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- 저자 : 공인수(In-Soo Kong) (검색결과 43 건)
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두유에서 Sacchasomyces uvarum 과 Lactobacillus acidophilus의 혼합배양
공인수,이정수,정용준,류인덕,오두환,유주현,Kong, In-Soo,Lee, Jung-Soo,Chung, Yong-Joon,Lew, In-Deok,Oh, Doo-Whan,Yu, Ju-Hyun 한국식품과학회 1987 한국식품과학회지 Vol.19 No.4
Sacchasomyces uvarum과 Lactobacillus acidophilus를 두유에서 단독 및 혼합배양하였을때 산생성에 미치는 조건은 검토하였다. 접종비율에 의한 산생성은 L. acidophilus와 S. uvarum의 접종비가 2 : 1일때 가장 높은 산도를 보였으며 배양시간은 16시간부터 높은 산도를 유지하였다. 배양온도는 $37^{\circ}C$가 가장 좋았으며 두유에 sucrose를 첨가하여 단독배양하면 산생성의 증가는 없었으나 혼합배양한 결과 산도가 증가하였다. Sucrose 2%와 skim milk 3%를 첨가하여 혼합배양하면 두유만을 사용하여 혼합배양한 것에 비하여 약4배의 산생성 증가를 보였다. S. uvarum의 두유 배양여액을 열처리하지 않고 두유에 첨가하여 L. acidophilus를 단독배양하면 단독배양만으로도 높은 산생성을 보여주었으나 열처리한 배양여액이 첨가된 두유에 L. acidophilus를 단독배양하면 산생성의 증가가 전혀 나타나지 않았다. Among the several lactic acid bacteria, Lactobacillus acidophilus showed the highest acid production when it was cultured mixed with Sacchasomyces uvarum in soymilk. The highest acid production was obtained in 16 hrs of cultivation when the inoculation ratio of L. acidophilus and S. uvarum was 2:1 and the temperature was $30{\sim}37^{\circ}C$. The acid production was greatly enhanced by the addition of 2.0% sucrose. However, skim milk was not stimulatory in mixed culture. During mixed culture in soymilk, acid production was affected by the enzymatic reaction of yeast.
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오륜경 ( Ryunkyoung Oh ),문수영 ( Soo Young Moon ),조화진 ( Hwa Jin Cho ),장원제 ( Won Je Jang ),김장호 ( Jang Ho Kim ),이종민 ( Jong Min Lee ),공인수 ( In Soo Kong ) 한국미생물생명공학회(구 한국산업미생물학회) 2016 한국미생물·생명공학회지 Vol.44 No.3
수해양성 병원성 미생물로 알려진 Vibrio anguillarum으로부터 mannose-1-phosphate를 mannose-6-phosphate, glucose-1-phosphate를 glucose-6-phosphate로 가역적으로 변환시키는 phosphomannomutase/phosphoglucomutase (pmm/pgm)의 유전자를 sequencing하여 1338 bp의 open reading frame (ORF)을 밝혔다. 이는 446개의 아미노산을 포함하며 47,625 Da을 가지고 있다. 보고된 다른 Vibrio sp. 의 pmm/pgm 유전자와 상동성을 비교하였을 때 V. mimicus V. vulnificus, V. splendidus, V. harveyi와 92.3%, 91.4%, 89.9%, 89.9%에 해당하는 상동성을 지니고 있었다. 증폭된 목적 유전자를 pET-28a(+) vector에 연결하여 대장균에서 단백질의 대량발현을 유도하였으며 이는 주로 soluble한 상태로 나왔다. Soluble fraction을 Ni-NTA column chromatography로 정제하여 약 50 kDa의 단백질을 얻었고 이는 주로 mannose-1-phosphate를 이용하는 효소로 확인되었으며 Mg2+ 이온이 존재할 때 효소의 활성이 나타나는 것을 확인할 수 있었다. 본 연구의 유전자는 낮은 온도의 stress하에서 발현이 증가됨을 Reverse Transcriptase- Polymerase Chain Reaction (RT-PCR)을 통해 확인하였고, 상동성 재조합 (homologous recombination)에 의한 돌연변이 균주 제작을 통해 PMM/PGM protein과 lipopolysaccharide (LPS)의 생합성과의 관계를 규명하였다. V. anguillarum wild type과 mutant로부터 LPS를 분리하였고 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDSPAGE)후 silver staining을 통해 LPS의 high molecular weight (HMW) 부분인 O-antigen에서의 변화를 확인하였다. 또한 V. anguillarum wild type과 mutant의 growth와 viability를 확인한 결과 mutant가 wild type보다 정지기까지 더 낮은 생육을 보였으며 viability가 감소함을 확인하였다. 본 연구를 통하여 V. anguillarum의 pmm/pgm 유전자가 미생물의 생육과 LPS 생합성에 관여하고 있음을 알 수있었다. The phosphomannomutase/phosphoglucomutase gene (pmm/pgm) of Vibrio anguillarum (the causative agent of fish vibriosis) was cloned, and the open reading frame corresponded to a protein with 446 amino acids. The pmm/pgm gene showed a significant degree of sequence homology with the previously reported genes from V. mimicus, V. vulnificus, V. splendidus, and V. harveyi, with 92.3%, 91.4%, 89.9%, and 89.9% amino acid identity, respectively. By reverse transcriptase-polymerase chain reaction, we found that the pmm/pgm gene was upregulated under cold stress condition. The PMM/PGM protein is known to catalyze the interconversion between mannose-1-phosphate and mannose-6-phosphate or glucose 1 phosphate and glucose-6-phosphate, which are important intermediates for lipopolysaccharide (LPS) biosynthesis. To confirm the role of PMM/PGM in the LPS biosynthetic pathway, we constructed a knock out mutant by homologous recombination. The respective LPSs were isolated from the V. anguillarum wild-type and mutant strains, and changes were compared by subjecting them to sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis. Based on the different patterns of the LPSs, we expect the pmm/pgm gene to have an important role in LPS biosynthesis. The pmm/pgm-deficient mutant of V. anguillarum will contribute to further studies about the role of LPS in V. anguillarum pathogenesis.
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Vibrio fluvialis oligopeptide permease (oppA) 유전자 deletion에 의한 생리적 특성
안선희,이은미,김동균,홍경은,박은미,공인수,Ahn Sun Hee,Lee Eun Mi,Kim Dong Gyun,Hong Gyoung Eun,Park Eun Mi,Kong In Soo 한국생명과학회 2006 생명과학회지 Vol.16 No.1
Oligopeptide is known to be an essential nitrogen nutrient for bacterial growth. Oligopeptide can be transported into cytoplasm by a specific transport system, Opp system. Opp system is composed of five proteins, which are transcribed by an operon. These are responsible for oligopeptide binding protein (OppA), permease (OppB and OppC) and energy generation system (OppD and OppF), respectively. Previously, we isolated the opp operon from Vibrio fluvialis and constructed the oppA mutant by allelic exchange method. In this study, we investigated the growth pattern and biofilm production under the different growth condition. When the cells were cultivated using brain heart infusion(BHI) medium, the wild type was faster than the mutant in growth during the exponential phase. However, it showed that the growth pattern of two strains in M9 medium is very similar. The growth of wild type showed better than that of the mutant grown at pH 8. At pH 7, there was no an obvious difference in growth. After 5 mM $H_2O_2$ was treated to the cells $(OD_{600}=1.2)$, the cell survival was examined. The oppA mutation did not affect in survivability. In the presence of $10{\mu}g/ml$ polymyxin B, the biofilm production of the oppA mutant was higher than that of the wild type. 미생물이 이용할 수 있는 nitrogen source는 di-, tri-, oli- go-peptide 또는 amino acid의 형태로 세포내로 uptake되어 대사과정에 사용되고 있다. 이와같은 peptide는 특이한 transport system에 의해서 이동되고 있는데 oligo peptide(Opp) transport system에는 binding protein, permease protein, energy 생성을 위한 ATP 분해에 관여하는 protein 이 관여하고 있으며 염색체 상에서 이들 단백질들은 operon 형태의 유전자로부터 발현되고 있다. 본 연구는 gram 음성 세균이며 수해양 서식 세균인 V, fluvialis로부터 얻어진 Opp operon 유전자 가운데 oligopeptide binding protein을 coding하고 있는 oppA 유전자가 deletion된 mutant를 사용하여 여러 환경변화에 따른 생육을 wild type과 비교한 연구 결과 이다. 생육을 위한 완전배지인 brain heart infusion (BHI) 배지와 최소배지인 M9 minimal 배지를 사용한 결과 OppA protein의 생성 결핍에 따라 초기 및 대수증식기 과정 중에는 mutant의 생육이 늦어지고 있으나 Opp system이 아닌 다른 peptide전달 경로로 추정되는 system을 이용하여 대수 증식기 후반에서는 wild type과 거의 같은 생육 형태를 보여 주고 있었다. pH의 변화에 따른 생육은 pH 7에서는 생육정도가 비슷하였으나 약알칼리 부근에서는 oppA mutant의 생육이 wild type에 비하여 낮아지고 있었다. 또한 5 mM $H_2O_2$를 사용하여 $OD_{600}=1.2$농도의 세포들에 대한 영향을 검토한 결과 두 균 모두 높은 생존율을 보여 주었으며 이는 대수증식기 세포들을 사용한 결과와는 매우 다른 형태를 보여 주고 있었다. 항생제 내성에 대한 연구에서는 mutant가 streptomycin과 tetracycline 에 대해서는 wild type과는 다르게 매우 낮은 농도에서도 생육이 되고 있지 않으나 polymyxin B에 대해서는 wild type과 같이 $10{\mu}g/ml$의 농도에서도 잘 자라고 있었다.
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rpoS 유전자를 대상으로 하는 Real-Time PCR에 의한 Vibrio vulnificus 검출
김동균,안선희,배주윤,공인수,Kim, Dong-Gyun,Ahn, Sun-Hee,Bae, Ju-Yoon,Kong, In-Soo 한국해양바이오학회 2007 한국해양바이오학회지 Vol.2 No.4
Vibrio vulnificusis a causative agent of serious diseases in humans resulting from the contact of wound with seawater or consumption of raw seafood. Several studies aimed at detecting V. vulnificus have targeted vvh as a representative virulence toxin gene belonging to the bacterium. In this study, we targeted the rpoS gene, a general stress regulator, to detect V. vulnificus. PCR specificity was identified by amplification of 8 V. vulnificus templates and by the loss of a PCR product with 36 non-V. vulnificus strains. The PCR assay had the 273-bp fragment and the sensitivity of 10 pg DNA from V. vulnificus. SYBR Green I-based real-time PCR assay targeting the rpoS gene showed a melting temperature of approximately $84^{\circ}C$ for V. vulnificus strains. The minimum level of detection by real-time PCR was 2 pg of purified genomic DNA, or $10^3$ V. vulnificus cells from pure cultured broth and $10^3$ cells in 1g of oyster tissue homogenates. These data indicate that real-time PCR is a sensitive, species-specific, and rapid method for detecting this bacterium using the rpoS gene in pure cultures and in infected oyster tissues.
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양어장수내의 암모니아성 질소제거를 위한 질화세균군의 고정화
김성구(Sung Koo Kim),서재관(Jae Koan Seo),이종석(Jong Seok Lee),공인수(In Soo Kong),서근학(Kuen hack Suh) 한국수산과학회 1997 한국수산과학회지 Vol.30 No.5
The immobilization of a microorganism has been rapidly progressed with the development of biotechnology in recent years. Although it has been used as a tool to isolate products from biological media in various areas, it has not yet been practiced in the treatment of waste water. In this paper, we suggest a possibility to apply the immobilization technique in the recirculating aquaculture system. We examined the ability of NH₄^+ removal by nitrifier consortium immobilized in Ba^(++)-alginate, κ-carrageenan and agar bead at the concentration of 50g/L, respectively. In order to use the immobilized nitrifier consortium as media in the fludized bed reactor, the strength of bead was measured. Ba^(++)-alginate as a support material showed higher strength of bead. Also, the nitrifier consortium immobilized in Ba^(++)-alginate showed higher nitrification activity that could remove 20㎎/L ammonium ion than those immobilized in other two support materials, carrageenan and agar. The immobilized nitrifier consortium showed better nitrification activity than free nitrifier consortium.
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Vibrio fluvialis의 Oligopeptide Permease Gene 결손에 의한 생육과 Biofilm 생산의 비교
이은미,안선희,공인수,Lee, Eun Mi,Ahn, Sun Hee,Kong, In Soo 한국해양바이오학회 2006 한국해양바이오학회지 Vol.1 No.2
Vibrio fluvialis의 opp gene cluster내에 존재하는 oppABCDF 유전자를 allelic exchange 방법에 의해서 각각의 유전자가 deletion된 mutant를 제조하였다. 각각의 유전자가 deletion된 mutant의 확인은 PCR과 Southern hybridization으로 결정하였다. 각 mutant들을 BHI 배지에서 생육을 비교한 결과 배양후 4시간 이전까지는 wild strain이 모든 mutant들에 비해서 생육이 좋았으나 4시간 이후부터는 같은 수준의 생육을 보여주었다. Biofilm 생산을 비교한 결과 ${\Delta}oppA$ mutant에서 가장 높은 생산성을 보여주었다. ${\Delta}oppC,D,F$ mutant들의 biofilm 생산은 ${\Delta}oppA$ mutant 보다는 낮았으나 wild strain보다는 높은 biofilm 생산성을 보여주었다. Various ${\Delta}opp$ mutants of Vibrio fluvialis were constructed by allelic exchange method. The mutants occurred in target genes were confirmed by PCR and Southern hybridization analyses. After the exact mutants were identified, cell growth and biofilm production were examined using the respective mutants. The growth of wild strain was more rapid than mutants within 4hr incubation. Thereafter, the growth of wild strain and mutants reached to same level. When the productivities of wild strain and mutants were examined, ${\Delta}oppA$ mutant showed the highest productivity. Though ${\Delta}oppC,D$ and F mutants produced the lower production than that of ${\Delta}oppA$ mutant, the productivities of those mutants were much higher than that of wild strain.
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