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Acetobater sp.KM Alcohol Dehydrogenase의 분리 및 특성
전홍성,차영주 한국생물공학회 1995 KSBB Journal Vol.10 No.1
Membrane-bound alcohol dehydrogenase(ADH) was purified to homogeneity from the acetic acid producing bacteria, Acetobacter sp. KM. The enzyme was solubilized and extracted with Triton X-100 and purified using the Mono-Q ion exchange chromatography and Superose 12 gel filtration chromatography. The enzyme was purified to 12-fold with a yield of 30%. The molecular weight of the purified enzyme was to be 335 KDa. SDS-PAGE of the enzyme showed two subunits with molecular weights of 79 KDa and 49 KDa. It indicated that the enzyme consisted of three subunits of the 79 KDa and two subunits of the 49 KDa. The purified .ADH preferentially oxidized straight chain aliphatic alcohol except methanol. Formaldehyde, acetaldehyde and glutaraldehyde were also oxidized. The apparent Km for ethanol was 1.04 mM and the optimum pH and temperature were 5.0∼6.0 and 32$^{\circ}C$, respectively. V2O5 and divalent cation such as ZnCl2 and NiCl2 inhibited enzymatic activity.
전홍성,박종필,이양수,김연순,김종승,김성준 조선대학교 부설 유전생물공학연구소 1992 유전생물공학연구지 Vol.2 No.-
본 실험은 호남 지역에서 한국고유의 전통적인 방법으로 발효시킨 막걸리 식초와 포도 식초, 석류초, 사과초 등에서 초산발효균을 분리하여 그 특성을 조사하고 초산 발효 유전자를 탐색하고자 하였던 바 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 분리균주는 모두 gram-negative의 간균 또는 구균으로서, AP-32, PM-18, GJ-30, KC-6은 Gluconobacter, GA-32, HA-36, KA-32, GV-16은 Acetobacter속에 속함을 확인하였다. 2. 분리균주는 전반적으로 기존의 초산발효균과 다른 생화학적 특성을 보였다. 3. 분리균주 모두 4일 이상의 완만한 성장특성을 나타내었다. 4. Methylprednisolon에 GJ-30을 제외한 모든 균주가 상당한 내성 (512㎍/ml)을 보였고, Kanamycin(0.5-8㎍/ml)에 분리균주 모두 감수성을 나타내었다. 5. 분리균주 모두 중금속인 ferric chloride에 상당한 내성(50-400g/ml)을 보여주었다. HA-36, GA-32, KA-32균주는 거의 동일한 중금속 내성정도를 나타내었다. 수은과 질산은, cadmium에 대해서는 모든 균주가 감수성을 보였다. 6. wild type Tn5를 conjugation시킨 결과 HA-36와 GA-32에서 1×10^-5-5×10^-7범위로 conjugants가 나타났다. 7. Ethanol이용도를 비교한 결과 mutants가 wild type보다 50%이상 그 이용도가 낮아졌다. 8. 돌연변이주 들을 Bromcresol purple을 indicator로 첨가한 선택배지에서 선발한 결과 color변화가 전혀없는 번이주와 yellow color로 바뀌는 변이주가 나타났다. yellow coler로 바뀌는 변이주는 acetate에서 TCA cycle로 들어가는 과정에 관여하는 유전인자에 삽입된 것으로 추정할 수 있으며, color변화가 전혀없는 변이주는 초산발효 관련 유전자에 끼어들어가 酸度변화를 나타내지 못하는 것으로 추정할 수 있었다. Eight strains of bacteria were isolated from vinegar produced in Honam area. Among eight strains of vinegar producer, four isolates identified as Genus Gluconobacter and the others identified as Genus Acetobacter on the basis of physiological and biochemical characterization. Optima of temperature and of pH for growth of isolates were 28-30℃ and 5.5-6.0, respectively. Although most of the selected strains were sensitive to antibiotics, the selected strains showed resistance to Methylprednisolon and also most of the isolates were showed resistance to such heavy metals as ferric chloride, CuCl_2. The wild type transposon Tn5 was used for transposon mutagenesis to detect the genes related to Ethanol oxidation in isolated strains. Tn5 was introduced from Tn5 vectors into HA-36, GA-32 at the frequency of 1.0x10^-5-5.0x10^-7.