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      • SCOPUSKCI등재

        Trichoderma koningii에서 분리한 $\beta$-glucosidase의 작용양상

        정춘수,최지영,이헌주,맹필재,한인섭,강사욱,하영칠 한국미생물학회 2000 미생물학회지 Vol.36 No.1

        Trichoderma koningii ATCC 26113에서 분비되는 효소인 $\beta$-glucosidase를 cellobiose, sophorose, laminaribiose 및 gentiobiose 등의 기질과 반응시킨 후 효소의 transglycosylation 반응 산물을 분석하였다. 각각의 기질로부터 생성된 이당체(dimer)들을 HPLC로 분리하고 $^(1)H$-NMR spectroscopy를 통하여 분석하였다. Cellobiose를 기질로 사용하여 효소와 반응시켰을 때 그 산물에는 laminaribiose, sophorose 및 gentiobiose가 포함되었음을 확인할 수 있었다. Laminaribiose, sophorose 및 gentiobiose를 기질로 사용하였을 경우에 효소는 transglycosylation 반응을 통하여 새로운 $\beta$-glycosidic 결합을 갖는 이당체들을 생성하였다. 효소반응에 의하여 누적되는 이당체의 양은 생성속도보다는 분해속도에 의하여 결정되는 것으로 나타났다. We have examined the mode of transglycosylation, catalyzed by an extracellular $\beta$-glucosidase purified from Trichoderma koningii ATCC 26113, using cellobiose, sophorose, laminaribiose and gentiobiose as substrates. The dimers separated from the reaction mixture by HPLC were analyzed by $^(1)H$-NMR spectroscopy. When cellobiose was subjected to the action of the $\beta$-glucosidase, the products included laminaribiose, sophorose and gentiobiose. When laminaribiose, sophorose or gentiobiose was used as a substrate, the $\beta$-glucosidase accumulated transglycosylation products possessing different types of $\beta$-glycosidic linkages from the original one. The amount of dimers accumulated as reaction proceeded seemed to be dependent on the velocity of hydrolysis but not on that of formation.

      • Nisin Resistant Gene을 Selection Marker로 이용한 유산균 Cloning Vector의 개발

        송종효,정춘수,김정환,이재환,이형주,정대균 경희대학교 생명자원과학연구원 1997 遺傳工學論文集 Vol.9 No.-

        To develop a lactococcal cloning vector, the study to determine lactococcal replication on site, which will be used as the cloning vector frame, was carried out. pCL2.1. the smallest and high copy number plasmid in the L. lactis ML_(8), was digested partially to obtain several fragments to be cloned into the pUC18. Transformant harboring the recombinant plasmid with 454bp, 747bp, 1,845 bp and 2,112bp Taql fragment of pCL2.1 as an insert was obtained, respectively. As a selection marker in L. lactis the nisin resistant gene from pSI22 was isolated and cloned into the constructed basic cloning vector. pDC201 which is pUC18 ligated with 2,112bp Taql fragement of pCL2.1. resulting pUS1. After transformation it into L. lactis, the transformants were successfully obtained in a nisin selection containing 150㎍/㎖ nisin.

      • SCOPUSKCI등재

        Trichoderma koningii에서 분비되는 .$\beta$-D-glucosidase의 반응산물에 대한 핵자기공명분석

        이헌주,정춘수,강사욱,하영칠 한국미생물학회 1989 미생물학회지 Vol.27 No.1

        The mode of transglycosylation reaction observed during the action of low-molecular-weigh $\beta$-D-glucosidase ($\beta$-D-glucoside glucohydrolase, EC3.2.1.21) purified from Trichoderma koningii ATCC 26113 was investigated using $^{1}H$-NMR spectroscopy. The enzyme was purified by the series of procedures including ammonium sulfate precipitation, and fractionations by column chromatographies on Bio-Gel P-150, DEAE-Sephadex A-50, and SP-Sephadex C-50. The final purification was performed by the band eluation after preparative polyacrylamide gel electrophoresis. The enzyme showed its molecular size of 78,000 through the analysis of sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis and its isoelectric point of 5.80 through the analysis of analytical isoelectric focusing. The H-1 proton resonances were analyzed. After the reaction of the enzyme with cellobiose, the reaction products were separated by high performance liquid chromatography using refractive index detector. H-1 resonances of the products were consisted with those of gentiobiose [$\beta$-D-glucopyranosyl--(1,6)-D-glucopyranose], and cellotriose [$\beta$-D glucopyranosyl-(1,4)-$\beta$-D-glucopyranosyl]-(1,4)-D-glucopyranose] with minor resonances of sophorose [$\beta$-D-glucopyranosyl-(1,2)-D-glucopyranose], respectively.

      • KCI등재

        퇴비화 시설과 매립장에서 배양 가능한 공기중 미생물의 분포 및 특성

        이보라,차민주,정춘수,김종설,Lee, Bo-Ra,Cha, Min-Ju,Jeong, Choon-Soo,Kim, Jong-Seol 한국미생물학회 2012 미생물학회지 Vol.48 No.1

        Bioaerosols generated from composting facilities and landfills may create health risks for workers and nearby residents. To determine the levels of culturable airborne bacteria and fungi in bioaerosols, samples were seasonally collected at a composting facility and a landfill in Ulsan, Korea with an impaction-type sampler. Concentrations of heterotrophic bacteria averaged (in $MPN/m^3$) $6.5{\times}10^3$ (range $1.5{\times}10^2-1.5{\times}10^4$) in the composting facility and $3.9{\times}10^3$ (range $6.0{\times}10^1-9.3{\times}10^3$) at the entrance of the facility. These concentrations were 460 and 280 times higher than those of reference sites. Coliform bacteria were detected both inside and entrance of the facility. On the landfill, heterotrophic bacterial concentrations averaged (in $MPN/m^3$) $4.9{\times}10^2$ (range $1.7{\times}10^2-1.0{\times}10^3$), while they averaged $3.7{\times}10^2$ (range $4.8{\times}10^1-1.3{\times}10^3$) at the parking lot of the landfill. These concentrations were 35 and 26 times higher than those of reference sites. When we isolated and tentatively identified heterotrophic bacteria, Pseudomonas luteola was the most dominant species in bioaerosols from the composting facility, whereas the most abundant one in reference samples was Micrococcus sp. Average concentrations of airborne fungi were measured between $4.8{\times}10^2$ and $7.9{\times}10^2\;MPN/m^3$ depending on sites, which were 2.1-3.4 times higher compared to those of reference sites. While Cladosporium, Alternaria, and Penicillium were commonly identified fungal genera, genus Aspergillus was identified only in bioaerosols from the composting facility. 퇴비화 시설과 매립장에서 발생하는 bioaerosol은 작업자 및 주민에게 건강상 위해의 요인이 될 수 있다. 이들 시설에서 공기 중 세균과 진균의 농도 수준을 파악하기 위해 울산시에 위치한 퇴비화 시설과 매립장에서 계절별로 bioaerosol 시료를 포집하였다. 공기중 세균의 농도는 퇴비화 시설에서 평균 $6.5{\times}10^3\;(1.5{\times}10^2-1.5{\times}10^4)\;MPN/m^3$, 퇴비화 시설 출입구에서 평균 $3.9{\times}10^3\;(6.0{\times}10^1-9.3{\times}10^3)\;MPN/m^3$이었는데, 이는 대조군 지점보다 각각 460배와 280배 더 높은 수준이었다. 대장균군 세균은 퇴비화 시설과 출입구에서 모두 검출되었다. 매립장에서 공기중 세균 농도는 평균 $4.9{\times}10^2\;(1.7{\times}10^2-1.0{\times}10^3)\;MPN/m^3$이었고, 퇴비화 시설과 매립장에서 100 m 정도 떨어진 매립장 주차장에서는 평균 $3.7{\times}10^2\;(4.8{\times}10^1-1.3{\times}10^3)\;MPN/m^3$이었으며, 이는 대조군 지점에 비해 각각 35배와 26배 더 높은 수준이었다. 공기중 세균을 분리하여 잠정적으로 동정한 결과 퇴비화 시설에서는 Pseudomonas luteola, 대조군 지점에서는 Micrococcus sp.가 우점하였다. 채취 지점별 공기중 진균의 농도는 평균 $4.8{\times}10^2-7.9{\times}10^2\;MPN/m^3$이었으며, 대조군 지점에 비해 2.1-3.4배 더 높은 수준이었다. 공기중 진균의 경우 Cladosporium, Alternaria, Penicillium의 3속은 모든 지점에서 검출되었으며, Aspergillus 속은 퇴비화 시설의 bioaerosol에서만 확인되었다.

      • KCI등재

        하수처리시설에서 배양 가능한 공기중 미생물의 분포 및 특성

        박교남,고지윤,정춘수,김종설,Park, Kyo-Nam,Koh, Ji-Yun,Jeong, Choon-Soo,Kim, Jong-Seol 한국미생물학회 2011 미생물학회지 Vol.47 No.1

        하수처리시설에서 발생하는 공기중 미생물은 작업자 및 주민에게 건강상 위해의 요인이 될 수 있다. 이들 시설에서 공기중 세균과 진균의 농도 수준을 파악하기 위해 울산시에 위치한 위생처리장 1곳(YC-STP)과 하수처리장 3곳(YY-, OS-, HY-STP)의 포기조와 포기조 근처 지점에서 계절별로 공기중 미생물을 포집하였다. YC-STP의 공기중 세균 농도는 포기조에서 $1.3({\pm}0.2){\times}10^3-2.6({\pm}1.1){\times}10^4$ MPN/$m^3$, 포기조 근처에서 $1.7 ({\pm}1.0){\times}10^2-7.2({\pm}2.2){\times}10^3$ MPN/$m^3$로 매우 높았으며, 대장균군도 검출되었다. YY-, OS-, HY-STP의 공기중 세균 농도는 포기조에서 $1.9({\pm}1.2){\times}10^1-1.8({\pm}1.2){\times}10^4$ MPN/$m^3$, 포기조 근처에서 $5.0({\pm}2.8){\times}10^0-6.6({\pm}2.0){\times}10^3$ MPN/$m^3$의 범위였다. YC-, OS-, YY-STP에서의 공기중 세균 농도는 대조군 지점에 비해 평균값 기준으로 포기조에서는 16-1,200배, 포기조 근처에서는 9-280배 정도 더 높은 수치였으며, 포기조 근처(10 m)보다 포기조(0 m)에서 1.7-4.4배 정도 더 높았다. 공기중 세균을 분리하여 동정한 결과 하수처리시설에서는 Pseudomonas luteola, 대조군 지점에서는 Micrococcus sp.가 우점하였다. 공기중 진균의 농도는 포기조 보다 포기조 근처에서 더 높았으며 포기조 외에 다른 주요 발생원이 존재함을 시사한다. Cladosporium, Alternaria, Penicillium의 3속이 주로 검출되었다. Bioaerosols generated from wastewater treatment plants may create health risks for plant workers and nearby residents. To determine the levels of culturable airborne bacteria and fungi in bioaerosols, samples were seasonally collected above and near the aeration tanks of one feces-urine and three sewage treatment plants in Ulsan, Korea with an impaction-type sampler. In the feces-urine treatment plant, concentrations of heterotrophic bacteria were between $1.3({\pm}0.2){\times}10^3$ and $2.6({\pm}1.2){\times}10^4$ MPN/$m^3$ above the aeration tank and between $1.7({\pm}1.0){\times}10^2$ and $7.2({\pm}2.2){\times}10^3$ MPN/$m^3$ near the aeration tank. Coliform bacteria were detected both above and near the aeration tank. In cases of sewage treatment plant, the numbers of heterotrophic bacteria ranged from $1.9({\pm}1.2){\times}10^1$ to $1.8({\pm}1.2){\times}10^4$ MPN/$m^3$ above the aeration tank and from $5.0({\pm}2.8){\times}10^0$ to $6.6({\pm}2.0){\times}10^3$ MPN/$m^3$ near the aeration tank. At reference sites, the concentrations of heterotrophs in ambient air were measured between $7.0{\times}10^0$ and $2.7{\times}10^1$ MPN/$m^3$. When we isolated and tentatively identified heterotrophic bacteria, Pseudomonas luteola was the most dominant species in bioaerosols from wastewater treatment plants, whereas the most abundant one in reference samples was Micrococcus sp. When we measured fungal concentrations in bioaerosols, they were rather similar regardless of sampling locations and seasons, and such genera as Cladosporium, Alternaria, and Penicillium were commonly identified.

      • KCI등재

        새로운 섬유소분해 균주 Trichoderma sp. C-4에서 분리한 Endoglucanase (F-I-III)에 대한 연구

        설옥주,정대균,한인섭,정춘수,Sul Ok Ju,Chung Dae Kyun,Han In Seob,Jeong Choon Soo 한국미생물학회 2005 미생물학회지 Vol.41 No.1

        One of the endoglucanases, F-I-III, was purified from the culture filtrate of T. sp. C-4 through procedures including chromatography on Sephacryl S-200, DEAE-Sepharose A-50, and Chromatofocusing on Mono-P (FPLC). The molecular weight of the enzyme was determined to be about 56,000 Da by SDS-PAGE, and pI of 4.9 by analytical isoelectric focusing. F-I-III showed the highest enzyme activity at $55^{\circ}C$, and the pH optimum of the enzyme was 5.0. There was no loss of activity when the enzyme was incubated at $50^{\circ}C$ for 24 hours. The specific activity of the enzyme F-I-III toward the CMC was 315.4 U/mg. The Km value for $PNPG_2$ of F-I-III was 2.69 mM. N-terminal sequence of F-I-III was analyzed to be QPGTSTPEVHPKKLTTYK. It showed $95\%$ of homology to that of EGI from T. reesei. The presence of some metal ions (1 mM) had only a little effect on CMCase activity. The treatment of the reducing agents resulted in the increase of endoglucanase activity. 국내에서 분리된 우수섬유소분해 균주인 Trichodema sp. C-4가 생성하는 endoglucanase 중하나를 $(NH_4)_2SO_4$ 침전, Sephacryl S-200 gel filtration, DEAE-Sepharose A-50 ion exchange, Mono-P chromatofocusing (EPLC)의 단계로 정제하고 이를 F-I-III라 명명하였다. 분리된 효소 F-I-III는 분자량 56,000Da, 둥전점 4.9로 측정된 단일 단백질이었다. F-I-III는 $55^{\circ}C$에서 가장 높은 활성을 보였으며, pH 5.0이 반응 최적 조건이었다. $50^{\circ}C$에서 24시간 동안 안정하였으며, pH 4-7의 범위에서 안정하였다. CMC에 대한 비활성은 315.4U/mg 이었으며, PNPG2에 대한 Km 값은 2.69 mM이었다. 이 효소는 같은 균주에서 분리한 다른 endoglucanase와 exoglucanase를 섞었을 때 결정형 섬유소인 Avicel분해에 대한 상승효과를 보였다. $Mg^{2+},\;CO^{2+},\;Fe^{2+},\;Ca^{2+},\;CS^+,\;Li^+$ 등의 이온은 1 mM의 농도에서 효소의 활성에 큰 영향을 미치지 않았고, 1 mM의 환원제 (cystein, EDIA, \beta-mercaptoethanol, dithiothreitol(DTT), L-ascorbic acid)들은 효소의 활성을 증가시켰다. E-I-III의 N-말단 서열을 분석하여 QPGTSTPEVHPKKLTTYK의 서열을 얻었다. 이는 Trichodema reesei의 endoglucanase인 EGI과 $95\%$의 유사도를나타내었다. 분리된 효소 F-I-III는 높은 비활성을 가지고 있어서 활용가치가 높을 것으로 사료되었다.

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