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한수곤,최인영,강찬호,고복래,최정식,이왕휴,Han, Soo-Gon,Choi, In-Young,Kang, Chan-Ho,Ko, Bok-Rai,Choi, Joung-Sik,Lee, Wang-Hyu 한국식물생명공학회 2006 식물생명공학회지 Vol.33 No.1
저온저항성 BN115 gene과 표지유전자로서 kanamycin에 저항성 있는 nptII gene을 가지고 있는 식물발현용 binary vector pBin19/BNl15가 도입된 A. tumefacience MP90을 국화잎과 공동배양 하였다. 또한 particle bombardment를 이용하여 목적으로 하는 유전자가 식물체에 안정적으로 도입되어 발현됨을 PCR 및 Real-Time PCR 검정으로 확인하였다. 국화잎과 공동배양에 사용된 Agrobacterium은 $5.0{\times}1.0{\mu}m$로 non-sporing, motile, rod 형이며, Callus는 pin이나 cork-borer에 의해 상처 난 잎 가장자리로부터 형성되어 식물체가 재분화 되었다. 유전자 도입조건은 Agrobacterium을$O.D._{600}{\approx}0.5$에서 20분간 공동배양 할 때, Particle bombardment는 helium 압력을 1,100 psi, target 거리를 9 cm로 유지했을 때, 가장 효율이 높았다. 5mg/L kanamycin이 들어 있는 배지에서 선발된 형질전환체는 PCR 분석으로 형질전환여부를 판별할 수 있었으며, 선발 10개체 중 9개체에서 purified pBN115와 같은 크기의 밴드가 형성되었다. Taq-Man probe를 이용한 Real-Time PCR 결과 $45{\sim}0.00045ng/{\mu}{\ell}$ 범위에서 pBN115 gene을 10배씩 serial dilution한 amplification plot는 일정한 간격으로 standard curve를 보였으며, slope는 -3.313975, R2는 0.998319이었다. Amplification plots의 형질전환체 $C_T$값은 $20.75{\sim}33.81$범위였으며, 유전자 copy수는 정량분석을 기초로 산출하였다. pBN115의 plasmid DNA를 serial dilution했을 때, standard는 $5.6{\times}10^{10}/45ng{\sim} 5.6{\times}10^5/0.00045ng\;copies/{\mu}{\ell}$이 었으며, 형질전환체는 $3.86{\times}10^8{\sim}12565.71 copies/{\mu}{\ell}$이었다. 따라서 PCR, Real-Time PCR 분석 결과 저온저항성 유전자가 국화의 genome에 안정적으로 도입되었음이 확인되었다. With the use of Agrobacterium and gene-gun, cold regulated gene (BN115) has been injected in Chrysanthemum leaf disc and transgenic plants have been produced successfully on the selection media containing phytohormone. To determine the presence of the transferred cold regulated gene (BN115) in the transgenic Chrysanthemum, PCR-amplification indicated the presence of that gene. Real-Time PCR for confirmation of the putative transgenic plants was established. The copy number of cold regulated gene (BN115) is extrapolated on the basis of a standard curve. Serial dilutions of known number of gene copies were in triplicates. In this diagram, PCR cycles are plotted against the fluorescence intensity. The cycle at which the fluorescence reaches a threshold cycle is inversely proportional to the starting amount of target DNA.
‘후지’ /M.9 덧가지 묘목 생산시 생장조절제 살포 횟수 경감 가능성
한수곤(Su-Gon Han),윤태명(Tae-Myung Yoon),이종섭(Jong-Seob Lee) 한국원예학회 2005 원예과학기술지 Vol.23 No.1
사과 우량 덧가지 묘목 생산시 생장조절제의 살포간격을 넓혀 살포횟수를 경감시킬 수 있는지를 알아보기 위하여 관행의 7일 간격으로 6-benzylamino purine(BAP) 600㎎ㆍℓ⁻¹와 Promalin 2%를 4회 살포한 처리를 대조구로 하여 동일농도로 10일 간격 3회, 15일 간격 2회 살포한 처리구를 두고 묘목의 소질과 덧가지 발생정도를 조사하였다. BAP 600㎎ㆍℓ⁻¹ 처리의 경우 총 덧가지 수는 7일 간격 4회 살포의 17.1개에 비해 10일 간격 3회 살포에서는 13.6개, 15일 간격 2회 살포에서는 10.9개로 살포간격이 길고 횟수가 적을수록 덧가지의 수가 적은 경향이었다. 따라서 BAP는 살포횟수 4회 처리를 하는 것이 바람직한 것으로 구명되었다. Promalin 2% 처리의 경우 30㎝ 이상의 덧가지가 10개 이상인 묘목의 비율을 제외하고 1주일 간격으로 4회 처리시 총 덧가지 15.6개, 10일 간격으로 3회 처리 14.5개, 15일 간격으로 2회 처리 15.0개로 처리간 차이가 없었으며, 길이 30㎝ 이상의 덧가지 수나 30㎝ 이상의 덧가지가 5개 이상인 묘목의 비율에서도 유의성이 인정될 정도의 차이는 없어 살포횟수 경감이 가능한 것으로 나타났다. The application of plant growth regulators (PGR) for feathering is one of the expensive operations in apple nursery tree production. In order to reduce application times of PGR, 600 mgㆍL⁻¹ of 6-benzylamino purine (BAP) and 2% of Promalin were sprayed three times at 10-day interval, or twice at 15-day interval on one-year-old ‘Fuji’ on M.9 T337/seedling rootstocks. The effects of reducing application were compared with those of control in which PGR was applied four times at 7-day interval. In a BAP trial, induction of total number of feathers increased through more often applications at shorter intervals, namely 17.1 feathers in four times, 13.6 feathers in three times, and 10.9 feathers in twice applications, respectively. In a Promalin trial, there were no significant differences in feathering among three treatments in terms of numbers of total and over 30 cm long feathers. Therefore, application times could be reduced with Promalin treatment but not with BAP treatment with longer intervals in ‘Fuji’ apple nursery production.
한수곤(Soo-Gon Han),최인영(In-Young Choi),강찬호(Chan-Ho Kang),임회춘(Hoi-Chun Lim),고복래(Bok-Rai Ko),최정식(Joung-Sik Choi) 한국자원식물학회 2006 한국자원식물학회지 Vol.19 No.1
모구로부터 단기간 내에 대량의 자구를 생산할 수 있는 분구법의 최적조건으로 분구시기, 온도, 식재용토 등을 설정하고자 본 연구를 수행하였다. 모구를 twin-scale법으로 20℃에 처리했을 때 최적 분구시기는 휴면각성기로 자구형성 및 생육상황이 수확기, 휴면기에 비해 우수하였다. 특히 품종 중에서도 Nerine bowdenii Stepani 보다는 N. bowdenii Favourite 품종의 자구 형성률이 80.3%로 수확기의 46.7%, 휴면기의 61.4%에 비해 훨씬 높았고, 형성 자구수도 구당 30.6개로 수확기 모구 사용에 비해 20.1개 이상의 자구 생산이 가능하였다. 또한 분구처리 적정 온도는 20℃로 N. bowdenii Favorite 에서 80.3%의 자구형성률과 30.6개의 자구수로 15℃의 64.5%, 23.1개에 비해 15.8%이상 높았으며, 조직 치밀도 역시 저온보다는 20℃에서 충실한 자구로 발육하였다. 분구시 구근 식재용토는 버미큐라이트가 선발되었다. 버미큐라이는 자구생성 및 생육상황이 다른 용토에 비해 우수하였고, 자구가 구당 39.4개 형성되어 관행 피트모스 처리에 비하여 37% 증가하였으며, 자구중을 비롯한 생육상황이 전반적으로 양호하였다. Nerine was originated from South Africa and around 30 kinds of species are distributed in worldwide. In present study we have characterized the division methods and growing conditions for the bulb propagation of Nerine. Result indicated that new bulb formation, and growth of N. bowdenii cultivars was better after dormancy stage compared to post-harvest and dormancy stages, under twin-scale method at 20℃ Similarly, new bulb tissue density was higher at 20℃ compared to other temperatures. Moreover, N. bowdenii Favourite exhibited better growth than N. bowdenii Stepanii and vermiculite was found to be most suitable growing medium for Nerine bulb propagation.