아토피 피부염 환아에서 두피의 비듬내 집먼지진드기 항원 농도와 임상증상 사이의 상관관계

류정우(Jeong Woo Ryu),염혜영(Hae Yung Yun),전숙영(Sook yeong Jeon),이기영(Ki Young Lee),정병주(Byeung Ju Jeoung),김규언(Kyu Earn Kim) 대한소아알레르기호흡기학회(구 대한소아알레르기 및 호흡기학회) 1999 소아알레르기 및 호흡기학회지 Vol.9 No.1

목 적 : 아토피 피부염의 발생에 환경내 집먼지진드기 항원에 대한 노출이 관여하리라 추측되고 있다. 최근의 연구 결과 환아의 의류 뿐만 아니라 피부 그리고 두피의 비듬 등에서도 집먼지진드기 항원이 검출되었다고 보고되었다. 이에 연구자는 아토피 피부염 환아에서 임상증상의 중증도와 집먼지진드기의 감작상태가 두피의 비듬내 집먼지진드기 항원의 농도와 연관성이 있는지를 알아보고자 본 연구를 시행하였다. 방 법 : 아토피 피부염으로 진단된 27명의 환아와 대조군으로 천식만 있는 것으로 진단된 환아 41명을 대상으로 두피에서 비듬을 채취한 후 집먼지진드기 항원의 농도를 면역 효소법으로 측정하여 두피의 비듬내 집먼지진드기 항원 농도와 아토피 피부염의 임상증상의 중증도 사이에 어떤 상관관계가 있는지를 연구하였다. 결 과: 1) 총 68명의 대상환아에서 채취한 두피의 비듬중에서 Dermatophagoides farinae의 주 항원인 Der f1은 32명(47%)에서 측정되었으며, D. pteronyssnus의 주 항원인 Der p1은 33명(49%)에서 측정되어 총 68명중 46명(70%) 에서 Der f1 또는 Der p1 항원이 두피의 비듬 추출액내에서 측정되었다. 2) 아토피 피부염을 가진 환아 27명과 천식만을 가진 환아 41명간에 두피내 비듬의 양과 추출액내 집먼지진드기 항원 농도 사이에는 유의한 차이가 관찰되지 않았다. 3) 주당 세발 횟수가 많아짐에 따라 두피의 비듬 추출액내 Der f1 농도가 감소하는 경향을 보였다(Spearmans rank test, r=-0.24, =0.052). 4) 아토피 피부염 환아 총 27명을 대상으로 분석하였을 때 두피의 비듬내 Der p1 농도와 아토피 피부염의 중증도 사이에 유의한 상관관계가 관찰되지 않았으나(r=-0.05, P>0.05), 두피의 비듬내 Der f1 농도와 아토피 피부염의 중증도 사이에는 유의한 상관 관계가 관찰되었다(r=0.39, <0.05). 결 론 :본 연구는 아토피 피부염 환아의 두피 비듬내 집먼지진드기 항원 농도와 아토피 피부염의 임상증상의 중증도 사이에 연관성이 있음을 보여주었다. 따라서 환경내 집먼지진드기 항원에의 노출이 아토피 피부염의 병태생리에 중요한 역할을 할 것으로 사료된다. Purpose: There are compelling evidences that house dust mites are important in the pathogenesis of atopic dermatitis. Recently, detection of house dust mite allergens from clothing, skin, and dust from human hair has been reported. To evaluate the importance of house dust mite exposure in the clinical severity of atopic dermatitis. Methods : We measured house dust mite allergens(Der f1 from Dermatophagoides farinae and Der p1 from D. pteronyssinus) in scalp dander from 27 children with atopic dermatitis and 41 children with asthma only by enzyme-linked immunosorbent assay and examined correlation between house dust mite allergen concentrations in scalp dander and clinical severity of atopic dermatitis in children. Results : Der f1 was detectable in scalp dander samples of 32 patients(47%) from overall 68 patient and Der p1 was detectable in 33 patients(49%). House dust mite allergens(Der f1 or Der p1) were detectable in scalp dander samples of 46 patients (70%) from overall 68 patient. There was no significant differences in house dust mite allergen levels between atopic dermatitis patients and patients with asthma only. There was a tendency of inverse correlation between frequency of scalp washing and concentration of Der f1 in scalp dander extract(r=-0.24, P=0.052). There was a significant correlation between severity grade of atopic dermatitis and concentration of Der f1 in scalp dander(r=0.39, P<0.05) in 27 children with atopic dermatitis. However, there was no significant correlation between severity grade of atopic dermatitis and concentration of Der p1 in scalp dander(r=-0.05, P>0.05). Conclusion : There was a significant correlation between house dust mite allergen concentrations in scalp dander and clinical severity in children with atopic dermatitis. And these results suggest that exposure to house dust mite allergen is important in the pathogenesis of atopic dermatitis.

독일바퀴 알레르겐의 특성규명에 관한 연구

이기영,정병주,김규언,류정우(Jeong Woo Ryu),염혜영(Hae Yung Yun),박중원(Jung Won Park),홍천수(Chein Soo Hong),이한일(Han Il Lee),용태순(Tai Soon Yong) 대한소아알레르기호흡기학회(구 대한소아알레르기 및 호흡기학회) 1998 소아알레르기 및 호흡기학회지 Vol.8 No.2

목 적 : 바퀴벌레는 알레르기질환을 유발하는 중요한 기인항원이다. 우리 나라도 임상증상이 위중하여 이환율이 높은 바퀴항원에 의한 알레르기환자가 증가될 것으로 추정된다. 독일바퀴의 알레르겐은 최근까지도 논란이 되고 있다 이에 저자들은 독일바퀴의 주알레르겐을 규명하고자 본 연구를 실시하였다. 방 법 : 알fp르기피부시험 혹은 RAST검사에서 바퀴항원에 양성으로 나온 32명을 대상으로 하였다. 독일바퀴 조항원을 pretense inhibitor를 첨가한 경우와 첨가하지 않은 경우로 나누어 제조한 후 SDS-PAGE로 단백띠를 비교하였고 IgE immunoblot으로 독일바퀴 알레르겐을 규명하였다. 결 과 :조항원에 pretense inhibitor를 첨가하지 않았을 경우에는 41 kD 단백띠는 관찰할 수 없었고 32, 55 및 78 kD 단백띠가 관찰되었다. Allergogram상 15개 이상의 단백띠가 있었는데 그중 10 kD 단백띠는 해상도는 높지 않으나 대상환자들의 혈청과 31%에서 결합하여 가장 호발하였으며 21, 25, 36 및 52 kD 단백띠는 각각 22, 28, 16, 및 19%의 환자들에서 관찰되었다 결 론 : 바퀴벌레와 같은 동물성 알례르겐의 조항원을 제조할 때에는 체내에 존재하는 pretense들의 작용을 억제시키는 물질을 첨가하여 주는 것이 좋을 것으로 생각되고, IgE와 주로 결합하는 바퀴단백은 분자량이 10, 21, 25, 36 및 52 kD이 중요한 단백으로 추정된다. Purpose : Cockroaches have been reported one of the major causes of allergic disease such as bronchial asthma and allergic rhinitis. About 10% of children and 20% of adult respiratory allergy patients have positive results of allergy skin tests to cockroach allergen. This finding suggests that cockroach is also important allergen in Korea. Among 4,000 species, German cockroach seems predominant species in the Korean peninsula. Identification and characterization of the major allergen is the first step in German cockroach allergen research. But, there have been controversies. It may depends upon different identifying methods. The aim of our study was to identify the major allergen in German cockroach using Westernblot. Methods : Crude German cockroach allergen extracts with or without protease inhibitor cocktail mixture were prepared, and protein patterns of these two extracts were compared using SDS-PAGE and Coomassie stain. Sera from 32 atopic asthmatic patients with positive allergy skin test against cockroach allergen were used for IgE immunoblot. Results : Coomassie stain after SDS-PAGE demonstrated some discordance between the differently prepared crude allergen extracts. In comparison with the allergen extract which abolished endogenous protease activity, the untreated extract revealed new 32, 55 and 78 kD protein bands and 41 kD protein band was disappeared. About 60% of sera with positive allergy skin test revealed IgE binding bands in Westernblot. Among them, 10, 21, 25, 36 and 52 kD protein band might seemed important German cockroach allergen. Conclusion : Finding above may suggest that endogenous protease could denature allergenic proteins in the process of crude cockroach allergen extract. The 10, 21, 25, 36, and 52 kD might be the important allergens in German cockroach.

고양이 접촉 유발시험에 관한 연구

이창우(Chang Woo Lee),류정우(Jeong Woo Ryu),염혜영(Hae Yung Yun),이기영(Ki Young Lee),정병주(Byeung Ju Jeoung),김규언(Kyu Earn Kim) 대한소아알레르기호흡기학회(구 대한소아알레르기 및 호흡기학회) 1999 소아알레르기 및 호흡기학회지 Vol.9 No.1

목 적 : 고양이는 흔히 접촉하는 애완동물이며, 소아에서 실시한 알레르기 피부 시험에서도 고양이 항원은 비교적 높은 양성률을 나타내고, 병력상 고양이에 대한 알레르기를 호소하는 환자들도 않다. 고양이에 대한 알레르기가 확진되면 반드시 고양이와 접촉을 금해야 한다. 이에 연자들은 위와 같은 환아에서 고양이에 의한 알레르기의 빈도가 어느 정도인지를 알아 보기 위해서 본 연구를 실시하였다. 방 법 : 연세의대 소아 알레르기 크리닉에 내원했던 환아들 중 알레르기 피부 시험에서 고양이 항원에 양성반응이 나왔거나 고양이와 접촉시 중상이 나타났던 과거력이 있는 환아 45명을 대상으로 하여 일주일간 고양이와 접촉을 금한 뒤 30분간 고양이와 자연스럽게 접촉을 한 후 증상이 유발되는지 관찰하였다. 결 과: 1) 대상환아들 중 고양이와 접촉 후 증상이 유발되었던 경우는 18례(40%)였다. 2) 알레르기 피부반응 검사에서만 양성으로 나왔던 환아에서는 24.2%에서 중상이 유발되었으나 알레르기 피부시험 검사 외에도 과거력이 동반되었던 환아에서는 90.0%에서 증상이 유발되었다. 3) 알레르기 피부 반웅 정도에 따른 유발률은 피부 시험 양성은 14.3%이었으나 강양성은 45.9%로 위족을 형성하는 강양성이 유의하게 높았다. 4) 고양이 접촉 후 유발되는 증상은 알fp르기성 비염이 88.2%로 가장 많았으며, 기관지 천식 35.3%, 두드러기 29.4% 및 알레르기성 결막염 23.5% 순이었다. 5) 증상이 유발되는 시각과 지속되는 기간은 각각 10분 이내와 30분에서 1시간 사이가 가장 많았다. 6) 혈중 총 IgE치와 호산구 수는 중상이 유발되었던 군과 유발되지 않았던 군 사이에 유의한 차이가 없었다. 결 론 : 고양이 알레르기의 진단은 피부 시험상 고양이 털에 강양성 반응을 보이고 고양이와 접촉시 임상증상이 유발된 병력이 있으면 거의 확실한 것으로 여겨지며 뚜렷한 병력 없이 RAST(radioallergosorbent test)가 양성인 경우는 유발 시험으로 확진하여야 할 것으로 사료된다. Purpose : Cat is the pet which many of us quite frequently contact without any specific precautions. According to the allergy skin tests conducted in children, cat antigen shows a comparatively high positive reaction, and past history also shows that there are many patients who suffer allergies from cat contacts. Therefore, once it is diagnosed as an allergy caused by cat, it is important that patients be isolated in order to restrict their contact with cat. In this context, this study was conducted for the purpose of finding out how serious and how frequent the allergies by cat contacts are. Methods : Forty five children patients who visited to the Allergy Clinic for Children, Severance Hospital annexed to the Medical College, Yonsei University were enrolled in this study. Some of patients had shown a positive reaction against cat antigen in the allergy skin test, and others had a past history of developing symtoms when contacted by cat. The patients were isolated from cat for seven days, and then contacted with cats for 30 minutes and observed the provocated symptoms. Results : 1) Among the tested patients, the number of cases who were provocated by the symptoms after cat contact were 18(40%). 2) Among those patients who were shown to be positive only in allergy skin test, only 24.2% proved to be provocated by the symptoms, while 90.0% of those who had a past history in addition to allergy skin test proved to be provocated by the symptoms. 3) Symptoms provocated after cat contact showed allergic rhinitis patients 88.2% which was the highest ratio, bronchical asthma, 35.3%, urticaria, 29.4%, and allergic conjunctivitis, 23.5%, respectively. 4) The onset and duration of symptoms provcated were under 10 minutes and from 30 to 60 minutes, which included most cases in the test. 5) Total IgE and eosinophil count of patients did not show any meaningful differences between the group which was provocated and that which was not provocated. Conclusion: It was shown that 40% patients who were suspected of cat allergy had a positive reaction to the cat contact provocation test. Ninety percents of patients who showed both positive allergy skin test and past history were provocated after cat contact.

우리나라에 서식하고 있는 모기 ( Culex pipiens )의 항원 추출과 항원성 분석

이기영,이기선(Ki Sun Lee),이수영(Soo Young Lee),정병주,김규언,류정우(Jeong Woo Ryu),염혜영(Hae Yung Yun),이한일(Han Il Lee),용태순(Tai Soon Yong),전성후(Soung Hoo Jeon) 대한소아알레르기호흡기학회(구 대한소아알레르기 및 호흡기학회) 1999 소아알레르기 및 호흡기학회지 Vol.9 No.3

목 적 : 모기에 물린 후 나타나는 여러 가지 반응들은 혈청내 모기 특이 IgE 항체와 관련이 있는 것으로 알려져 있다. 이미 서구에서는 모기에 물린 후 팽진, 구진 등의 피부 국소반응과 출혈성 피부 병변, 혈관 부종, 천식 및 쇼크에 이르는 전신반응에 대한 증례 보고와 면역학적 연구가 시행되어 왔으나, 국내에서는 이에 관한 연구가 전무한 실정이다. 모기 항원은 모기의 몸체, 두흉부, 침샘, 침 등을 이용한 immunoblot 분석을 통해 알 수 있으며, 모기의 종에 따라 그 항원성은 상이하다. 정제된 항원의 제조는 모기 알레르기 환자의 진단 및 면역치료에 필수적이나, 상품으로 시판되는 모기 항원들은 현재까지 그 항원 농도와 단백질 농도가 일정치 않아 표준화가 필요한 것으로 판명되었다 이에 우리나라에서 서식하는 Culex pipiens의 항원을 추출하여 그 항원성을 분석해 보았다. 방 법 : 연세의대 소아과, 아주의대 소아과 알레르기 클리닉에 내원하여 시행한 피부 반응검사상 모기 항원에 양성 반응을 보인 환아들을 대상으로 하였다. 국립보건원 의동물학과로부터 사육중인 Culex pipiens를 공급받아 마취하에 두흉부를 분리하여 homogenizer를 이용하여 수용성 균질액을 만들고, 원심분리하여 filter에 투과시켜 조항원을 만들었다. Bradford method에 따라 단백질 농도를 측정하고, SDS-PAGE를 시행하여 분리한 후, nitroucellulose membrane에 전이시킨 후, 모기 항원으로 시행한 피부반응검사상 양성 반응을 보인 환아의 혈청을 이용하여 immunoblot을 실시하여 IgE와 결합하는 단백띠를 관찰하였다. 결 과 : 1) Culex pipiens 조항원의 단백질 농도는 10.88 mg/ml 이었다. 2) Culex pipiens 조항원의 SDS-PAGE 결과 20여개의 단백띠가 분리되었다. 3) Immunoblot 결과 70 kD, 60 kD, 34 kB의 단백띠가 IgE와 결합하였다. 결 론 ; 우리 나라에서 서식하는 모기 중 Culex pipiens의 조항원을 제조하였으며, 70 kD, 60 kD, 34 kD의 단백띠가 알레르기를 유발하는 항원으로 추측되며, 향후, 침샘 및 침을 이용한 정제된 항원을 이용한 연구가 시행되어야 할 것으로 기대된다. Purpose : Adverse reactions to mosquito bites have been recognized for some time, and these usually consist of large swellings, generalized urticaria, angioedema, and less frequently asthma. There have been some efforts to define immunologic characteristics of mosquito allergens throughout the world. But, in Korea, the immunologic analysis of mosquito allergen have not been made. Methods : Extracts of locally distributed female mosquito Culex pipiens, were prepared from their heads and thoraxes. By sodium dodecylsulfate-polyacrylamide gel electrophoresis, proteins of two extracts were isolated. Then their proein bands were transferred to nitrocellulose membrane. Immunoblotting was performed with sera of allergic patients to mosquito bites, then completed by antibodies to human IgE. Results : Immunoblotting showed IgE binding proteins weighing 70 kD, 60 kD, 34 kD in Culex pipiens. Conclusion : We found that mosquito antigens induced IgE response, and it suggested that species-specific antigens exist. Further investigation using salivary gland extracts from Culex genus are needed in identifying specific allergens.

메밀의 재조합항원 제조

이기영(Ki Young Lee),정병주(Byung Ju Jeoung),김규언(Kyu Earn Kim),류정우(Jeong Woo Ryu),염혜영(Hae Yung Yun) 대한소아알레르기호흡기학회(구 대한소아알레르기 및 호흡기학회) 1998 소아알레르기 및 호흡기학회지 Vol.8 No.2

목 적 : 메밀은 우리나라뿐 아니라 일본에서도 식품알레르기의 가장 흔한 원인 식품이며 임상증상이 위중한 경우가 많은데 이에 대한 기초 연구는 미진하다. 따라서 저자 등은 메밀을 식품알레르기의 모델로 삼아 연구하고자 본 연구를 실시하였다. 방 법 : 숙성되는 과정에 있는 메밀에서 mRNA를 추출하여 in vitro에서 translation을 실시하였으며 이 산물을 SDS-PAGE를 실시하여 메밀단백으로 translation 되는 것을 확인하였다. 결 과 : Spectrophotometer로 측정한 흡광도는 total RNA는 A_260/A_260가 1.9, mRNA는 2.0으로 total RNA와 mRNA는 모두 양호하게 분리되었다. 메밀 mRNA로 vitro에서 translation을 실시한 산물을 메밀이나 대조군과 비교하여 보면 in vitro translation 산물은 1, 3, 및 14 kD 등 비교적 저분자량은 발현되었으나 그외의 메밀단백은 관찰할 수 없었다. 결 론 : In vitro에서 mRNA를 translation시켜 1, 3, 14 kD 메밀재조합항원을 제조하였다. 본 연구에서 숙성되는 과정에 있는 메밀에만 mRNA 존재하며 그 시기에 따라 mRNA의 조성이 다름을 알 수 있었고 향후 메밀알레르겐의 기초연구에 유용한 자료가 될 것으로 사료된다. Purpose : Buckwheat is one of the most common food allegen in Korea and frequently elicit severe allergic reactions. However, up to now, only few reports on buckwheat allergens have been reported. The purpose of this study was to isolate mRNA for the production of recombinant buckwheat allergens. Methods : After the isolation of mRNA from ripening buckwheat seeds, in vitro translation was performed. The protein patterns of in vitro translate products were identified using SDS-PAGE. Results : A_260/A_260 ratio of total RNA was 1.9, and mRNA was 2.0. In vitro translate products showed lowered molecular buckwheat proteins such as 1, 3, and l4kD, while other high molecular weight protein of buckwheat seed were not shown in SDS-PAGE. Conclusion : mRNA of buckwheat was purified only from ripening seeds. The composition of mRNA was different according to the ripening periods. It is believed that this finding can give a clue to the basic research of buckwheat allergen.