Characterization of genes controlling ginsenoside biosynthesis and application to metabolic engineering in Panax ginseng

한정연 강원대학교 대학원 2008 국내박사

인삼 (Panax ginseng)은 예로부터 건강을 증진시키는 약재로 가장 널리 알려진 약용식물이다. 인삼 뿌리에는 트리터페노이드 사포닌이라고 불리는 진세노사이드가 함유되어 있는데 이는 인삼 생리활성 성분을 대표하는 이차대사 산물이다. 인삼 사포닌은 메발론산으로부터 이스프레노이드 생합성 사이클을 거친다. 스쿠알렌 에폭시다제는 스쿠알렌을 옥시도스쿠알렌으로 바꾸게 하는데 이과정으로부터 사포닌 및 식물스테롤의 생합성과정이 분지된다. 한편 인삼 진세노사이드의 생합성에 결정적으로 관여하는 옥시도스쿠알렌 사이클라제는 담마란다이올 II 합성 유전자이며 이로부터 담마린다이올이라는 인삼 사포닌의 전형적인 골격이 만들어진다. 본 학위논문에서는 스쿠알렌 에폭시다제와 담마란다이올 합성 유전자를 분리하고 기능을 규명하였다. 또한 3국의 삼 (wild-grown P. ginseng, P. quinquefolium, 및 P. japonicum)으로부터 부정근을 유도하고 증식하기 위한 배양조건 개발하였고 특히 메틸 자스몬 산을 처리하였을 경우 인삼 진세노사이드 생합성에 관여하는 유전자의 발현을 비교하였다. 이 결과 스쿠알렌 에폭시다제(PgSE1)는 1,609-bp로 된 유전자이며 59.1 kDa 아미노산으로 구성되어 있었다. 인삼 진세노사이드 합성 전구물질 및 메틸 자스몬산을 처리한 경우 PgSE1 mRNA의 발현이 증가함을 확인하였으며 아울러 진세노사이드 생합성이 증가되었다. 스쿠알렌 에폭시다제를 post-transcriptional gene silancing (RNAi)라는 기법으로 발현을 억제시킨 형질전환 뿌리를 유도한 결과 인삼 진세노사이드의 함량이 50% 줄어들어서 스쿠알렌 에폭시다제는 인삼 진세노사이드 생합성에 중요한 유전자임을 밝혔다. 한편 인삼 진세노사이드의 기본 골격은 담마란다이올이라는 아글리콘인데 이는 옥시도스쿠알렌 사이클라제 일종인 담마란다이올 합성 유전자가 관여한다. 담마란다이올이라고 추정되는 유전자를 인삼의 화아에서 분리한 유전자한 다음, DDS라고 명명하였다. 이 유전자는 화아에서 가장 발현율이 높았다. 메틸 자스몬산 처리시 강하게 DDS발현이 증가되었다. 또한 이 유전자를 이스트뮤탄트 (erg7)에 발현시켰을 경우 이스트에서 담마란다이올 및 하이드록시담마라논이 생성됨을 LC/APCIMS로 확인하였다. 한편 DDS 유전자를 RNA interference (RNAi) 방법을 이용하여 형질전환 인삼을 제작한 결과 형질전환체의 뿌리에 진세노사이드 함량이 84.5%가 감소됨을 확인하였다. 한편 산삼 뿌리로부터 부정근을 유도 하기위한 조건을 조사한 결과 배지에 NH4NO3를 제거해주는 것이 매우 효과적이었으며 이러한 경향은 미국삼 (P. quinquefolium) 및 죽절삼 (P. japonicum)에서도 같은 경향을 보였다. 산삼이 나이가 들수록 부정근 유도율이 현저히 감소 되었다. 산삼의 부정근을 효과적으로 증식시키기 위해서는 부정근 절편을 NH4NO3가 제거된 배지에서 2주간 배양한 후 NH4NO3가 첨가된 배지에서 배양하는 2단계 배양방법을 이용하는 경우 매우 효과적이었다. NH4NO3가 제거된 부정근의 유도를 촉진시키는 조건에서는 사포닌 생합성 유전자의 발현이 높게 나타났으며 진세노사이드 또한 생합성능이 증가되었다. Panax ginseng is one of the most highly regarded of herbal medicines in the Orient, where it has gained an almost magical reputation for being able to maintain the quality of life. Ginseng roots containing tetracyclic triterpenenoid saponins, called to ginsenosides, those are the major effective ingredients in P. ginseng. Mevalonate is the preferential precursor for triterpene biosynthesis. The enzyme squalene synthase catalyzes the first step from the central isoprenoid pathway towards triterpenoid biosynthesis. Squalene synthase catalyzes the reductive condensation of two molecules of FPP to squalene, via the intermediate presqualene diphosphate. Squalene epoxidase catalyzes the conversion of squalene to 2,3(S)-oxidosqualene which is the first oxygenation step in the sterol biosynthetic pathway. Both phytosterols and triterpenes in plants are synthesized from the product of cyclization of 2,3-oxidosqualene. The 2,3-oxidosqualene cyclases compose a family of biocatalysts that convert 2,3-oxidosqualene to polycyclic triterpenes. The step in ginsenoside synthesis involves cyclization of 2,3-oxidosqualene to oleanane and a dammarene-type triterpene skeleton. The first committed step in ginsenoside synthesis is the cyclization of 2,3-oxidosqualene to dammarenediol II by the oxidosqualene cyclase (dammarenediol synthase). In this thesis, two genes such as squalene epoxidase and dammarenediol II synthase were isolated and characterized their functions in thebiosynthesis of ginsenosides in ginseng roots. Moreover, adventitious root culture system in three Panax species (wild-grown P. ginseng, P. quinquefolium, and P. japonicum) were extablished, and expression of the genes involved in triterpene biosynthesis in the ginseng advnetitious roots was analyzed by RT-PCR after treatment with methyl jasmonate. Squalene epoxidase, catalyzes the epoxidation of squalene to 2,3-oxidosqualene, is branch points for the committed step for triterpene and phytosterol biosynthesis. In this thesis, squalene epoxidase gene (PgSE1) was isolated and the role of PgSE1 on the biosynthesis of triterpene and phytosterol was investigated. A ORF cDNA coding PgSE1 was a 1,609-bp with a predicted molecular mass of 59.1 kDa amino acids. Methyl jasmonate treatment resulted in obvious accumulations of PgSE1 mRNA in root compared with the response by the control. Three precursor treatments (mevalonate, farnesol and squalene) resulted in enhanced expression of squalene synthase (PgSS1), squalene epoxidase (PgSE1) and dammarenediol II synthase (PgDDS) but no change in the expression of cycloartenol synthase (PNX). Ginsenoside analysis revealed that squalene treatment was the most effective for accumulation of ginsenoside compared to other two precursor treatments. Post-transcriptional gene silancing (RNAi) of PgSE1 gene in transgenic P. ginseng resulted in silencing of PgSE1 expression, which resulted in reduced ginsenosides accumulation at 50% in roots. These results indicate that expression of PgSE1 is important regulator for the biosynthesis of ginsenosides in P. ginseng. The first committed step in ginsenoside synthesis is the cyclization of 2,3-oxidosqualene to dammarenediol II by the oxidosqualene cyclase (dammarenediol synthase). The expression of dammarenediol synthase gene (DDS) together with the genes involved in ginsenoside biosynthesis (SS, SE, PNX, PNY, PNY2 and PNZ) was analysed. Expression of DDS mRNA was higher in flower buds compared to root, leaf and petiole of ginseng plants. Elicitor (methyl jasmonate) treatment upregulated the expression of DDS mRNA. Ectopic expression of DDS in yeast mutant (erg7) lacking lanosterol synthase resulted in the production of dammarenediol and hydroxydammarenone, which were confirmed by LC/APCIMS. RNA interference (RNAi) of DDS in transgenic P. ginseng resulted in silencing of DDS expression, which leads reduction of ginsenosides production to 84.5% in roots. These results indicate that expression of DDS played a vital role in the biosynthesis of ginsenosides in P. ginseng. Adventitious roots were produced directly from root segments of Panax ginseng seedlings when cultured on an MS solid medium containing 3.0 mg L-1 IBA. Omitting NH4NO3 from this medium greatly enhanced both the frequency of adventitious root formation and the number of roots per explants. This frequency declined markedly with the age of the root, but could be increased through repeated sub-culturing events. A two-step procedure that included NH4NO3-free media for the first two weeks of culture, followed by transfer onto media containing NH4NO3 for another four weeks, greatly improved total fresh weights of these adventitious roots compared with a method of continuous culture over six weeks in media that always contained NH4NO3. Expression of the genes involved in triterpene biosynthesis was analyzed by RT-PCR. Ginsenoside contents were enhanced by the omission of NH4NO3 and were also greatly increased by treatment with methyl jasmonate. Adventitious root culture system in three Panax species (wild-grown P. ginseng, P. quinquefolium, and P. japonicum) was established to analyze their ginsenoside productivity. Adventitious roots were induced directly from segments of seedlings after cultured on MS solid medium containing 3.0 mg/l IBA. Omission of NH4NO3 from the medium greatly enhanced both the frequency of adventitious root formation and number of roots per explants in all the three Panax species. However, elongation of post-induced adventitious roots was enhanced on medium with NH4NO3. Two-step culture protocol: NH4NO3-free medium for first two weeks of culture, followed by NH4NO3 containing medium for further 4 weeks, greatly enhanced the fresh weight increase of adventitious roots in all the three ginseng species. The fresh weight of adventitious roots was high in P. quinquefolium and low in P. ginseng, followed by P. japonicum regardless of the composition of medium. Pattern and content of ginsenosides in adventitious roots differed among the three Panax species. Total ginsenoside content of adventitious roots in P. quinquefolium, P. ginseng, and P. japonicum was 8.03, 15.7 and 1.2 mg/g dry weight, respectively. Among the three speices, adventitious roots in P. quinquefolium produced high amount of ginsenosides. The pattern of ginsenoside fractions between P. ginseng and P. quinquefolium was similar but the amount of ginsenoside differed between the two. While, in P. japonicum, total ginsenoside content was very low and some ginsenosides such as ginsenoside Rb2 and Rf were not detected.

심첨부 비후성 심근증과 스트레스성 심근증에서 심전도 소견의 차이

한정연 조선대학교 2010 국내석사

목적 심첨부 비후성 심근증과 스트레스성 심근증으로 허혈성 심질환과 비슷한 심전도 이상을 보일 수 있는 대표적인 질환으로 T파 역전이나 QT 간격의 연장을 일으킬 수 있다. 이로 인해 허혈을 배제하기 위한 불필요한 심도자술의 시행이 증가되고 있다. 이런 질환군의 환자들의 임상적 특징을 분석하고, 환자의 현병력, 계통검사, 임상 증상을 비교하고 심전도 소견의 차이점을 밝힘으로써 이들 질환 사이에 감별진단에 대하여 알아보고자 본 연구를 시행하였다. 방법 2004년 2월부터 2009년 11월까지 조선대학교 병원에 내원하여 심첨부 비후성 심근증과 스트레스성 심근증을 진단 받은 39명을 대상으로 하였다. 결과 심전도에서 QT 간격과 교정 QT 간격은 스트레스성 심근증에서 심첨부 비후성 심근증에 비해 통계학적으로 유의하게 연장되는 소견이 관찰되었으며, T파 역전 곡선의 최저점에서 끝나는 시점까지의 시간은 심첨부 비후성 심근증에서 스트레스성 심근증에 비해 짧았으며 T파 역전은 심첨부 비후성 심근증에서 더 좁고 깊게 나타났으며 깊이와 너비의 비를 측정한 결과 스트레스성 심근증에서 심첨부 비후성 심근증에 비해 크게 측정 되었으며 이는 통계학적으로 유의한 결과를 보였다. 결론 심전도에서 관찰되는 QT 간격이나 교정 QT 간격, T파 역전에 있어서 심첨부 비후성 심근증과 스트레스성 심근증의 두 군 사이에 통계학적으로 유의한 차이가 있으며, 이러한 심전도 소견의 차이를 통해 질환의 예측에 도움을 주리라 사료된다. (Background) Apical hypertrophic cardiomyopathy and stress-induced cardiomyopathy are the nonischemic causes that could show the T-wave inversion and QT prolongation in ECG. There are no established ECG criteria that adequately distinguish between the two. The aim of this study was to evaluate the distinctive ECG findings and to make a diagnosis accurately, thereby to discriminate between the two. (Method) Twenty patients diagnosed apical hypertrophic cardiomyopathy and nineteen patients diagnosed stress-induced cardiomyopathy were included at Chosun University Hospital from February 2004 to November 2009. We have analyzed retrospectively the admission 12-lead ECGs of patients for QT interval, corrected QT, peak to end time of T-wave, T-wave width, depth, and width/depth. The corrected QT was calculated by the Bazett's formula. (Result) The QT and cQT interval in patients with apical hypertrophic cardiomyopathy is more longer patients with than in those with stress-induced cardiomyopathy (p<0.009, p<0.001). Also, peak to end time of T-wave, T-wave width/depth in patients with apical hypertrophic cardiomyopathy is more longer and greater than in those with stress-induced cardiomyopathy (p<0.002, p<0.001). T-wave width and depth with apical hypertophic cardiomyopathy is more narrow and deeper than in those with stress-induced cardiomyopathy(p<0.004, p<0.001). (Conclusion) ECG findings results in a distinctive QT interval, cQT, T-wave amplitude difference that allows discrimination between apical hypertrophic cardiomyopathy and stress-induced cardiomyopathy. Key word : Apical hypertrophic cardiomyopathy, Stress-induced cardiomyopathy, Electrocardiography.

Graphene hollow capsules prepared by the layer-by-layer deposition

한정연 서울대학교 대학원 2012 국내석사

Since the first successful isolation of graphene in 2004, the field of graphene research has blossomed over the last several years owing to their superior properties such as high electrical and thermal conductivity, strong mechanical strength, flexibility, and so forth. Among many production methods of graphene, the exfoliation of graphite oxide (i.e. graphene oxide (GO)) enables the layer- by-layer (LbL) deposition, which takes advantages of electrostatic attractions between GO sheets. In the present study, we report graphene hollow capsules, recently reported 3-dimensional graphene structure, made of differently sized GO sheets with aim of accurate control of their mechanical properties. A fabrication of graphene hollow capsule was carried out by electrostatic LbL deposition of oppositely charged GO sheets on silica colloidal templates followed by template removal with hydrofluoric acid treatment. A dispersion of random-sized GO sheets was separated by modulating their dispersion stability and controlling destruction in grain structure. Dispersion stability of GO sheets was controlled by pH value of solution, directly related to the degree of ionization of their functional groups, and centrifugation. Destruction in grains of GO sheet was simply controlled by ultrasonication. Those size-fractionized GO sheets provide controllability of mechanical properties of capsules, which were confirmed by scanning electron microscopy (SEM) and force spectroscopy by scanning probe microscopy (SPM). Furthermore, the effect of reduction was also investigated via thermal reduction in inert atmosphere. The present study offers hollow capsules with narrowly size-distributed GO sheets which allow the clear pathway for overcoming intrinsic problem of GO composite system; a heterogeneity in size of GO sheets due to random destruction during exfoliation. This novel graphene hollow capsule system may be appropriate for replacing organic/inorganic capsules widely studied in drug delivery, bio-imaging, and framework for catalysts as graphene provides unique characteristics of biocompatibility, mechanical strength, electrical and thermal conductivity. 본 연구는 Layer-by-Layer 적층법을 이용하여 중공형 그래핀 캡슐을 형성하고 이를 구성하는 산화 그래핀이 캡슐의 기계적 특성에 미치는 영향에 대한 연구로서, 산화 그래핀의 적층 횟수에 따른 두께, 크기, 그리고 열적 환원에 의한 캡슐의 구조적 변화를 다각적으로 관찰하였다. 중공형 캡슐 구조를 구현하기 위해 표면을 카르복실기로 치환시킨 실리카 구형 입자를 템플레이트로 사용하여 불화수소산(hydrofluoric acid)으로 선택적으로 제거하였으며, 산화 그래핀의 크기를 조절하기 위해 용매의 pH 값과 초음파처리 시간을 변경하여 다양한 크기 (59 ~ 485 nm)의 산화 그래핀 용액을 형성하였다. 이와 같은 방법으로 준비된 캡슐은 적층 횟수가 많거나 산화 그래핀의 크기가 클수록 본래 템플레이트의 구형 구조를 유지하는 경향을 보였으며, 특히 열적 환원을 가할 경우 그 변화가 가장 분명하게 관찰되었다. 이러한 경향은 힘 분광기 (force spectroscopy)를 통한 각 캡슐의 상대적 경도분석에서도 동일하게 확인되었다.

대학생의 문화적 자기관 유형과 자기통제력이 주관적 안녕감에 미치는 영향

한정연 숙명여자대학교 대학원 2008 국내석사

The report that the overall Korean university students' well-being is relatively lower than that of other countries' raises a question about the present state of Korean students' well-being and related factors. The subjective well-being means the evaluation of an individual's life, and the evaluation includes both the cognitive factors which evaluate the life satisfaction and emotional factors about positive- or negative emotion. The purpose of this study was to find out the effects of independent and interdependent self-construal types and self-control on the university students' well-being. To verify this purpose a questionnaire using indices of cultural self-construal, self-control and subjective well-being for the subjects of 300 university students was conducted. Four groups were formed on the basis of the medians of independent self-construal and interdependent self-construal which are cultural self-construal subtypes, and then differences among the groups in their subjective well-being according to the relative level of self-construal types were examined using ANOVA. The subjective well-being in the groups of high-independent and high-dependent self-construals was the highest, whereas that in the groups of low-independent and low-dependent was the lowest. In addition the analysis of the effects of each cultural self-construal type on the subjective well-being using the standard polynomial regression method revealed that interdependent self-construal increases the positive emotion and life satisfaction, and decreases the negative emotion in the life, but the independent self-construal did not affect the positive emotion significantly and increases the negative emotion and life satisfaction. The analysis of the effects of the self-control on the subjective well-being using the standard linear regression method revealed that the self-control increased the positive emotion and life satisfaction of the subjective well-being and decreased the negative emotion. Finally, the Stepwise Multiple regression analysis to identify the most affecting factor on the subjective well-being among cultural self-construal types and self-control showed that the self-control forecasted the most the subjective well-being at overall level. These results implicate the effects of the cultural self-construal types, each cultural self-construal and self-control according to relative level on the subjective well-being. Based on these results of the study were discussed the implication of effects of the cultural self-construal types and self-control on the subjective well-being, limits of this study and recommendations for further studies. 우리나라 대학생들이 다른 연령대 구성원보다 안녕감 혹은 삶의 만족 수준이 낮으며 다른 나라의 대학생들에 비해서도 상대적으로 낮은 주관적 안녕감을 나타낸다는 보고는 우리나라 대학생들의 주관적 안녕의 현황과 관련 요인에 대한 의문을 제기한다. 주관적 안녕감이란 개인의 삶에 대한 평가를 뜻하는 것으로 이러한 평가는 삶에 대한 만족을 판단하는 인지적 요소와 긍정 정서 또는 부정 정서에 대한 정서적 요소를 모두 포함하고 있다. 이에 본 연구는 문화적 자기관 유형과 자기통제력이 대학생의 주관적 안녕감에 미치는 영향을 살펴보기 위해 실시되었다. 본 연구의 목적을 확인하기 위해 대학생 300명을 대상으로 자기관 척도, 자기통제력 척도, 주관적 안녕감 척도를 사용하여 설문을 실시하였다. 문화적 자기관의 하위 유형인 독립적 자기관과 상호의존적 자기관의 중앙치를 기준으로 상하로 분류한 네 집단을 구성한 뒤 ANOVA를 사용하여 자기관 유형의 상대적 수준에 따른 집단 간에 주관적 안녕감에 차이가 있는지를 살펴보았다. 고독립-고의존 자기관 집단의 주관적 안녕감이 가장 높았으며 저독립-저의존 자기관 집단의 주관적 안녕감이 가장 낮은 것으로 나타났다. 또한 문화적 자기관 유형의 각각이 주관적 안녕감에 미치는 영향을 알아보기 위하여 실시한 표준 중다 회귀 방법으로 분석한 결과, 상호의존적 자기관은 생활에서의 긍정 정서와 삶 만족은 증가시키고 부정 정서는 감소시키는 것으로 나타났으나 독립적 자기관은 긍정 정서에는 유의미한 영향을 주지 않고 부정 정서를 증가시키며 삶 만족은 증가시키는 것으로 나타났다. 자기통제력이 주관적 안녕감에 미치는 영향을 알아보기 위해 표준 회귀 방법으로 분석한 결과, 자기통제력은 주관적 안녕감의 긍정 정서와 삶 만족은 증가시키고 부정 정서는 감소시키는 것으로 나타났다. 마지막으로, 문화적 자기관 하위 유형과 자기통제력 중 주관적 안녕감에 가장 큰 영향을 미치는 변인을 알아보기 위하여 단계적 회귀분석을 실시한 결과, 전체적인 수준에서 자기통제력은 주관적 안녕감을 가장 크게 예측하는 변인으로 나타났다. 이러한 결과는 상대적 수준으로 분류된 문화적 자기관 혼합유형에 따른 주관적 안녕감의 차이와 각각의 문화적 자기관 유형, 자기통제력이 주관적 안녕감에 미치는 영향을 시사하는 것이다. 이러한 연구결과를 토대로 문화적 자기관 유형과 자기통제력이 주관적 안녕감에 영향을 주는 점이 시사하는 바와 본 연구의 제한점과 후속연구를 위한 제언에 대해 논의하였다.

노인부양의식에 미치는 영향요인 연구 : 인천지역 베이비부머들을 중심으로

한정연 가천대학교 보건복지대학원 2012 국내석사

고령 사회의 진전과 저출산 현상의 심화는 예기치 못했던 여러 가지 사회문제를 발생시켰다. 그중에서 빼놓을 수 없는 것이 노인부양(老人扶養)의 문제이다. 노인 수는 계속 늘어나는데 비해, 이들을 부양해야 하는 젊은이들은 줄어듦으로써 노인부양 부담이 빠르게 증가하고 있는 것이다. 우리나라에선 전통적으로 노인들이 노후를 자녀에게 의지해서 살아가는 것이 일반적이었다. 그러나 산업화의 영향으로 핵가족제도가 확산되면서 자녀부양의 전통이 희박해지고 있다. 사회가치관도 급속히 바뀌면서 자녀가 부모부양에 있어서 규범적 책임을 다 해줄 것이라고 기대하는 것은 더 이상 어렵게 되었다. 사회 변화에 맞춰 노인들도 자녀들의 효(孝) 의식에 노후를 기대려는 생각을 스스로 접고 있다. 이런 가운데 경제성장에 따른 국민소득의 향상, 장수(長壽)시대의 도래는 한국인에게 노후생활에 대한 기대감을 높이고 있다. 이처럼 상반된 사회 분위기 속에서, 예비노인이라고 할 수 있는 베이비부머들이 단계적인 은퇴에 들어서고 있다. 우리나라 인구의 14.6%를 차지하는 베이비부머들의 동향은 앞으로 한국사회에 큰 영향을 끼치게 될 것이다. 본 연구는 이러한 관점에 입각하여 중․고령에 접어든 베이비부머들이 부모부양에 대해 어떤 인식을 가지고 있는지, 또 자신들이 노후에 대해 어떻게 생각하는지를 살펴보았다. 이를 위해 인천지역에 거주하는 베이비부머를 대상으로 설문조사를 실시하였다. 설문은 노인부양실태, 노인부양에 대한 인식과 부양의식 수준(경제적 부양, 신체적 부양, 정서적 부양)에 대한 것으로 구성되었으며, 주요 연구 결과는 다음과 같다. 첫째, 베이비붐 세대는 전통적인 가치관을 가지고 있으면서도 그 이데올로기를 고수하지는 않았다. 즉, 부모부양에 대한 책임이 ‘자녀’에게 있음을 인지하면서도, 본인의 노후 생활을 자녀와 함께하는 것에 대해서는 부정적인 입장을 보였다. 둘째, ‘베이비붐 세대’의 부양의식을 경제적, 신체적, 정서적인 측면으로 나누어 살펴본 바, ‘경제적 부양’은 ‘자가 주택 소유 여부’와 ‘가구유형(직계가족 여부)’에 따라서, ‘신체적 부양’은 ‘자가 주택 소유 여부’와 ‘부모의 건강 상태’에 따라서 유의미한 차이를 보이는 것으로 확인되었다. 한편, ‘정서적 부양’에는 ‘부모의 건강 상태’가 의미 있는 영향을 미치고 있었다. 이상의 연구를 통해 다음과 같은 시사점을 얻을 수 있다. ‘베이비붐 세대’에 있어서 노인부양(老人扶養)의 문제는 은퇴와 마찬가지로 경제적인 측면에서 매우 중요한 것이다. 그럼에도 불구하고 아직까지 사회적 관심이 매우 낮은 수준에 머물고 있다. 그 동안 노인부양의 문제는 청소년 계층에 국한되어 다루어져 왔다. 하지만 이는 더 이상 특정 연령층에만 해당되는 문제가 아니다. 노인부양과 관련된 정책의 실효성을 높이기 위해서는 관심의 대상과 연구의 범위를 확장하여 근거를 충분하게 마련할 필요가 있다. Low fertility and an ageing population create social problems. One of the most sensitive social issues is the support of senior citizens. It is difficult to assure that the support of aging parents is a common and normative responsibility of family members. With the improvement of economic and a longer average life expectancy, traditional family values have recently changed. It is expected that this phenomenon is more serious for the Korean Baby-Boom Generation(born from 1955-63) who have experienced dramatic social changes. This study examines the impact factors on the support for the elderly and subsequent public interest of the Baby-Boom Generation. For the empirical analysis, a survey was performed with structured questionnaires about the characteristics, actual conditions for support, and awareness of support for citizens located in the city of Incheon. The awareness of support is divided into: economic support, physical support and emotional support. The main findings are detailed as follows. The Baby-Boom Generation has a negative perception of living with children in their old age, despite the recognition that children have the responsibility to provide old-age support to parents. Secondly, there was little difference between the detailed components; economic support, physical support and emotional support; however, the component that showed the most significance was economic status. The house-owner has a strong awareness of the economic and physical aspects of support. Beyond that, individual factors like type of house(stem family) and parent's health conditions partially affected the Baby-Boom Generation consciousness to support senior citizens. This research help explains the Baby Boomer's behavioral patterns as well as the importance of a diversified study design. Current studies on awareness of support for the elderly have focused on adolescents; however, it is necessary to extend a range of interests to implement an evidence-based policy.

셀러리의 체세포배 발생과정에 있어서 다당류함량 변화

한정연 전북대학교 대학원 1994 국내석사

Embryogenic cell clusters were induced from the hypocotyl segments of celery seedlings in liquid MS medium supplemented with 1.0 ㎎/L 2.4-D. When the clusters were transferred into the medium without growth substance, somatic embryos were formed and developed. Hypocotyl segments, embryogenic cell clusters, and embryos (gloular, heart, torpedo, cotyledonary) were fixed into 100% methanol and fractionated into methanol, hot-water, starch, and cell wall (pectic, hemicellulosic, TFA, and cellulosic) fractions, respectively, to elucidate changes of sugar contents during somatic embryo formation and development. In methanol fractions, the sugar contents decreased predominantly at torpedo stage, suggesting that methanol-soluble UDP-glc derived from starch is used as a precusor for biosynthesis of cell wall polysaccharides. In hot-water and starch fractions, the contents slowly decreased to the level of hypocotyl segments. The sugar contents in hemicellulosic fractions was dramatically decreased at heart stage, which was similar to that in hypocotyl segments. The content in cellulose fractions exhibited a tendency of decrease. The contents in the other fractions and UA contents in pectic and hemicellulosic fractions did not change. The compositions of neutral sugar in hemicellulosic fractions was analyzed by GC. The ratio of xylose in the neutral sugar increased whereas, at torpedo stage, the ratios of galactose and arabinose increased and decreased, respectively. These results indicate that metabolic turnover of xyloglucans, arabinoglucans, and arabinogalacturonans occur during somatic embryo formation and development.

인체실험윤리에 관한 주요 문헌 연구

한정연 동아대학교 대학원 2011 국내석사

오늘날의 연구윤리에 관한 대부분의 지침들은 뉘른베르크 강령과 헬싱키 선언, 벨몬트 보고서에 근거한다. 이 문헌들은 인류의 역사적 경험을 토대로 만들어진 만큼 여전히 그 가치를 인정받고 있으며, 각 나라에서 그 실정에 맞는 연구 윤리 지침과 법적 규제를 만드는데 강력한 영향력을 행사하고 있다. 이 논문은 인간 피험자를 대상으로 하는 의학연구에서의 주요문헌들을 검토하여 그것의 역사적 의미와 교훈을 재발견하고, 앞으로 연구윤리가 나아가야 할 방향을 제안한다. 과학적 의학 기술의 발달과 인류의 복지증진을 위해 인체실험은 불가피하며 이러한 상황에서 피험자의 권리와 안전을 보장하기 위해서는 시류에 뒤처지지 않는 체계적이고 합리적인 법적 안전장치가 마련되어야 한다. 그러나 그것만으로는 충분하지 않으며 의사의 윤리의식과 사명감, 책임감이 뒷받침 되어야만 한다. 즉, 역사적 비극을 되풀이하지 않고 공중의 관심과 기대에 부응하기 위해서는 의학 연구자들에 대한 지속적인 교육을 통한 윤리 의식의 확립이 필요하며, 이를 위해서는 연구윤리가 독립된 하나의 학문으로 자리 잡는 것이 중요하다.

유치원 교사의 직무 및 수업이외의 스트레스와 교육활동간의 관계 연구

한정연 아주대학교 2008 국내석사

본 연구의 목적은 유치원 교사의 직무스트레스와 교육활동 간의 관계와 유치원 교사의 수업이외에 오는 직무스트레스와 교육활동과의 관계를 밝히고자 하였다. 유치원 교사의 직무스트레스를 측정하기 위하여 본 연구자는 본 연구에서는 김지현(1994)이 6개의 요인으로 수정한 도구를 토대로 사용하였다. 유치원 교사의 교육활동을 조사하기 위하여 Sreeffy와 Jones(1980)의 교육활동에 관한 설문지를 유치원 조직에 맞도록 재구성하였다. 본 연구의 대상은 경기도 공·사립유치원 교사 122명이었으며, 수집된 자료는 평균, 표준편차, 일원변량분석, 상관관계분석을 실시하였다. 연구결과는, 첫째, 유치원 교사들의 직무스트레스 정도는 전체 평균점수는 보통수준으로 나타났다. 가장 스트레스가 높게 나타는 것으로는 ‘업무관련 요인’이었으며, 두 번째가 ‘원아들과의 관계’이며, 스트레스를 비교적 적게 느끼는 요인은 ‘개인 관련 요인’이었다. 둘째. 유치원교사의 직무스트레스와 교육활동과의 관계에서 유의한 상관관계를 나타냈다. 요인별로 대부분 높은 역 상관을 나타내어 직무스트레스가 높으면 교육활동의 수준이 떨어짐을 알 수 있었다. 각 요인별로 살펴보면 체벌빈도는 직무스트레스요인들과의 상관관계를 거의 갖고 있지 않고 있으며 직무 스트레스요인 중에서는 수입 요인이 교육활동 요인과의 상관관계에서 낮게 나타났다. 그러나 개인관련 요인과 행정적 지원관련 요인은 교육활동과의 높은 역 상관을 나타냈다. 셋째, 유치원 교사의 수업시간이외에 부담을 느끼는 업무와 교육 활동 간의 관계는 유의미한 차이가 없는 것으로 나타났다. 유치원교사들이 수업이외에 부담을 느끼는 업무를 살펴보면 유치원 교사가 수업이외에 부담을 느끼는 업무를 총 9개의 요인으로 분류하였다. 요인별로는 다음날의 수업준비, 수업활동 평가 및 아동평가기록, 환경정리 및 청소, 등하교 지도, 학부모 면담, 행정적인 사무처리, 교직원회의, 교육계획 및 교구제작, 기타로 나누었다. 그 중 빈도수가 10이하인 항목은 제외하였다. 유치원 교사가 수업이외에 업무 중 가장 부담을 느끼는 요인으로는 학부모 면담(20.5%)이 가장 높게 나타났으며, 그 다음으로는 행정적인 사무처리(19.7%), 수업활동 평가 및 아동평가 기록(18.0%)으로 나타났다. 가장 부담을 적게 느끼는 근무내용은 교직원회의(2.5%)임을 알 수 있다. 이와 같이 본 연구에서는 경기도 공·사립 유치원교사들을 대상으로 이루어졌지만, 공·사립 유치원교사의 직무스트레스의 차이검증, 또는 유치원교사의 직무스트레스 대처방법에 관한 후속 연구가 심층적으로 이루어졌으면 한다.

근거 중심의 수술 상처 관리 알고리즘 수용 개작 : ADAPTE를 사용하여

한정연 서울대학교 대학원 2011 국내석사

동물 속담을 활용한 한국어문화 교육 방안 연구

한정연 경희대학교 교육대학원 2012 국내석사

The purpose of this study is to establish an effective education plan concerning the most useful ways of teaching Korean language and culture by means of using animal proverbs. Language is a container for culture, and culture is decorated with language. That is, language and culture are connected in an inseparable relationship, so culture is reflected in language or through language. The ways of thinking and patterns of human behavior are related to language, and these patterns have a profound influence on human beings’ expression of ideas. Therefore, to perform a successful act of communication with Koreans, it is crucial for Korean language learners to understand the cultural content in context. One of the most effective ways to enhance cultural knowledge of Korea is the use of Korean proverbs, which exhibit well-compressed features of Korean culture. Proverbs are developed by a society throughout the long history of the society’s language and thus reflect the true life and emotions of the people, while, at the same time, teaching lessons and sometimes even satirizing the world. For these reasons, proverbs do not give long-winded explanations, but they help convey the speaker’s original meaning across to the other party. If we make good use of proverbs in Korean education, students can raise their language ability and understand Korean culture and emotions at the same time. Among the many types of proverbs, the current study is specifically aimed at animal-related proverbs, with a view to helping Korean learners' understand the Korean language and culture. Animals are very significant living things in Korea, so people cannot live without them. From ancient times, people have ascribed special meanings to animals by observing their appearance or habits. Through simple observation of animals, people identified clear characteristics. That is why Korean uses a lot of animal-related proverbs. Thus, if we teach Korean language and culture through the symbolic meanings of animal proverbs, we can achieve three important educational values. First, the use of such proverbs motivates Korean learners by means of the interesting and amusing topic of animal behavior. Second, the approach is a fun and interesting way to remember proverbs. Finally, the study of proverbs helps overcome the difficulties that learners face due to the wide differences between their own language and culture and that of Korea. In the first chapter, I identify the purpose of this study, confirming the necessity of proverbs education and identifying the research methods for this study. Also, I explain the current situation in Korean education based on preceding studies of proverbs. This section is divided into three parts: proverbs study in idioms education, proverbs study in Korean cultural education, and animal proverbs study. In the second chapter, I consider the definition of culture and its characteristics. The study embraces the view that culture and language are inseparable, so they should be considered together by virtue of their close relationship. Among cultural factors, I confirm that proverbs constitute a powerful example of one nation's way of thinking, mindset, ethos, and wisdom. Knowledge of proverbs helps improve communication and possesses immense educational value as a means of cultural education. In the third chapter, I analyze five different university textbooks (from Kyung Hee University, Korea University, Seoul National University, Sungkyunkwan University, and Yonsei University) in order to grasp the current situation. Also, three kinds of publications on proverbs are analyzed as well. To create a list of animal proverbs with high frequency, I first surveyed 108 Korean subjects concerning how often they use proverbs in everyday life. After that, it was necessary to identify proverbs that would be suitable to teach learners of Korean at different levels of difficulty. To accomplish that goal, I conducted a survey of Korean language teachers in order to establish, based on their intuition, which levels the various animal proverbs belong to. Based on the results of this survey, I suggest specific proverbs for each level of learners of Korean language and literature: 7 proverbs for the beginning level, 18 for intermediate, and 11 for advanced. In the fourth chapter, I examine the symbolic meanings of the animals that are mentioned in Korean animal proverbs. According to frequency of usage, I divided the proverbs into two groups: one for the most common animal proverbs (ones that should be studied and learned) and the other for less common proverbs (ones that are interesting but not common enough to warrant memorization). Each group is classified into four categories, such as 'animal living in land', 'animal living in the sky', 'animal living in the water', and 'others.' Also, I surveyed Korean learners who are in a master's degree or doctoral degree program at Kyung Hee University in order to identify the best education plan for Korean language and culture. The survey asked whether they knew the symbolic meanings of the animals mentioned in the proverbs and how they felt about the animal's image by answering 'positive', 'negative', or 'do not know'. Through this process, I found that many students have difficulty, in fact, with regard to understanding proverbs, but, at the same time, are very interested in learning about animal proverbs with a proper understanding of the symbolic meanings. In the fifth chapter, I provide education plans with models of instruction based on the graded animal proverbs, especially with respect to the ones whose symbolic meaning was misunderstood or not known by the Korean learners who were surveyed. For the beginning level of study, I suggest teaching animal proverbs using materials such as classical drawings from ancient Korea or vocabulary-game cards. For the intermediate level, I suggest as teaching methods the use of old stories like the origins of animal proverbs, fables, or symbolic meanings of animals. For the advanced level, I suggest teaching animal proverbs by comparing cultural differences and by assigning project work to the students. In summary, this study was conducted for the purpose of defining a useful role for using proverbs in Korean education, providing an objective list of animal proverbs suitable for teaching at certain levels, determining the symbolic meanings of animals in the proverbs, and suggesting effective plans for proverbs education. All these methods are offered as practical and effective ways of motivating Korean learners and inspiring them to study Korean as well as enhancing their understanding of Korean language and culture. 본 연구는 동물 속담을 활용한 한국어문화의 효과적인 교육 방안을 마련하는 데에 그 목적이 있다. 언어는 문화를 담는 그릇이고, 문화는 언어로 장식된다. 즉 언어와 문화는 불가분의 관계로 언어 속에 문화가 투영되고 문화는 언어를 통해 반영된다. 인간의 사고방식과 행동양식은 언어와 밀접한 관계를 가지면서 표현에 영향을 미치는 것이다. 따라서 한국어 학습자가 한국인과의 성공적인 의사소통을 하기 위해서는 문화적인 맥락을 이해하고 그 속에 담긴 문화적인 내용에 대한 올바른 이해가 반드시 필요하다. 한국의 문화적인 특징이 가장 잘 압축되어 담겨 있고, 한국어 사용과의 관계 속에서 문화 능력을 효과적으로 키울 수 있는 교육 방안의 하나는 ‘속담의 활용’이다. 속담은 언어를 사용하는 사회의 오래된 역사와 더불어 삶의 모습과 정서, 교훈, 풍자가 담긴 것이기 때문에 장황한 설명을 하는 것보다 더 자연스럽게 자신의 의사를 전달할 수 있으며, 이를 한국어 교육에 적절히 활용한다면 한국어 실력뿐만 아니라 한국어 안에 포함되어 있는 한국의 문화 및 정서까지도 이해할 수 있는 좋은 방법이 될 것이다. 본 연구는 속담 중에서도 우리가 흔히 접할 수 있는 동물과 관련된 속담을 대상으로 하여 한국어 학습자의 이해를 돕고자 하였다. 사람들이 생활하는데 동물은 없어서는 안 될 중요한 생명체였기 때문에 예로부터 사람들은 동물의 외형이나 습성 등에 의미를 부여하고 그 성격을 정확하게 파악하여 동물과 관련된 속담을 많이 사용하게 되었다. 따라서 동물 속담에 나타난 동물의 상징 의미를 통해 한국어문화를 교육한다면 첫째, 동물을 소재로 하여 학습자들의 흥미를 유발할 수 있고, 둘째, 속담을 재미있고 쉽게 이해할 수 있으며 셋째, 한국어문화와의 차이에서 오는 어려움을 극복할 수 있다는 점에서 그 교육적 가치가 크다. 제1장에서는 이 연구의 목적과 속담 교육의 필요성을 확인하고 연구 방법에 대하여 구체적으로 제시하였다. 그리고 속담에 대한 선행 연구를 ‘관용어 교육에서의 속담 연구’, ‘한국 문화 교육에서의 속담 연구’, ‘동물 속담 연구’로 나누어 검토해보고 한국어 교육 분야에서의 속담 연구 현황을 파악하였다. 제2장에서는 문화의 정의와 상징 의미에 대한 특성을 알아보고, 문화 속에는 언어가 숨어있고 언어 속에는 문화가 숨어있기 때문에 문화와 언어가 서로를 떠나서는 존재할 수 없음을 확인하였다. 그 중에서 속담에 한 민족의 사고방식과 의식 구조, 정서, 지혜 등 문화 전반의 요소가 고스란히 깃들어 있음을 밝히고, 의사소통을 원활하게 하는 기능뿐만 아니라 문화 교육의 수단으로서 그 교육적 가치가 높음을 확인하였다. 제3장에서는 동물 속담 교육이 이루어지고 있는 현황을 조사하기 위해, 5개의 대학 부설 기관에서 출간한 경희대학교, 고려대학교, 서울대학교, 성균관대학교, 연세대학교의 한국어 통합 교재와 속담만을 다룬 3개의 한국어 속담 전문 교재 「속담으로 배우는 한국어 1, 2」,「살아있는 한국어 - 속담 편」, 「속담 100 관용어 100」에 나온 내용을 분석하였다. 보다 객관적인 방법을 사용하여 빈도가 높은 동물 속담 목록을 선정하기 위해 한국인 108명을 대상으로 일상생활에서 자주 듣거나 사용하는 동물 속담에 대해 설문을 실시하였다. 그리고 한국어 교육 현장에서 오랜 경험을 쌓은 한국어 교사의 직관을 조사하여 동물 속담의 등급별 난이도를 고려하였다. 마지막으로 설문 결과를 반영하여 한국어문화 교육을 위한 동물 속담 목록을 초급&#12539;중급&#12539;고급으로 나누어 각각 7개, 18개, 11개씩 제시하였다. 제4장에서는 한국인이 자주 사용하는 동물 속담에 나타나는 동물의 상징적인 의미에 대해 알아보았다. 사용 빈도에 따라 ‘표현용 동물 상징’과 ‘이해용 동물 상징’으로 크게 나누고, ‘육지에 사는 동물’, ‘하늘에 사는 동물’, ‘물에 사는 동물’, ‘기타 동물’과 같은 총 4개의 항목으로 소분류 하여 동물과 관련된 속담을 함께 제시하였다. 그리고 한국어문화 교육 방안 마련을 위해 경희대학교 일반대학원에서 석사 또는 박사과정에 있는 학습자를 대상으로 설문 조사를 실시하였다. 설문 조사에서 동물 속담에 나타난 동물의 상징적 의미를 학습자가 ‘긍정적’, ‘부정적’, 또는 ‘모르겠다.’로 응답하도록 유도하였고, 상징 의미에 대한 이해 정도와 속담에 대한 반응을 통해 동물 속담 교육의 필요성을 다시 한 번 확인하였다. 제5장에서는 한국어 학습자들이 동물 상징의 의미를 잘못 인식하고 있거나 모른다고 응답한 동물 속담을 활용하여 효과적인 동물 속담 교육 방안을 등급별로 마련하고 효과적인 수업 모형을 제시하였다. 초급에서는 어휘와 옛 그림을 통한 동물 속담 교육, 중급에서는 이야기(속담의 유래, 설화 등)를 통한 동물 속담 교육, 고급에서는 상징 의미 비교를 통한 동물 속담 교육 방안을 마련하였다. 본 연구는 한국어 교육에서 속담 교육의 의의를 찾고 동물 속담을 중심으로 한 객관적인 속담 목록을 마련하고자 하였으며, 동물 속담에 나타난 동물의 상징적 의미를 통해 등급별로 효과적인 속담 교육이 가능하도록 수업 모형을 제시하였다. 이러한 방법은 한국어 학습자의 흥미를 유발하고 학습 동기와 의욕을 높이며 한국어와 한국어문화의 이해를 돕는다는 데에 의미가 있다.