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- 저자 : 황춘홍 (검색결과 7 건)
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효모의 DNA topoisomerase Ⅰ 발현 프라스미드 제작과 세포내 발현
황춘홍,이명석 숙명여자대학교 자연과학연구소 1995 자연과학논문집 Vol.- No.6
DNA topoisomerase는 세포내 전사에 영향을 미치는 것으로 알려져 있다. 본 연구에서는 Saccharomyces cerevisiae에서 DNA topoisomerase I을 과량 발현하기 위해 recombinant plasmid 제작과 세포내 발현을 시도하였다. Single-copy의 YCp plasmid와 galactose-inducible promoter를 가진 YEp multi-copy plasmid에 정상의 TOPI과 돌연변이형의 topI 유전자를 서브클로닝하였다. YEp와 YCp에 존재하는 TOPI 유전자의 발현정도를 알기 위해 exogenous supercoiled plasmid를 세포추출물에 넣어 in vitro relaxation activity를 측정하여 비교하였다. 그 결과 YCp에 존재하는 TOPI의 발현이 상대적으로 높게 나타났고 세포의 성장도 저해되었다. 돌연변이형의 topI 유전자를 plasmid에 갖는 세포는 relaxation activity가 가장 낮았다. Constitutive promoter를 갖는 plasmid vector에 야생형의 TOPI과 돌연변이형의 topI 유전자를 서브클로닝하여 같은 방법으로 발현정도를 비교한 결과, YEp에서 효소활성이 높았으나 inducible promoter보다는 낮았다. 이러한 결과는 DNA topoisomerase I 과량발현이 세포내 general transcription initiation을 억제하여 세포성장을 저해할 가능성을 시사하고 있다. DNA topoisomerases are known to be involved in regulation of gene expression. To characterize the enzyme, we have overexpressed the DNA topoisomerase I of Saccharomyces cerevisiae. We have constructed and transformed several recombinant plasmids into yeast cells. These plasmids carry galactose-incucible promoter in multi- and single-copy forms, and constituitively expressible original promoter in the above two forms. We have tested the level of relaxation of the supercoiled plasmids that are added exogenously in the yeast extracts to compare TOPI expression between the YEp and YCp containing cells. Based on the relaxation activity of supercoiled plasmids in cell extracts of various conditions. we found that the TOPI gene carrying galactose-inducible promoter in a single copy form was expressed at a higher level compared to the others. Furthermore, growth of theses cells was slightly inhabited compared to that of the wild type, suggesting that overexpression of the enzyme could inhibit general transcription of most genes in vivo.
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이혜영,류성희,황춘홍,이숭덕 대한법의학회 2013 대한법의학회지 Vol.37 No.1
Sex typing may become the start point in investigations that are usually performed through amelogenin typing. In cases involving genotype-phenotype discrepancy,amelogenin typing could yield misleading results. The rare XX male syndrome is characterized by a phenotypic male with a 46, XX female karyotype. In this point, this case report would help understand the importance of genotype-phenotype discrepancy.
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곽경록,최소영,김은영,황춘홍,이성진 강원대학교 동물생명과학연구소(구 강원대학교 동물자원공동연구소) 2017 동물자원연구 Vol.28 No.2
Foot-and-mouth disease (FMD) is a infection that can easily spread when it occurs and causes serious economic damage because of the existence of multiple serotypes of the virus and extreme contagiousness. The most effective method in preventing the transmission of FMD virus (FMDV) is the culling of livestock and additional vaccination in the other areas depending on the spreading rate and situation. Diagnostic methods are utilized not only for the definite diagnosis of FMD but also for identification of serotype, and confirmation of antibody production after vaccination. Although many methods have been developed to diagnose, they are not still enough to detect accurately the disease in a short time. Therefore, it has been needed new diagnostic methods improved from existing methods. Previous methods were based on the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) as a serological diagnostic method, or polymerase chain reaction (PCR), which is a molecular genetic method. The recent technology has been performing about the combination of both methods and how to make it faster, less costly, more sensitive and accurate way.
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Immuno-PCR을 이용한 한국형 A형 구제역 바이러스 진단
곽경록,이정근,최소영,황춘홍,이성진 강원대학교 동물자원공동연구소 2019 동물자원연구 Vol.30 No.2
구제역은 발생 시 살처분, 백신 접종과 같은 질병 방제 비용 발생, 생산성 감소, 동물과 축산물의 국제적인 교역 제한 등으로 국가 경제에 미치는 영향이 매우 큰 질병이다. 바이러스의 혈청형을 민감하고 정확 및 신속하게 구분할 수 있는 적합한 진단법은 구제역의 조기 예방 측면에서 지속적으로 요구되고 있다. 본 연구는 한국형 구제역 바이러스를 진단하는 방법으로, 기존 연구에서 민감성이 확인된 Immuno-PCR 진단법을 적용시킬 수 있는지를 확인하기 위해 진행되었다. Immuno-PCR을 진행하기 위해 한국에서 발병한 구제역 바이러스의 서열을 모두 확인한 뒤 적합한 서열을 선정해 항원으로 사용하기 위한 재조합 FMDV를 합성하였다. 이들을 발현시켜 항원으로 삼아 다클론 항체 및 단일클론 항체를 만들었으며, 자성입자와 올리고머를 각각 항체에 고정시켜 본 실험에 사용하였다. Western blot과 ELISA 반응과 real-time PCR 결과를 토대로 immuno-PCR을 이용하여 한국형 구제역 바이러스(A형)를 검출해낼 수 있다는 결과를 도출하였다. 연구의 결과는 본 진단법이 차후 한국형 구제역 바이러스를 더 민감하게 검출할 수 있는 진단법의 토대가 될 것이라 여겨진다. In the case of foot-and-mouth disease (FMD), there is a great deal of impact on the national economy due to the disposal of diseases, the cost of disease control such as vaccination, reduction of productivity, and restriction of international trade of livestock products. Therefore, appropriate diagnostic methods for sensitive, accurate and rapid identification of virus serotypes are continuously required in terms of early prevention of FMD. This study was conducted to confirm the feasibility of immuno-PCR diagnostic method for the more sensitive detection of Korean FMD virus (FMDV). We synthesized a partial FMD type A viral gene. Protein antigen, monoclonal and polyclonal antibodies of FMDV were cloned, expressed and purified and then magnetic particles were attached to polyclonal antibodies and and oligomers to monoclonal antibodies for the immnuno-PCR. We confirmed the antigen-antibody and oligomer reaction using ELISA, Western blot, and real-time PCR. These results show that Korean FMDV can be detected by using difference of Ct values between positive group and negative group using immuno-PCR.. The results of this study also suggest that this technique will be the basis of the diagnosis method to detect Korean FMDV more sensitively in the future.
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