Multiplex PCR을 이용한 장출혈성 대장균 O157:H7의 검출

엄용빈(Yong-Bin Eom),김종배(Jong-Bae Kim) 대한의생명과학회 1998 Biomedical Science Letters Vol.4 No.1

최근 전세계적으로 문제가 되고 있는 장출혈성 대장균 O157:H7을 분리배양 및 동정없이 바로 시료를 분석하여 신속하게 검출하기 위한 다중 중합효소 연쇄반응 (multiplex PCR) 기법을 확립하고, 이 기법을 이용하여 국내 분리 균주 중에서 SLT-ⅠㆍⅡ, eaeA, 60-MDa plasmid gene을 가지고 있는 대장균을 유전자 수준에서 검출하고자 하였다. 장출혈성 대장균 O157:H7이 가진 SLT-ⅠㆍⅡ, eaeA, 60-MDa plasmid 유전자들에 대한 특이 oligonucleotide primers (MKI'-MK2', NAEI9-NAE20, MFSIF-MFSIR)를 함께 동시에 반응 완충액에 넣어 다중 중합효소 연쇄반응을 시행한 결과 317bp (eaeA), 228bp (SLT-ⅠㆍⅡ), 167bp (60-MDa plasmid)의 PCR 증폭 DNA생성물을 표준균주 (E. coli ATCC 35150)에서는 확인할 수 있었지만, 기타 다른 병원성 장내세균 13균주에서는 band를 확인할 수 없었다. 한편 다중 중합효소 연쇄반응의 template DNA 추출 방법에 따른 PCR 결과를 비교하였다. 각각의 DNA 추출 방법 중 boiling lysis 방법이 신속하고 간편하여 장출혈성 대장균 O157:H7에 의한 식중독의 임상진단에 다중 중합효소 연쇄반응 (multiplex PCR) 적용하는 데에는 boiling lysis법을 이용하는 것이 가장 적합한 방법으로 확인되었다. A multiplex PCR method was designed by employing primers specific for the eaeA gene, conserved sequences of Shiga-like toxins (SLT-ⅠㆍⅡ), and the 60-MDa plasmid of enterohemorrhagic E. coli (EHEC) 0157:H7 strain. A set of six synthetic oligonucleotide primers derived from sequences of the SLT-ⅠㆍⅡ, eaeA, and 60-MDa plasmid genes of E. coli O157:H7 were used in a multiplex PCR amplification procedure to detect these genes in the same enteric pathogens. In two enterohemorrhagic E. coli O157:H7 (ATCC 35150, ATCC 43894) reference strains, PCR products of 317bps (eaeA), 228bps (SLT-ⅠㆍⅡ), and 167bps (60-MDa plasmid) were successfully amplified simultaneously in a single reaction. However, the specific PCR products were not amplified in control strains of other enteric bacteria. The sensitivity of the multiplex PCR assay for detection of the SLT-ⅠㆍⅡ, eaeA, and 60-MDa plasmid genes of E. coli O157:H7 was found to be 2.5×10? of bacteria in diarrheal stool to amplify all three bands. The multiplex PCR technology will allow large-scale screening of many clinical specimens or contaminated foods, and will be a very useful method for the detection of a wide range of microorganisms present in the environment, including EHEC O157:H7 in various types of specimens. The multiplex PCR assay has the potential to be used as a specific and rapid method for clinical diagnosis of disease caused by EHEC O157:H7.

원저(原著) : 소아 수혈용 소단위 적혈구 농축액 제조 및 사용경험

엄용빈 ( Yong Bin Eom ),배인철 ( In Cheol Bse ),안효준 ( Hyo Jun Ahn ),이정신 ( Jung Sin Lee ),김현옥 ( Hyun Ok Kim ) 대한임상병리사협회 1996 임상수혈검사학회 발표자료집 Vol.3 No.1

For pediatric and neonatal transfusions, it is important to supply the volume needed. Newborns, compared to adult, require transfusion more frequently, which increases donor exposure and donor-related risks such as hepatitis. The unique small-volume requirements of transfusion to neonates may give rise to a large amount of wastage. Thus, a single donor unit for adult transfusion is not adequate for the pediatric and neonatal transfusion. Our technical approaches for pediatric units are available to supply the small volume needed and decrease blood wastage associated with requests for small volume transfusion and reduce donor exposure for those infants who are maintained with transfusion from the same unit for several days (14 days). Small-volume bags is attached to tubing from the outlet port of the main bag using the Sterile Connective Device. The repeated manipulation needed to make small-volume aliquots of packed RBCs did not result in contamination. This method for pediatric transfusion was simple for preparation and easy to adjust the volume. The outcome of the transfused patients was successful. In Korea, transfusion services providing blood for pediatrics and neonates need to develop the methods of preparing 70~120 ml pediatric units of whole blood or red blood cells to realize above advantages and to minimize wastage.

감염질환에 의한 변사자의 장기조직에서 결핵균의 검출에 관한 연구

이한영(Hna-Young Lee),엄용빈(Yong-Bin Eom),김영주(Young-Joo Kim),권태정(Tae-Jung Kwon) 한국법과학회 2001 한국법과학회 학술대회 Vol.2001 No.1

The Genetic Variations of SQSTM1 Gene are Associated with Bone Density in the Korean Population

Hyun-Seok Jin(진현석),Yong-Bin Eom(엄용빈) 한국생명과학회 2010 생명과학회지 Vol.20 No.12

골다공증은 복합적 전신 골격 질환으로, 공중 보건 분야의 전세계적인 주요한 관심 질환의 한 가지이다. 골다공증은 유전적 영향을 받는 질환으로, 낮은 골밀도와 적은 외력 의한 골다공성 골절 등의 특징을 보이며, 강한 유전성을 나타내는 질환이다. 그러나, 낮은 골밀도과 연관된 특정한 유전자의 다형성은 아직까지 많이 알려져 있지 않다. 본 연구에서는 SQSTM1 유전자의 유전적 다형성과 낮은 골밀도 사이의 상관성을 확인하기 위해, 한국인 유전체 연구(Korean Association Resource, KARE)에서 골밀도를 측정한 7,225명(남성: 3,622명, 여성: 3,603명)을 대상으로 SQSTM1 유전자 다형성과 골밀도 간의 선형 회기 분석을 하였다. BD-RT (원위 요골의 T 점수로 예측한 골밀도)에서 SQSTM1 유전자에서 3개의 SNP (rs513235, rs3734007, rs11249661)가 유의한 상관성이 있는 것으로 나타났으며, BD-TT (중위 경골의 T 점수로 예측한 골밀도)에서는 4개의 SNP (rs513235, rs3734007, rs2241349, rs11249661)가 유의한 상관성이 있는 것으로 나타났다. 특히 3개의 SNP (rs513235, rs3734007, rs11249661)는 BD-RT와 BD-TT 두 종류의 골밀도에서 공통적으로 유의한 상관성을 보였다. 이러한 결과로 미루어 골밀도와 SQSTM1 유전자의 다형성 간에 통계적으로 유의한 상관성을 가지며, SQSTM1 유전자는 골다공증의 발병과정에 관련이 있을 것으로 사료된다. Osteoporosis is a complex systemic skeletal disease and a major public health concern worldwide. It is a heritable disorder characterized mainly by low bone density and/or low trauma osteoporotic fractures, both of which have strong genetic determination. However, the specific genetic variants determining risk for low bone density are still largely unknown. Here, we performed association analysis to elucidate the possible relationship between genetic polymorphisms in the SQSTM1 gene and low bone density. By examining a total of 7225 (men: 3622, women: 3603) subjects from the Korean population in the Korean Association REsource (KARE) study, we discovered that SQSTM1 gene polymorphisms were associated with bone density. The results of the BD-RT (bone density estimated by T-score at distal radius) showed that three SNPs (rs513235, rs3734007, and rs11249661) within the SQSTM1 gene were significantly associated with bone density. The results of the BD-TT (bone density estimated by T-score at midshaft tibia) showed that four SNPs (rs513235, rs3734007, rs2241349, and rs11249661) were significantly associated with bone density. The three SNPs (rs513235, rs3734007, and rs11249661) had common significance in both BD-RT and BD-TT. In summary, we found statistically significant SNPs in the SQSTM1 gene that are associated with bone density traits. Therefore, our findings suggest SQSTM1 gene could be related to pathogenesis of osteoporosis.

G+C 함량이 높은 Primer를 사용하는 중합효소 연쇄반응에서 변성제가 미치는 영향

김종배(Jong-Bae Kim),안준환(Joon-Hwan Ahn),엄용빈(Yong-Bin Eom),김영미(Young-Mi Kim) 대한의생명과학회 1996 Biomedical Science Letters Vol.2 No.2

G+C 함량이 높은 primer를 이용한 중합효소 연쇄반응을 실시하는 경우 높은 annealing 용도로 인하여 특이 염기서열의 합성정도가 매우 미약하게 나타나는 경우가 많이 있다. 이와 같은 문제점을 보완하기 위하여 glycerol, formamide 및 dimethyl sulfoxide (DMSO) 등의 변성제를 반응용 완충액에 첨가하고 중합효소 연쇄반응을 실시하여 그 결과를 비교 검토하였다. G+C 함량이 낮은 Borrelia burgdorferi의 Ly1 유전자의 primer set인 Bb 679와 Bb 680를 이용한 중합효소 연쇄반응에서는 변성제 첨가에 따른 합성 DNA의 양의 변화가 뚜렷하지 않았다. 그러나 G+C 함량이 높은 primer set인 Mycobacterium paratuberculosis의 IS900 유전자의 IS900/150C와 IS900/921를 이용한 중합효소 연쇄반응을 유도한 경우에는 변성제를 첨가함에 따라 합성된 DNA의 양의 증가가 뚜렷하였으며, 2.5% glycerol과 1.25% formamide를 혼합 첨가한 경우와 또는 2.5% DMSO를 반응용 완충액에 첨가하였을 때 비특이적인 증폭비율이 낮아 특이 염기서열의 합성 결과가 양호한 것으로 나타났다. Poor yields of amplified DNAs could be resulted in polymerase chain reaction(PCR) processes with G+C-rich DNA primers because of their high Tm values. To maximize the yields of amplification in PCR processes with G+C-rich primers, we compared the yields of amplified DNA fragments according to the concentrations of specific denaturants added to the reaction mixture of PCR system. With addition of the mixture of 2.5% glycerol and 1.25% formamide, or 2.5% dimethyl sulfoxide to the reaction cocktail, respectively, remarkable increases in the yields of amplified DNA fragments were not observed in the PCR systems with G+C-low primers of Ly1 chromosomal gene from Borrelia burgdorferi but observed in the PCR system with G+C-rich primers of IS900 gene from Mycobacterium paratuberculosis. Although we were not practically able to discriminate the yields of PCR DNAs according to the concentrations used in this study, addition of the mixture of 5% glycerol and 2.5% formamide, or 5% DMSO tended to increase the production of extra bands.

Imipenem 비감수성 Carbapenemase 생성 Pseudomonas aeruginosa에 의한 항생제 내성유형과 분자생물학적인 특성

이진희 ( Jin-hee Lee ),이규상 ( Gyu Sang Lee ),임관훈 ( Kwan Hun Lim ),엄용빈 ( Yong-bin Eom ),김신무 ( Shin-moo Kim ),김종배 ( Jong-bae Kim ) 대한임상검사과학회 2010 대한임상검사과학회지(KJCLS) Vol.42 No.2

Pseudomonas aeruginosa are important nosocomial pathogens. Their resistance to carbapenem is increasing and causing concerns in Korea. An increasing prevalence of carbapenem resistance mediated by acquired carbapenemase is being reported. Over a 10 month-period from July 2007 to April 2008, 32 strains of imipenem-nonsusceptible P. auruginosa were isolated from Kangwon National University Hospital. To determine the prevalence and genotypes of the carbapenemase-producing clinical isolates, the antibiotic susceptibility was determined by Microscan Walkaway 96 SI System and the carbapenem activity was detected by the modified Hodge test and the imipenem-EDTA-SMA double-disk synergy test. The metallo-β -lactamase gene and OXA-type β-lactamase gene reported in Korea were detected by PCR. As for the result of PCR, 30 isolates of P. aeruginosa were found to have blaIMP-1-like and 1 isolate was found to have blaIMP-1-like and blaVIM-2. No clinical isolates were found to have blaSIM-1, blaOXA-23-like and blaOXA-24-like. Random amplified polymorphic DNA (RAPD)-PCR and dendrogram for genetical similarity to band patterns of each clinical isolates were examined. P. aeruginosa were grouped into 7 clusters of up to 50% of similarity index. In the P. aeruginosa group, PS3 was resistant to the most antibiotics, PS1 was susceptible to the most antibiotics. PS7 was resistant to aztreonam unlike other groups. This is the first report of prevalence of carbapenemase in Chuncheon.

PCR-Restriction Fragment Length Polymorphism 방법에 의한 Borrelia burgdorferi Sensu Lato의 분류

송혜원(Hye-Wone Song),박성언(Sung-Un Park),박상욱(Sang-Wook Park),김근희(Geun-Hee Kim),김홍(Hong Kim),엄용빈(Yong-Bin Eom),김종배(Jong-Bae Kim) 대한의생명과학회 1999 Biomedical Science Letters Vol.5 No.2

라임병의 원인균인 Borrelia burgdorferi에 대하여 각 균종의 표준균주와 진드기에서 추출한 DNA를 template로 PCR을 실시한 후 그 증폭산물을 Alu Ⅰ으로 처리한 restriction fragment length polymorphism (RFLP) 방법으로 각 균종의 연관성을 조사하고자 하였다. 표준균주로 RFLP를 실시한 결과 B. burgdorferi sensu stricto와 B. garinii의 RFLP 형태 (50 bp, 70 bp, 150 bp)가 유사하였으며 B. afzelii에서는 다른 RFLP 형태 (50 bp, 110 bp, 150 bp)를 관찰하였다. 그 중 B. afzelii KK-1과 B. garinii HP1은 새로운 RFLP 형태를 보여 B. afzelii와 B. garinii는 각각 2 types의 subgroup으로 분류할 수 있었다. 진드기 DNA에서는 B. afzelii를 포함한 각 균종에 대하여 모두 유사한 RFLP 형태를 보였는데, 진드기 DNA에서 확인된 B. afzelii는 KK-1과 같은 군에 속하는 것으로 사료되었다. For the classification of B. burgdorferi sensu lato strains, PCR-restriction fragment length polymorphism (RFLP) analysis was performed. PCR was carried out with B. burgdorferi sensu lato specific primer set (BB uni set), and amplicons of 470-bp DNA were digested with Alu Ⅰ. The Alu Ⅰ restriction polymorphism of the amplicons provided a useful tool for identifying B. burgdorferi sensu lato strains. Both amplicons from B. burgdorferi sensu stricto and B. garinii except HP1 strain showed identical RFLP pattern (50 bp, 70 bp, and 150 bp), but amplicons from B. afzelii and B. garinii showed two types of subgroups, respectively. The result of PCR-RFLP using extracted DNAs from ticks was similar to those patterns of B. burgdorferi species including B. afzelii.

Plumbagin에 의한 헬리코박터 파이로리균의 성장 및 병원성 인자 발현 억제효과

이민호 ( Min Ho Lee ),우현준 ( Hyun Jun Woo ),박민 ( Min Park ),문철 ( Cheol Moon ),엄용빈 ( Yong Bin Eom ),김사현 ( Sa Hyun Kim ),김종배 ( Jong Bae Kim ) 한국미생물생명공학회(구 한국산업미생물학회) 2016 한국미생물·생명공학회지 Vol.44 No.2

헬리코박터 파이로리균은 인간의 위에 감염하여 위염, 위궤양, 심지어 위암을 포함한 다양한 위장질환의 발생시키는 원인으로 알려져 있다. 이러한 헬리코박터균의 제균을 위해 항생제 치료법이 이용되고 있지만 이러한 항생제들에 대한 헬리코박터균의 내성증가가 전세계적인 문제로 대두되고 있다. 보고들에 따르면, 천연물질인 plumbagin은 항균 및 항암 효과를 가지고 있는 것으로 알려져 있다. 따라서 본 연구에서는 헬리코박터 표준균주(ATCC 49503)에 plumbagin을 처리한 후 항균효과를 확인하였으며, 세균의 성장 및 병원성과 관련된 다양한 물질들의 발현에 미치는 영향을 immunoblotting 및 RT-PCR 방법을 이용하여 조사하였다. plumbagin의 헬리코박터균 억제효과를 확인하기 위해 한천희석법과 액체배지희석법을 이용해 최소억제농도를 도출하였다. 위와 같은 Plumbagin에 의한 헬리코박터균의 억제기전을 이해하기 위하여 헬리코박터균에 plumbagin을 처리한 후 세균의 증식과 관련된 물질들을 대상으로 RT-PCR을 수행한 결과 RNA polymerase subunit α (rpoA)의 mRNA 발현이 감소한 것을 확인하였다. 또한, 헬리코박터균에 plumbagin을 처리한 후 주요 병원성인자들의 발현을 조사한 결과 CagA와 VacA 독소들의 mRNA 및 단백질양이 감소한 것을 확인하였으며, 유레아제(ureA)와 부착단백(alpA)의 발현도 plumbagin 처리에 의해 감소한것을 확인하였다. 위와 같은 결과들을 토대로, plumbagin은 본 연구에서 밝힌 기전들을 통해 헬리코박터균의 성장, 감염 및 발병을 억제하는 것으로 사료된다. Helicobacter pylori primarily colonizes the human stomach. Infection by this bacterium is associated with various gastric diseases, including inflammation, peptic ulcer, and gastric cancer. Although there are antibiotic regimens for the eradication of H. pylori, the resistance of this species against antibiotics has been continuously increasing. The natural compound plumbagin has been reported as an antimicrobial and anticancer molecule. In this study, we analyzed the inhibitory effect of plumbagin on H. pylori strain ATCC 49503 as well as the expression of various molecules associated with H. pylori growth or virulence by immunoblotting and reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) analyses. We demonstrated the minimal inhibitory concentration of plumbagin on H. pylori through the agar dilution and broth dilution methods. Furthermore, we investigated the effect of plumbagin treatment on the expression of the RNA polymerase subunits and various virulence factors of H. pylori. Plumbagin treatment decreased the expression of RNA polymerase subunit alpha (rpoA), which is closely associated with bacterial survival. Moreover, the mRNA and protein levels of the major CagA and VacA toxins were decreased in plumbagintreated H. pylori cells. Likewise, the expression levels of urease subunit alpha (ureA) and an adhesin (alpA) were decreased by plumbagin treatment. Collectively, these results suggest that plumbagin may inhibit the growth, colonization, and pathogenesis of H. pylori by the mechanism demonstrated in this study.

다중 중합효소 연쇄반응을 이용한 반코마이신 내성 장구균의 신속 검출

김종배(Jong-Bae Kim),김근희(Geun-Hee Kim),송혜원(Hye-Wone Song),박성언(Sung-Un Park),엄용빈(Yong-Bin Eom),박상욱(Sang-Wook Park),김양수(Yang Soo Kim),박수진(Soo Jin Park) 대한의생명과학회 1999 Biomedical Science Letters Vol.5 No.1

일반적으로 임상검사실에서 vancomycin resistant enterococci (VRE)를 검출하는 일은 어렵고, 시간이 많이 들며, 검체처리 비용도 많이 든다. 따라서 본 실험은 임상검체에서 분리된 세균으로부터 VRE를 신속하게 확인하고, 진단하기 위한 방법으로서 다중 중합효소 연쇄반응을 확립하였다. 본 실험에 사용된 primer는 장구균에 특이한 유전자인 vanA, vnaB vnaC-1, vanC-⅔ 각각의 염기서열을 기초로 primer를 제작하고, 다중 중합효소 연쇄반응을 실시하여 임상검체로부터 분리된 VRE 유전자의 type 및 분포율을 조사하고자 하였다. 국내에서 분리된 75주의 장구균을 대상으로 다중 중합효소 연쇄반응을 실시한 결과 36주의 분리균주에서 vancomycin에 대해 높은 저항성을 보이는 vanA 유전자를 가진 것으로 나타났다. 그리고 18주에서는 vancomycin에 낮은 저항성을 내성을 보이는 vanC-1 또는 vanC-⅔ 유전자를 보유한 것으로 나타났다. 따라서 본 실험에서 확립한 다중 중합효소 연쇄반응 기법은 신속한 VRE 진단 방법으로 이용할 수 있을 것이다. It is generally difficult, time-consuming, and expensive for the clinical laboratory to detect vancomycin resistant enterococci (VRE). The aim of this study was to develop and evaluate the multiplex polymerase chain reaction (PCR) assay system as a diagnostic tool for the rapid detection of VRE from clinical samples and/or for the identification of VRE from the bacterial strains isolated from clinical specimens. Specific primers, designed from the nucleotide sequences respectively encoding the vanA, vanB, vanC-1, vanC-⅔ genes in enterococci, were coupled in a multiplex PCR assay system. With this multiplex PCR assay system, we investigated the incidence rates and types of VRE isolated from clinical samples. A total of 75 strains of enterococci were isolated in 3 general hospitals in Korea. Of these isolates, 36 strains showed a pattern of high-level vancomycin resistance which associated with vanA gene, whereas 18 strains showed low-level vancomycin resistance associated with vanC-1 or vanC-⅔ gene. Thus, multiplex PCR assay method established in this study could be applied for the rapid detection of VRE.

국내에서 채집한 진드기에서 중합효소연쇄반응을 이용한 라임병균 및 Ehrlichiosis 원인체의 검출

김종배(Jong-Bae Kim),송혜원(Hye-Wone Song),박성언(Sung-Un Park),박상욱(Sang-Wook Park),안준환(Joon-Hwan Ahn),엄용빈(Yong-Bin Eom),김영미(Young-Mi Kim) 대한의생명과학회 1998 Biomedical Science Letters Vol.4 No.2

국내에서 채집한 진드기의 라임병 및 ehrlichiosis 원인체 보균 상태를 조사하기 위하여 총 516마리 (Ixodes spp. 22마리, Haemaphysalis spp. 494마리)의 ixodid 진드기를 봄과 가을에 걸쳐 강원도 고산지대 일원에서 채집하였다. 수집한 진드기에서 DNA를 추출ㆍ정제한 후 추출한 DNA를 template로 이용하여, Borrelia burgdorferi sensu lato 및 Ehrlichia spp.에 특이하게 반응하도록 제작한 primer를 이용한 중합효소연쇄반응 (polymerase chain reaction, PCR)을 실시하였으며, 이 결과를 oligonucleotide probe를 사용한 southern blotting을 통하여 다시 확인하였다. 총 516마리의 진드기중 B. burgdorferi sensu lato DNA 양성인 진드기는 68 (13.2%)마리 (B. burgdorferi sensu stricto, 2; B. afzelii, 1; B. garinii, 33; B. tanukii, 8; B. turdae, 4)로 나타났으며 이 중 37 (7.2%)마리의 진드기는 southern blot analysis에서도 양성으로 확인되었다. 또한 101 (19.2%)마리의 진드기가 Ehrlichia spp.에 대한 PCR에서 양성이었으나, 이들 중 25 (4.8%)마리만이 southern blot analysis에서 양성으로 확인되었다. 그러나 사람의 병인체로 추정되는 human granulocytic ehrlichiosis (HGE) agent DNA를 보균한 진드기는 확인되지 않았다. 한편 라임병균과 ehrlichiosis 원인체를 동시에 보균한 것으로 밝혀진 진드기가 3마리에서 (0.6%) 확인되어, 국내에서도 진드기 교상시 이들 두 가지 열성질환이 동시에 감염될 가능성이 있는 것으로 사료됨으로 진드기 매개성 열성질환에 대한 적절한 진단법 등을 보다 체계적으로 연구하여야 할 것으로 판단된다. To investigate the distribution of Borrelia burgdorferi and human granulocytic ehrlichiosis (HGE) agent in ticks, adult ixodid ticks of Ixodes spp. and Haemaphysalis spp. were collected from the high mountain areas of Kangwon Province. Using DNAs extracted and purified in the collected ticks, polymerase chain reaction (PCR) was performed to amplify the specific nucleotide sequences of both agents. Of the 516 ticks, a total of 68 (13.2%) ticks was positive for Borrelia burgdorferi sensu lato with PCR analysis (2 for B. burgdorferi sensu stricto; 1 for B. afzelii; 33 for B. garinii; 8 for B. tanukii; 4 for B. turdae). However a little more than half of PCR-positive ticks (37/68) was found to be positive in the southern blot analysis with B16S oligonucleotide probe. One hundred and one (19.2%) ticks were positive for Ehrlichia spp. in PCR, and a quarter of them (25/101) was positive in southern blot with E16S oligonucleotide probe. But none of them was found to be the DNA of HGE agent. And 0.6% (3/516) ticks were positive for both of B. burgdorferi sensu lato and Ehrlichia spp. These findings might implicate the possibility of the outbreak of lyme borreliosis and ehrlichiosis in Korea, and more extensive studies may be need for the diagnosis of multiple tick-borne diseases.