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Enterobacter aerogenes 의 phoA 유전자 Promoter를 이용한 인 제한환경에서 발현하는 벡터 구축
장화형,고병훈,박신영,이성호,김성진,임유정,한갑진,김영호,이영근 한국미생물학회 2002 미생물학회지 Vol.38 No.4
토양 등의 인 제한환경에서 특이적으로 발현하는 벡터를 구축하기 위해서 Enterobacter areogenes의 phoA 유전자의 promoter가 든 pEAAP를 구축하였다. pEAAP는 pET-22b(+)을 BglII와 XbaI으로 절단하여 T7 promoter와 lac operator를 제거하고pho box가 포함된 phoA promoter를 삽입하여 구축하였다. pEAAP가 인 제한 환경에서 특이적으로 발현되는지 조사하고자 Bacillus subtillis var. amyloliquefaciens (KCTC 8913P)의 Phytase유전자인 Bsa-phy1을 도입한 pEAPHY1을 구축하였다. CK-PHY1 (pEAPHY1을 도입한Escherichia coli JM109)는 인 제한 환경에서 41 kD)의 Bsa-Phy1을 발현하였다. 또한, CK-PHY1은 phytate를 유일한 인산원으로 첨가된 고체배지에서 phytate를 분해하여 투명대를 형성하였다. To induce recombinant protein under phosphate restricted conditions such as soil, we have constructed the expression vector (pEAAP) with phoA gene promoter of Enterobacter aerogenes. To construct the pEAAP, deletion of the T7 promoter and lac operator from pET-22b(+) by BglII-XhoI digestion and addition of the phoA gene promoter (containing the pho box) were performed. To test pEAAP as an expression vector controled by phosphate limitation, pEAPHY1 was constructed with the phytate gene (Bsa-phy1) of Bacillus subtillis var. amyloliquefaciens (KCTC 8913P). Under the phosphate-limitation condition, CK-PHY1 ( Escherichia coli JM109 was transformed with pEAPHY1) expressed the 41 kD Bsa-Phy1 . Also CK-PHY1 formed the clear zone in solid medium containing phytate as a sole phosphate source.
방사선을 이용한 느타리 ( Pleurotus ostreatus ) 의 섬유소 분해 변이주 선발
이영근,장화형,김원록,이창주,김진규 ( Young Keun Lee,Hwa Hyoung Chang,Won Rok Kim,Chang Joo Lee,Jin Kyu Kim ) 한국환경생물학회 1998 환경생물 : 환경생물학회지 Vol.16 No.2
To isolate the cellulolytic variants, the basidiospores of Pleurotus ostreatus were irradiated at the dose of 1Gy∼20kGy of gamma-ray. After irradiation the germination and survival rates of basidiospores were observed and the activity of extracellular enzyme was determined by means of MUF-substrate method. The 45 variants showed various levels of mycelial growth rate and cellulolytic activity on solid media and vari ous levels of activities of the extracellular enzymes. We have isolated highly cellulolytic variants. 1.5KG-2 and 2KG-2. among the above variants. It is suggested that the isolated 2 variants could be applied usefully to reuse and/or recycle of the cellulosic bioresources.
이온화방사선에 의한 느타리버섯(Rleurotus ostreatus)의 ITS2 염기서열 변화
이영근,장화형,한갑진,고동규,이기성 한국환경생물학회 1998 환경생물 : 환경생물학회지 Vol.16 No.4
rDNA의 ITS2(internal transcribed spacer 2)부위에 대한 이온화방사선(gamma-ray)의 영향을 알아보기 위해서 감마선을 조사한 느타리버섯(Pleurotus ostreatus)의 5종의 변이중에서 ITS2의 염기서열을 결정하였다. ITS2의 염기서열은 1 kGy 조사군(PO-5, PO-6, PO-15와 PO-16)에서 변화되지 않았으나, 2kGy 조사군(PO-14)에서는 1개의 염기가 치환되었다. RAPD(ramdomly amplified polymorphic DNA) 양상에 의한 유전유사도의 변화가 다양하였고 섬유소성 고체검정 배지에서도 다양한 생장특성을 나타내었다. 본 연구결과는 ITS염기서열이 이온화 방사선에 의해 선량의존적으로 변화될 수 있음을 시사해 주었다.
느타리버섯(Pleurotus ostreatus) 재배균상에 오염되는 Rhizoctonia solani 유사균의 특성
이영근,장화형,김진규,김재성,이기성 한국환경생물학회 1998 환경생물 : 환경생물학회지 Vol.16 No.4
느타리버섯(Pleurotus ostreatus) 재배균상은 흔히 토양, 공기 중 곰팡이에 의해 오염되어 자실체 생산량이 감소되곤 한다. 느타리버섯 재배균상에서 3종류(Rs-1, RS-2와 RS-3)의 오염균주를 분리하여 internal transcribed spacer(ITS)의 염기서열을 분석하였다. 이들의 ITS염기서열은 식물 병원성 사상균의 일종인 Rhizoctonia solani와 매우 높은 상동성을 보였다. 이들 오염균주들의 영양배지와 lignin 배지에서 균사체 생장율은 느타리버섯보다 각각 수배 및 수십배나 높았다. 세포외분비효소의 활성도는 오염균주들의 경우 느타리버섯과 비교하여 매우 낮은 활성도를 보였다. 느타리버섯과의 혼합배양 결과 오염균주들은 느타리버섯의 균사체 생장 및 자실체 형성을 심하게 저해하였다. The contamination of air- and soil-borne microbes could occur and result in the reduction of fruiting body formation during cultivation of Pleurotus ostreatus. Three contaminants(RS-1, RS-2 and RS-3) were isolated and showed higher homology to the plant pathogenic fungus, Rhizoctonia solani by internal transcribed spacer(ITS) analysis. The rates of their mycelial growth on the lignin specific medium and complete medium were several times higher than those of P. ostreatus. The activities of the extracellular enzymes of three contaminants were lower than those of P. ostreatus. During oyster mushroom cultivation(P. ostreatus) together with these contaminants, the mycelial growth and fruiting body formation of P. ostreatus was seriously repressed.
Bacillus sp. MS202에 의한 Dinitroaniline계 제초제인 Pendimethalin의 부분환원
이영근,장화형,장유신,형석원,정혜영 한국환경농학회 2004 한국환경농학회지 Vol.23 No.4
토양과 지하수에서 pendimethalin의 지속성은 환경에 해로운 영향을 미친다. 경남 마산에서 분리한 pendimethalin분해 균주는 API CHB50 kit 시험, FAME 분석, 그리고 165 rDNA 염기서열분석 결과로 Bacillus sp. MS202로 잠정적으로 동정하였다. TLC, GC, 그리고 GC-MS 분석에 의해 Bacillus sp. MS202가 pendimethalin의 -NO₂를 -NH₂로 환원시킨다는 것을 알 수 있었다. 이는 일반적으로 알려진 호기성 미생물에 의한 pendimethalin 분해가 탈알킬화가 우선한다는 보고와 상반되는 새로운 결과이다. The persistence of pendimethalin in soil and ground water has an injurious effect on ecosystem. Pendimethalin-degrading bacterium was isolated from Masan, Gyeongnam province and temporarily identified as Bacillus sp. MS202 by the analysis of API CHB50, kit, FAME, and 16S rDNA sequence. From the analysis of pendimethalin metabolite using TLC, GC, and GC-MS, we found that the degradation of pendimethalin by Bacillus sp. MS202 did not result in the dealkylated form, but the formation of the reduced compound, 6-amino-2-nitro-N(1-ethylpropyl)-3,4-xylidine or 2-amino-6-nitro-N(1-ethylpropyl)-3,4-xylidine.
Bacillus lentimorbus WJ5의 감마선유도 돌연변이체들에서 공통으로 발현되는 방사선 관련 유전자의 microarray 분석
이영근,장화형,장유신,허재호,형석원,정혜영 한국환경생물학회 2004 환경생물 : 환경생물학회지 Vol.22 No.3
본 연구에서는 감마선으로 유도된 돌연변이체들에서 공통으로 발현되는 방사선 관련 유전자들의 발현을 연구하기 위하여, B. lentimorbus WJ5의 방사선 유도 돌연변이체에서 발현되는 유전자를 DNA microarray로 동시에 탐색하였다. DNA microarray는 B. lentimorbus WJ5 genome을 무작위로 절단하여 2,000단편으로 구성하였으며, 감마선 (^(60)Co)으로 유도된 7돌연변이체의 발현을 정량적으로 관찰하였다. 클러스터 분석결과 발현된 408 유전자 중 27개가 감마선 유도 돌연변이체 모두에서 유의하게 발현이 증가되었다. 특히, 복구(mutL, mutM)에너지 대사 (acsA, sdhB, p하, yhjB, citB), protease(npr), 산화자극에 대한 환원 (HMM)관련 유전자들이 동시에 증가되었다. 이는 감마선 유도 돌연변이체들에서 자발적인 직/간접 복구 관련 유전자의 발현 증가는 방사선 노출 직후 보이는 stress response와는 다른 현상임을 나타내는 것으로 생각된다. To study the radiation related gene expression in mutants of Bacillus lentimorbus WJ5 induced by gamm radiation, the simultaneous gene expression was analyzed by DNA microarray. We constructed DNA chips including two thousand randomly digested genome spots of B. lentimorbus WJ5 and compared its quantitative aspect with seven mutants induced by gamma radiation (^(60)Co). From the cluster analysis of gene expression pattern, totally 408 genes were expressed and 27 genes were significantly upregulated by the gamma radiation in all mutants. Especially, genes involved in repair (mutL, mutM), energy metabolism (acsA, sdhB, pgk, yhjB, citB), protease (npr), and reduction response to oxidative stress (HMM) were simultaneously upregulated. It seems that the induction of the direct and/or indirect repair related genes in mutants induced by gamma radiation could be remarkably different from the adaptive responses against acute exposure to radiation.
생쥐의 발생중 Hoxa-9 유전자의 발현 패턴에 관한 연구
김명희,고기석,장화형,신주옥,박형우 한국유전학회 1998 Genes & Genomics Vol.20 No.2
Hoxa-9 is a homeobox-containing gene located in the HoxA cluster on chromosome 6 in mice. To identify the temporal and spatial expression patterns of Hoxa-9 during mouse development, we subjected it to Northern blot and in situ hybridization. Since we have previously shown that human Hoxa-9 contains 3 exons which are differentially expressed in different fetal and adult tissues (Min et al., 1998), three different exon-specific probes were prepared and used in the analysis. Northern and in situ data showed that exon I was not used in mice, whereas exons II and III gave the same Northern and in situ data, meaning that both were used to produce the same transcript. A 1.8-kb transcript and two minor (3.2 and 7.0 kb) transcripts were produced at day 7.0 post coitum (p.c.) through until day 12.0 p.c., and then disappeared by day 15.0 p.c. In situ analysis demonstrated that the expression started during the early onset of gastrulation around day 7.5 p.c. with a uniform expression pattern along the embryonic and extraembryonic tissues. The expression pattern eventually became restricted to a small subset of tissues, such as limb and axial skeleton by day 14.5 p.c. The Hoxa-9 gene was expressed in mesoderm and ectoderm derivatives and particularly strong expression was detected in the brain, the posterior dorsal part of the spinal cord, spinal ganglia, heart, liver, kidney, lung, digestive system and limb buds during the mid-gastrulation stage. Our data suggested that the temporal and spatial regulation of Hox genes is not limited to the axial CNS and skeleton. In the trunk, Hoxa-9 was expressed according to a pattern without any correlation to the anterior-posterior axis. Differential expression was also observed along the dorso-ventral and proximo-distal axis, which implies that spatial regulation of gene expression follows different positional cues on different axes.