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        천연감미료 스테비오사이드와 스테비올의 생체내, 시험관내 유전독성평가

        오혜영(Hye Young Oh),한의식(Eui Sik Han),최돈웅(Don Woong Choi),김종원(Jong Won Kim),손수정(Soo Jung Son),엄미옥(Mi Ok Eom),강일현(Il Hyun Kang),강혁준(Hyuck Joon Kang),하광원(Kwang Won Ha) 대한약학회 1999 약학회지 Vol.43 No.5

        The standard operation procedure of mouse lymphoma L5178Y tk+/- -3.7.2C gene mutation assay (MOLY) has been regarded as a sensitive In vitro mammalian cell gene mutation assay that is capable of detecting clastogens as well as mutagens. Using MOLY, one of natural sweetner, stevioside (5mg/ml) and its aglycon, steviol (340mcg/ml) were evaluated the mutagenicity. Stevioside and steviol did not induce mutagenicity in MOLY. On the other hand, stevioside (250mg/kg, B.W.) and steviol (200mg/kg, B.W.) were also evaluated their ability to induce mucronuclei in regenerating hepatocytes and bone marrow cells of ddY mice. From these results, stevioside and steviol did not induce any mutagenic effect both MOLY and In vivo micronucleus test.

      • 단기 유전독성시험법을 이용한 근로작업환경의 위해성 평가에 관한 연구

        손수정,김종원,한의식,엄미옥,강혁준,강일현,변은경,장은철,권영준,이수진,길광섭,오혜영 식품의약품안전청 1998 식품의약품안전청 연보 Vol.2 No.-

        국내 8개 인쇄업체의 혼합 유기용매에 직업적으로 노출된 근로자 51명의 유전독성을 평가하고자 사람 말초혈액을 이용한 염색체이상시험과 세포질 분열억제 소핵시험을 시시하였다. 흡연과 작업기간등을 고려하여 일반직 근무자를 대조군으로 선정하였으며,발암물질인 mitomycin C와 혼합 유기용매의 병용효가도 비교, 관찰하엿다. 혼합 유기용매에 폭로된 작업장 근로자에서 소핵 생셩빈도가 대조군보다 유의하게 증가하엿으며, 이는 작업기간별로 소핵 빈도를관찰하엿을 때에도 유의한 증가를 나타내엿다. 작업장 근로자와 대조군으 ㅣ말초혈애게 mitomycin C를 처리한 결과에서도 작업장 근로자에서 농도 의존적으로 소핵이 유의하게 증가함이 관찰되엇다. 염색체이상시험 결과에서는 작업장 근로자와 대조군 비교 시 유의성 잇은 차이를 나타내지 않앗으며, 작업기간,흡연,mitomycin C 처리 등의 유무에 따라서도 유의한 차이를 나타내지 않았다. The popula'tion monitoring study was performed by using the chromosome aberration assay and the cytokinesis-:blocked micronucleus assay to investigate whether occupational exposure tonixed organic solvents are genotoltic to workers. The blood samples were collected from fifty one malepresser and matched controls in Seoul area. Smoking habits a]Id duration of employment were fatteninto account. Also, we focu.sod on the synergic effects of organfc sotvents and a DHA damaging agentmitomycin C(MMC). The frequencfes of mieroaucleus in periphffral Iymphocytes from worlters erposedto organic sotvents were significantly different in comparision with control subjects. Alse there weresignificant differences in tOe frequencies of micronucleus by duration of exposure. The combined expo-sure of the cells to the organic solvents with MMC showed synergic effect in cytoBtinesis-blocked micro-aucleus assay- The frequency of chromosome aberrations did not show any increase.

      • 형질전환동물세포주에서 벤조피렌의 변이유발성에 대한 천연물질의 항 돌연변이 효과

        엄미옥,한의식,손수정,김종원,류병규,변은경,강일현,강혁준,길광섭,오혜영 식품의약품안전청 1998 식품의약품안전청 연보 Vol.2 No.-

        인간에게 고퉁을 주고 있는 질병중 많은 부분이 돌연한이로 인한 특정 유전자의 손상과 손상된 윤전자의 발현과 관련되어 있음이 밝혀져 왔다. 특히 암은 대표적인 유전자 돌연변이의 결과로 생기는 빌병으로서, 많은 암 유발 용힌중 화학물질에 의한 돌연변이 유발작용이 발암성과 관련하여 많은 관심의 대상이 되고 잇다. 따라서 본 연구에서는 외부DNA를 자신의 genome내게 삽입시킨 형질전환동물로부터 제조된 세포주를 이용하여 유전자 돌연변이를 검출할 수 있는 최신 유전독성 연구기댄을 확립하고자 하였다. 시험법을 확립하기 위하여 f3c f gene을 target으로 하는 Big Blue· Transgenic Mouse Embryonic Cell을 사용하였으며,시험법의 타당성 및 재현성여분를 확인하기 위하여 음성대조물질로는 1% DMSO, 양성대조물질로는 100rg/mf MNU(rnethrlnitrosourea)를 이웅하여 시험한 결과 mutant frequency(MF)는 각각 0.55±0.39Nle-', 4.26±1.51×10-'으로 나타나 재현성을 확인하였다. 또한 이 시험법의 유용성을 높이기 위하여 B[alP (benzo(alpyrene)를 양성대조물질로 in oifro대사환성화계에서 시험한 결과, 처리농도 20, 40, 60rgjm1에 대하여 Mf값이 9.1츠겪.14×10-", 14.3츠깆.86×10-', 20.St3.78×10-"로서 농도의존성을 보였다. 또한 식품을 비롯한 각종 천연물에는 돌연변이원 물질의 활성을 억제 또는 경감시키는 작용이 많이 보고되고 있어 갈조류의 일종으로서 강력한 항산화효과를 나타내는 것으로 알려진 료」ooi3 rfofonif☞ra(속칭 :곰피)를 사옹하여 꽉립된 시험법으로 항돌연변이 효과를 점색하고자 하였다. 양성대조물질로 사용한 MNU에 대하여 곰릭의 메탄을 추출물을 병용투여하여 항돌연변이 효자를 시험하였다. 100rg/mf MNU와 곰피 25.6, 51.2, 100.3#9/mf을 병용처리한 결과 MF가 각각 67, 79, 74% 감소하여, 형질전환동물세포주께서 공피 추출물치 돌연변이 억제 효과를 관찰하였 다. 그러나 암 예방제 개발의 기초자료로 활용하기 위해서는 돌연변이된 염기 서열을 분석하여 변이의 종류와 특성을 확인하여 그 작용기전을 밝히는 추가연구가 수챙되어야 할 것으로 사료된다. Transgenic animal cell with a A shuttle vector containing a fac ftarget gene is useful as a short-term in oifro mutagenesis assay. The gene is recovered from the cells treated by exposiog mousegenomic DNA to in oifro packaging extracts and plating the rescued phage on agar plates containing S-brorno-4-chloro-3-indolyl fD-galactopyranoside (X-gal). Phage with mutations in the f3c f gene formblue plaques, whereas phage with a nonrnutated fac J form colorless plaques, so mutant is defected easily.In order to estabilish this new transgenic technology, we studied mutagenicity of the direct-ectingalkylating agent N-methyl-N-nitrosourea (MNU ) and indirect mutagen benzora]pyrene in the BigBlue" transgenic mouse emf)ryonic cell line. Treatment of the cells with MNY or benzo[alpyrene causedinduction of mutations over 1% DMSO negative control and we conformed the reproducibility of thetransgenic mutagenicity assay. Also, dose-dependent response has been ohserved in benzo[a]pfrene-treatment cells. Sdrfonia afofonif☞ra, an edible brown algae, haying a strong antioBidizing activity, wasevaluated its antimutagenic effect by performing this assay, the methanol extract of Sffonia sfofonifrrashowed rfuction of mutation frequencies in MNU-treated transgenic mouse cells.

      • 식품등의 새로운 가이드라인에 의한 유전독성평가에 관한 연구

        오혜영,한의식,김종원,박장환,엄미옥,강일현,강혁준,하광원 식품의약품안전청 1997 식품의약품안전청 연보 Vol.1 No.-

        ssay)의 "표준작업지침서"를 작성하였으며, 획집된 시험법을 촬용하여 5vioside(Smg/mf) 및 그 체내 가순뜰해 물질인 steviol(340fe/mf)의 유전독성을 평가한 결과 유전독성을 나타내지 않는 물질로 판명되었으며, MOLY시험 에서 stevioside 및 steviol은 ethanol (1%)과의 병용툰여에서포 유전독굉에 어펴한 영향도주지 찮았다. 마우스의 간세포 및 골수세포를 이용한 쏘핵시험에서도 stevioside(250mg/kg) 및 steviol(200mg/kg)은 돌연변이를 일으키 지 알는 물질로 판명되었고, ethanol . NNK(Imgfg)에 의한 유전독성 상숭효과도 보이지 않았다. The standard operation precedure of mouse tymphoaa L5178y TK-/-3.7.2C gene ntion (MOLY) assay was estal)lished- The MOLY assay has been regarded as a sensitive in oifro marlian cell mutation assay that is capable of detecting clastogens as well as mutagens. Using MOLY aone of natural sweetener, ste·yioside (Srag/mf) and its aglycon, steviol (340fg/m1) were evaluatedmutagenicity both single treatmeBt and in combination with ethanol (1% ). Stevioside and stevionot induce mutagenicity in bfOLY assays. On the other hand, stevioside (2SOmg/kg, B.W.) and steviol (200mg/kg,3.W.) were also e!valuated their mutagenicitr in regenerating hepatocytes and bone marrowcells of ddY micr for detecting. Stevioside aad steviol did not show inotagenic effect. Ethanol (1% ) and4- (methylnitrosamiBo)-1- (3-Pylidyl)-1-butanone (NNK, Irn9/kg. B.W.) did not induce synergic effectin bone marrow micronucleus test.

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