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허승원 ( Heo Seung Won ),배수미 ( Bae Su Mi ),한찬희 ( Han Chan Hui ),최지향 ( Choe Ji Hyang ),김종국 ( Kim Jong Gug ),박은경 ( Park Eun Gyeong ),노덕영 ( No Deog Yeong ),이준모 ( Lee Jun Mo ),남궁성은 ( Nam Gung Seong Eun ),안웅식 대한산부인과학회 2004 Obstetrics & Gynecology Science Vol.47 No.4
목적: 세계적으로 가장 널리 소비되고 있는 기호식품 중 하나인 녹차는 항당뇨, 항고혈압 및 항암효과가 뛰어난 것으로 알려져 있다. 본 연구는 녹차의 구성성분인 epigallocatechin-3-gallate (EGCG)가 난소암 세포주들에서 세포 성장 억제 효과, 세포주기 변화 및 세포사멸 효과를 확인하고, 세포주기 관련 유전자와 단백질의 발현 변화를 조사하여 항암 효과를 확인하고자 하였다. 연구 방법: 난소암 세포주들에서 EGCG에 의한 항암효과를 확 Objective: A constituent of green tea, (-)-epigallocatechin-3-gallate (EGCG), has been known to possess anti-diabetes, anti-hypertension and anti-cancer properties. In this study, we investigated the anticancer effects of EGCG on human ovarian cancer cell
BAC Chip을 이용한 자궁경부편평상피세포암 유전자의 증폭과 감소
정국화 ( Guo Hua Ding ),배수미 ( Su Mi Bae ),곽선영 ( Sun Young Kwak ),민현진 ( Hyun Jin Min ),이애리 ( Ae Ry Lee ),유희정 ( Hee Jeong Yu ),남궁정 ( Jeong Namkoong ),오은경 ( Eun Kyeong Oh ),신재은 ( Jae Eun Shin ),최지향 ( Ji Hya 대한산부인과학회 2006 Obstetrics & Gynecology Science Vol.49 No.9
목적: 자궁경부 편평상피세포암에서 array CGH법을 이용하여 유전자 발현의 양상을 조사함으로써 자궁경부 정상조직과 암 조직에서 유전자 발현의 차이에 대하여 알아보고자 하였다. 연구 방법: 자궁경부 편평상피세포암 조직 15예를 사용하였다. 조직을 파라핀에 고정하고, 10㎛씩 절단하여 헤마톡실린과 에오신염색을 한 다음, 미세절제술을 이용하여 DNA를 추출하였다. 1,440개의 human BACs으로 구성된 BAC array에 Cy5-dCTP와 Cy3-dCTP로 각각 표지된 정상과 자궁경부 편평상피세포암의 DNA를 교잡시켰으며, 정상과 환자군의 변이가 0.25배 이상 변화된 BAC clone에 포함된 유전자를 선별하였다. array CGH법에서 발현의 변화를 보인 유전자는 중합연쇄효소반응을 이용하여 그 유전자의 발현정도를 확인하였다. 결과: 자궁경부 편평상피세포암 70% 이상에서 SKI, FLJ13941, ZC3H3, GSDMDC1, PP3856, EEF1D,SOLH, LOC146325, FLJ36208, PIGQ, RAB40C, CYHR1, KIFC2, FOXH1, PPP1R16A, GPT, LOC113655, RECQL4, LRRC14, LRRC24, MGC70857, KIAA1688, PRKCZ, C1orf86, LOC440554, HDAC9, WDR8, TP73, KIAA0495, ESRRA, HSPC152, PRDX5, FLJ37970, RPS6KA4, TSC2, PKD1, RAB26, TRAF7 등 유전자를 포함하는 BAC clone들의 증폭과 PTPRG, LOC389432, SPATA19, LOC283172, KIAA0087, LOC442614, LOC386610 등 유전자를 포함하는 BAC clone들의 감소를 발견하였으며, 중합연쇄효소반응을 통하여 GSDMDC1, ABCF3, PCOLN3, SOLH, PRKCZ 등 유전자의 증폭과 NR3C2, CSF2, MSH6, MTR, PDE1C, ELF5, TXNDC10, SOD1 등 유전자의 감소를 발견하였다. 결론: 자궁경부암 조직에서 Array CGH를 이용하여 유전자발현의 양상을 조사한 결과, BAC clone내에 존재하는 유전자의 발현변화에 관한 정보를 얻을 수 있었다. 이는 자궁경부암의 암화과정에 대해 이해하는데 도움이 되리라 생각한다. Objective: Cervical cancer has long been linked to the sexually transmitted human papillomavirus (HPV), and the oncoproteins E6 and E7 disrupt the functions of tumour suppressor genes, resulting in genetic alteration. It was shown that loss of heterozygosity at 6p is a common genetic alteration in cervical cancer. However, the molecular genetics of cancer have only recently been understood, and for the development of cervical cancer additional genetic alterations in host cell genes are required. The present study has identified the differential changes of the cervical cancer-associated genetic alterations by a genome-wide array based comparative genomic hybridization (array-CGH). Methods: We analyzed 15 cases of cervical cancer from St. Mary`s hospital of The paraffin-fixed tissue samples were microdissected under microscope and DNA was extracted by the procedures of proteinase K digestion and chloroform extraction. Array-based CGH and genomic PCR were carried out with statistical analyses such as hierarchical clustering and Gene Ontology. The BAC array used in this study consisted of 1,440 human BACs, the space among the clones were approximately 2.08 megabase (Macrogen, Seoul, Korea). Results: All of 15 cases of cervical cancer showed specific gains and losses. The analysis limit of average gains and losses was 53%. A significant positive correlation was found between 1p36.32, 3p14.2, 3q27.1, 7p21.1, 8q24.3 and 11q13.1 changes through the cervical carcinogenesis. The high-level of gain regions, BAC clones encoded GSDMDC1, RECQL4, TP73, ABCF3, ALG3, HDAC9, ESRRA and RPS6KA4 genes. Frequently gained BAC clones encoded genes were PRSS8, FUS, COL18A1, PCOLN3, MAFG and ASPSCR1. The genes encoded by frequently lost BAC clones were PTPRG, GRM7, ZDHHC3, EXOSC7, LRP1B and NR3C2. Also, hierarchical clustering of the expression data readily distinguished genomic alterations in cervical cancer. A subset of cellular processes from each gene was clustered by Gene Ontology database. Conclusion: Using Array-CGH, genomic alterations related to cervical cancer were identified to determine whether induction of chromosomal imbalances occurs prior to carcinogenesis. The high resolution of array-CGH combined with human genome database would give a chance to find out possible target genes present in the gained or lost clones.
부인암 (자궁경부암, 난소암) 세포주에서 플라스미드를 이용한 LacZ 유전자 이입율의 변화
김병훈 ( Kim Byeong Hun ),배수미 ( Bae Su Mi ),한유진 ( Han Yu Jin ),이현승 ( Lee Hyeon Seung ),조윤성 ( Jo Yun Seong ),이근호 ( Lee Geun Ho ),허수영 ( Heo Su Yeong ),김재훈 ( Kim Jae Hun ),김용욱 ( Kim Yong Ug ),노덕영 ( No Deog 대한산부인과학회 2004 Obstetrics & Gynecology Science Vol.47 No.5
배경 : 부인암의 치료에서 근간을 이루고 있는 치료방법은 수술요법, 방사선요법, 화학요법 등으로, 그 치료율이 향상에도 불구하고 현재의 치료법은 그 한계에 도달하고 있는 실정이다. 최근 종양 치료의 방향은 암세포의 생물학적 특성을 이해하고 응용하여 인체 내 악성종양에 대한 면역력을 향상시키고, 암세포의 성장을 억제하기 위해 특정 유전자를 이입시키는 유전자 치료법이 연구되고 있다. 목적 : 부인암의 유전자 치료를 위해 부인암과 관련된 종양세포주들에 특정 리포솜의 이입율을 각기 다른 이입방법을 이용하여 알아보았다. 연구 방법 : 본 연구에 사용된 암세포로는 변이형 p53 유전자를 가지고 HPV가 음성인 C33A, HT3, 야생형 p53 유전자를 가지고 HPV 16 양성인 CaSki, SiHa와 Cx16-2, HPV 16 양성인 QGU, 야생형 p53 유전자를 가지고 HPV 18 양성인 HeLa와 HeLa S3, 그리고 케라트노사이트 HPV 16에 의해 암화된 HkcE6/E7를 사용하였고, 난소암 세포로는 야생형 p53 유전자를 가지고 있는 PA-1, p53 유전자가 결실된 SKOV-3, A2774 그리고 변이형 p53 유전자를 가지고 있는 OVCAR-3를 선택하였다. pRcCMCLacZ와 pAAVCMVLacZ 유전자를 Ca^2+-phosphate, Fugen6^TM (Roche, Germany), Lipofectin^TM (GibcoBRL, USA), Lipogen^TM (InvivoGen, USA) 그리고 N-stearyl lactobionamide (N-SLBA) 등의 이입방법을 이용하여 각각의 세포주에 이입하였으며, X-gal 염색법으로 이입된 유전자를 확인하였다. 결과 : CaSki 세포주에서 pRcCMVLacZ를 Ca^2+-phosphate, Fugen6^TM, Lipofectin^TM 그리고 N-SLBA 등의 방법을 이용하여 이입한 후, 200배에서 관찰한 결과 6.8, 9.5, 15.3, 21.0, 6.6%, HeLa에서 8.6, 33.8, 11.9, 20.0, 4.1%, HeLa S3에서 7.1, 31.0, 11.2, 16.2, 16.9%의이입효율을 보였고 400배에서 20.4, 17.7, 26.2, 42.4, 11.4%, HeLa에서 25.5, 39.1, 23.4, 32.0, 17.4%, HeLa S3에서 10.3, 41.8, 132., 23.7, 15.0%의 이입효율을 보였다. pAAVCMVLacZ 유전자 이입시에는 HeLa에서 11.5, 10.1, 26.9, 16.6, 3.0%, HeLa S3에서 7.8, 7.6, 25.8, 19.1, 7.9%, OVCAR-3에서 5.2, 13.4, 13.8, 7.6, 5.0%, SKOV-3에서 14.0, 20.5, 28.7, 11.0, 12.8%의 이입율을 보였다. 결론 : 이와 같은 결과로 볼 때, HeLa와 HeLa S3 세포주에 pAAVCMVLacZ를 이입시킬 때, Fugen6^TM 방법이 다른 방법보다 높은 이입효율을 보였으며, OVCAR-3와 PA-1 세포주에 pAAVCMVLacZ를 이입시킬 때, Lipofectin^TM 방법이 다른 방법보다 높은 이입효율을 보였다. 각각의 세포주는 유전자의 특성과 이입법에 따라 이입효율의 차이를 보였다. Objective : The transfection efficiencies of gynecologic cancer cell lines were investigated by different mediated transfection methods using recombinant LacZ plasmid (pRcCMVLacZ and pAAVCMVLacZ). Methods : In this study, the gynecologic cancer cell lines were used CaSki, SiHa (cervical, HPV16^+, wild type p53 gene), HeLa, HeLa S3 (cervical, HPV 18^+, wild type p53 gene), C33A, HT3 (cervical, HPV^-, p53 mutant), HckE6/E7 (cervical, HPV16 immortalized keratocyte), Pa-1 (Ovary, wild type p53), SKOV-3, A2774 (ovary, p53^del) and OVCAR-3 (ovary, p53 mutant). The pRcCMVLacZ and pAAVCMVLacZ plasmid transfection were performed by using liposome system such as Ca^2+-phosphate, Fugen6^TM, Lipofection^TM, Lipogen^TM and N-stearyl lactobionamide (N-SLBA) with X-gal staining. The LacZ gene was used the reporter gene for the transfection efficiencies evaluation. Results : Each of cell lines were showed different transfection efficiencies by Ca^2+-phosphate, Fugen6^TM, Lipofectin^TM, Lipogen^TM and N-SLBA. Each of cell were revealed that HeLa S3, HT3 and A2774 were high transfection efficiency using the pRcCMVLacZ by the Lipogen^TM, SiHa, HeLa, QGU, OVCAR-3 and PA-1 were high efficiency using the pAAVCMVLacZ by Lipofectin^TM, CaSki was high efficiency using the pRcCMVLacZ by the Lipogen^TM, A2774 and Cx16.2 were high efficiency using the pRcCMVLacZ by the Lipofectin^TM, SKOV-3 and HkcE6/E7 were high efficiency using pAAVCMVLacZ by the Lipogen^TM. Conclusion : As a result, We proved that each of cell lines differed trasnfection efficiencies according to mediated transfection and recombinant LacZ plasmid style. Above all, Lipofectin^TM mediated transfection was showed high efficiency at the most of cell lines.
Experion(TM) assay system을 이용한 난소암 혈청 종양표지물의 발굴
민현진 ( Hyun Jin Min ),배수미 ( Su Mi Bae ),곽선영 ( Sun Yong Kwak ),양민아 ( Min Ah Yang ),이해남 ( Hae Nam Lee ),김용욱 ( Yong Wook Kim ),신종철 ( Jong Chul Shin ),김정식 ( Jung Sick Kim ),남계현 ( Kye Hyun Nam ),김용완 ( Yong 대한산부인과학회 2007 Obstetrics & Gynecology Science Vol.50 No.5
목적: 난소암은 세계적으로 여성에게서의 발생률과 사망률이 높은 악성 종양이다. 불행히도, 아직 임상적인 예후나 특징이 두드러지게 드러나지 않는다. 사실, 높은 사망률은 임상적인 조기진단의 어려움에 있다. 본 연구에서 LabChip 테크놀로지 시스템과 자동화 전기영동 시스템인 Experion(TM)으로 난소암과 관련한 단백질 발현을 위한 연구를 하였다. 재료 및 방법: 분석은 14명의 건강한 여성의 혈청과 28개의 난소암환자의 혈청을 사용하였다. 각각의 혈청은 가톨릭의과대학 임상연구위원회 (IRBC)의 승인을 받았고 강남성모병원으로부터 제공받았다. Experion(TM) (Bio-Rad, Hercules, CA)을 사용하여 분석하였다. 그 후 SDS-PAGE 전기영동하여 Coomassie stain으로 확인한 후, MALDI-TOF-MS로 단백질 확인하였다. 결과: 난소암 관련된 단백질의 분석은 Experion(TM)의 고 처리 검색 (High throughput screening)으로 단백질 정량 값을 볼 수 있었다. 난소암에 있어 높은 민감도와 특이성으로 선별함으로써 Experion(TM) 정량방법이 입증되었다. Ceruloplasmin (115.0 kDa), hemoglobin β chain (15.9 kDa), hemoglobin δ chain (10.7 kDa), serum amyloid A4 (14.8 kDa) 그리고 amyloid relate serum protein SAA (11.7 kDa)이 난소암 환자 혈청으로부터 발견되었다. 난소암 환자와 건강한 여성 사이에서 이들 5개의 단백질의 발현이 차이를 보였다. Experion(TM) assay system은 높은 수준의 정확도를 유지했고, 처리능을 증가시켜 난소암 관련 단백질의 분석을 위해 제공되었다. 결론: 고처리 Experion(TM) assay system으로 난소암에서 새로운 단백질을 확인할 수 있었다. 또한, Experion(TM) assay system은 임상적인 적용을 위한 확실한 데이터베이스로 난소암의 진단을 위해 쉽게 적용될 수 있을 것이다. 본 연구는 Experion(TM) assay system을 이용한 난소암의 잠재적인 혈청 종양표지물의 확인을 위한 첫 번째 보고임에 의미가 있다. Objective: The discovery of new biomarkers for ovarian cancer is clearly necessary for the detection and monitoring of the disease. Experion(TM) automated electrophoresis system can be employed in the identification of differentially expressed proteins in cancer cells. The objective of this study was to discover potential diagnostic serological biomarkers for ovarian cancer. Methods: We performed protein expression difference analyses for 14 healthy women and 28 ovarian cancer patients with stage I, III and IV using Experion(TM) system. And then we checked the protein expression as silver staining after loading at 8~16% gradient gel for comparison with Experion(TM) gel image. The candidate biomarkers were purified and determined using MALDI-TOF mass spectrometer. Results: The distinctive polypeptide peaks were detected at 115.40, 15.96, 14.8, 11.66, and 10.69 kDa and these five peaks were identified as ceruloplasmin, hemoglobin β chain, hemoglobin δ chain, serum amyloid A4, and amyloid related serum protein SAA, respectively. These proteins were significantly different between the sera of normal healthy women and ovarian cancer patients. Conclusions: Five proteins were found to be significantly different between the sera of normal healthy women and ovarian cancer patients. In addition, Experion(TM) assay system can provide high performance for analysis of ovarian cancer-related proteins by increasing the throughput while maintaining a high level of accuracy.
자궁경부 편평상피암에서 DDRT-PCR 기법을 이용한 유전자 발현 및 Gene Ontology 분석
서민제 ( Seo Min Je ),배수미 ( Bae Su Mi ),박경미 ( Park Gyeong Mi ),김병훈 ( Kim Byeong Hun ),김용완 ( Kim Yong Wan ),서경윤 ( Seo Gyeong Yun ),서경아 ( Seo Gyeong A ),김용욱 ( Kim Yong Ug ),허수영 ( Heo Su Yeong ),노덕영 ( No De 대한산부인과학회 2004 Obstetrics & Gynecology Science Vol.47 No.4
목적: 인유두종 바이러스 감염에 의한 자궁경부암 발생에 대한 자연사 (natural history)는 비교적 잘 알려져 있으나 분자생물학적인 면에서의 병태생리는 아직 명확하게 규명되어 있지 않다. 자궁경부 편평상피암 조직에서 유전자 발현 양상을 조사하여 암화과정에 관여하는 유전자들의 다양한 기능과 상호작용에 대해서 알아보고자 하였다. 연구 방법: 양성질환으로 자궁 적출술을 시행한 17명의 자궁경부에서 추출한 RNA를 동일한 농도로 섞어 대조군으로 이용하 Objective: The molecular pathology of cervical cancer associated with human papillomavirus infection is presently unclear. In an effort to clarify the multiple interactions of a number of genes involved in cervical carcinogenesis, the gene expression prof
자궁경부암 조직에서 이차원 전기영동과 질량분석을 이용한 단백질발현의 변화 분석
이성하 ( Sung Ha Lee ),배수미 ( Su Mi Bae ),김옥경 ( Ok Kyoung Kim ),김현정 ( Hyun Jung Kim ),박은경 ( Eun Kyung Park ),이해남 ( Hae Nam Lee ),김용욱 ( Yong Wook Kim ),노덕영 ( Duck Yeong Ro ),이준모 ( Joon Mo Lee ),남궁성은 ( Sung 대한산부인과학회 2005 Obstetrics & Gynecology Science Vol.48 No.7