물체로부터 nptII유전자가 안정적으로 도입되어 있음을 확인하였다.
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Agrobacterium tumefaciens을 이용한 대두 형질전환체 개발
조미애,최동욱,유장렬,최필선,Cho, Mi-Ae,Choi, Dong-Woog,Liu, Jang-Ryol,Clemente Tom,Choi, Pil-Son 한국식물생명공학회 2004 식물생명공학회지 Vol.31 No.4
Agrobacterium과 자엽절 공동배양으로 대두 형질전환체를 생산하였다. 대두 배양재료는 3개의 품종과 1개의 genotype의 자엽절 절편을 사용하였으며, bar유전자와 GUS유전자로 제작된 pPTN289와 pCAMBIA3301벡터를 LBA4401, GV3101, EHA101, C58에 각각 형질전환하여 공동 배양하였고 모든 형질전환 방법은 약간 변형된 Zhang 등(1999)의 방법에 따라 수행하였다. 형질전환빈도는 아그로박테리움의 종류에 따라 현저한 차이가 있었으며, 특히 사용한 균주중 EHA101에서 3.6%로 최대치를 보였다. Glufosinate가 첨가된 선발배지에서 106개의 식물체를 얻었으며, 이중 Thorne에서 5개체, 1049에서 5개체, 백운콩에서 1개체 등 모두 11개로부터 GUS양성반응을 확인하였다. Southern분석과 basta검정법에 의하여 T1세대 식물체로부터 GUS유전자와 bar유전자가 발현되고 있음을 확인하였다. Agrobacterium tumefaciens-mediated cotyledonary node transformation was used to produce transgenic soybean. Cotyledonary node explants of three cultivars and one genotype were co-cultivated with strains Agrobacterium (LBA4404, GV3101, EHA101, C58) containing the binary vectors (pCAMBIA3301 and pPTN289) carrying with CaMV 35S promoter-GUS gene as reporter gene and NOS promoter-bar gene conferring resistance to glufosinate (herbicide Basta) as selectable marker. There was a significant difference in the transformation frequency depend on bacteria strain. The EHA101 strain of the bacterial strains employed gave the maximum efficiency (3.6%). One hundred-six lines transformed showed the resistance in glufosinate. Histochemical GUS assay showed that at least 11 plants transformed with the GUS gene were positive response. The soybean transformants were obtained from the Thorne (5 plants), 1049 (5 plants) and Bakun (1 plant), respectively. Southern blot analysis and leaf painting assay revealed that the GUS and bar gene segregated and expressed in their progeny.
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Agrobacterium tumefaciens 공동배양법을 이용한 옥수수 형질전환체 생산
조미애,박윤옥,김진석,박기진,민황기,유장렬,최필선,Cho Mi-Ae,Park Yun-Ok,Kim Jin-Suck,Park Ki-Jin,Min Hwang-Ki,Liu Jang-Ryol,Clemente Tom,Choi Pil-Son 한국식물생명공학회 2005 식물생명공학회지 Vol.32 No.2
옥수수 미숙배배양과 Agrobacterium tumefaciens공동배양법에 의해 형질전환체를 생산하였다. Hi II계통의 미숙배를 Ubiquitin 1 promoter-GUS유전자와 선발마커로서 nptII 유전자로 제작된 pPTN290벡터를 C58C1에 도입한 후 형질전환 균주로 사용하였다. 7개의 paromomycin저항성 배 발생캘러스를 얻었으며, GUS양성반응을 나타내는 7개의 독립적인 식물체를 얻었다. Southern분석법에 의하여 $T_1$세대 식물체로부터 nptII유전자가 안정적으로 도입되어 있음을 확인하였다. Agrobacterium tumefaciens-mediated immature embryo transformation was used to produce transgenic maize. Immature embryo of Hi II genotype were co-cultivated with strains Agrobacterium tumefaciens (C58C1) containing the binary vectors (pPTN290) carrying with Ubiquitin promoter-GUS gene as reporter gene and NOS promoter-nptll gene conferring resistance to paromomycin as selective agent. Seven embryogenic callus lines transformed showed the resistance in paromomycin antibiotics. Histochemical GUS assay showed that 7 individual lines transformed with the GUS gene were positive response among the transformants. Southern blot analysis revealed that the nptll gene segregated and expressed in their progeny.
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