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Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki HD-1 CryIIA의 내독소 단백질 유전자의 클로닝 및 발현
김호산,김상현,제연호,유용만,서숙재,강석권,조용섭 한국응용곤충학회 1993 한국응용곤충학회지 Vol.32 No.3
Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki HD-1으로부터 생산된 살충성 내독소 단백질을 coding하는 CryIIA 유전자를 클로닝하고 염기서열을 조사하였다. HD-1 균주의 12개 plasmid 중 225kb plasmid를 분리하여 CryIIA 유전자를 포함하는 5kb HindIII 절편을 hybridization하여 찾아냈다. 이 절편을 plasmid pUC19에 ligation하여 E. coli에 형질 전환하였다. 이 독소 유전자를 포함하는 4kb BamHI-HindIII 절편은 vector pT7-5에 ligation하여 pSKIIA라하였다. pSKIIA는 3개의 open reading frames(orf1, orf2, orf3)로 구성되어 있으며 염기서열은 3,952base로 되어 있었다. 이러한 3개의 orf 각각의 발현 여부를 확인하기 위하여 생물검정을 하였다. 그러나 orf1 또는 orf2에 의한 형질 전환체는 독성이 없는 것으로 나타났다. orf3를 포함하는 형질 전환체는 3종의 나비목 곤충(배추점나방, 담배거세미나방, 담배나방) 및 1종의 파리목 곤충(집모기) 유충에 대하여 독성을 나타내었다. The CryIIA gene encoding the insecticidal crystal protein of Bacillus thuringiens!s subsp. kurstalri HD-l has been cloned in Escherichia col!, and its nucleotide sequences were determined completely. 5kb Hindlli fragment harboring CryIIA gene was screened in the large ca. 225kb plasmid DNA by southern blot. HindlIT digested 5kb fragment was ligated into pUC19 and transformed in E. coli. The 4kb BamHI-HindlIT fragment containing the CryIIA gene was subcloned and named pSKIIA. DNA sequence analysis demonstrates that pSKIIA is the gene of an operon which is comprised of Lhree open reading frames (designated orn, orf2 and or£3). The CrylIA gene is composed of 3,952bp-long BamHI-Hindill DNA restriction fragment. The orf3 code for a polypeptide of 633 amino acid residues. The protoxin protein has a predicted molecular weight of 70,780. The E. coli derived protoxin gene product is biologICally active against three species of Lepidopteran (Plu.lelia maculipennis, He/iolhis assulta, Spodoptera litura) and a species of Dip Leran( Culex pipines) larvae in bioassay.
새로운 Bacillus thuringiensis NT0423 균주의 배양체계
김호산,노종열,이대원,우수동,강석권 한국응용곤충학회 1998 한국응용곤충학회지 Vol.37 No.2
For efficient and economical production of Btrc,illus tlz~rr.ingi~r1~sstirsa in NT0423 as amicrobial-control agents, a new culture medium and culture condition were developed. Five mediadesignatzd as SWI I , SW14, SW23. SW32 and SW4I were prepared ~ : i t hv arious mixture ratio ofsoybean cake and wheat bran. It was founcl that in terms of the cell growth rate and development ofsporulation of B, thrri.il~girrl.sis strain NT0423 in all SW culture media were more efficient than those inGYS and in LB media. Total cell number in all SW media showed similar values, hut SW32 lnediilm wasthe most efficient in the development of spore, which amo~~ntetod 3.7 x 10XC FUImI. Also. at the pHranging frorn 6.2 to 7.3 in the mediiun~ no ad\:erse effect was not made in the culture of B. thur-ingicnsisstrain NT0423. The optimal volume (%) of SW32 mecliuni in a 5 1 fernientor was determined as 4 8\rolume of total niediuni. resulting ill growth (4.2 x 1OTCFUlrnl) of H. t1~~irir1,yirrz.ssit.vr ain NT0423. As H.t l i ~ t r i t ~ g iw~ a~s~ csuil~tu rcd in the shakc-flash and 5 1 fcrnientor. bacterial cells were yielded to 1 X 10"CFUIml and 5 x I O1oCFLJlml.FUIml and 5 x I O1oCFLJlml. 새로운 Bacillus thuringiensis NT0423균주를 이용한 배양체계를 확립하고 대량생산을 위한 새로운 배양배지를 개발하였다 대두박과 밀기울의 다양한 성분비로 구성된 5종의 SW 배지는 기존의 인공합성배지인 GYS나 LB B. huringiensis 의 성장과 포자형성면에서 훨씬 우수한 결과를 보였고, 그중 대두박과 밀기율이 3:2의 비율로 구성된 SW32배지에서 전체 세포수가 3.9$\times$${10}^{8}$CFU/ml에 달했고, 대부분의 세포가 빠르게 포자를 형성하여 (3.7$\times$${10}^{8}$CFU/ml)가장 효율적이었다. 배양에 따른 배지의 pH는 최저 6.2에서 최고 7.3까지 변화하여 성장에 크게 영향을 미치지 않았고, 전체 배양액에서 대두박과 밀기울이 차지하는 비율이 4%일 경우, ml당 4.2$\times$${10}^{8}$CFU/ml의 포자가 형성되어 B. thuringiensis 의 성장에 가장 유리하였다. 교반플라스크와 5ι의 소규모 발효기를 이용한 B. thuringiensis 의 배양조건 확립에 의해 각각 최대 1$\times$${10}^{9}$CFU/ml과 5$\times$${10}^{10}$CFU/ml에 해당하는 많은 양의 균체를 회수할 수 있다.
다차원 스펙트럼 해석법을 이용한 탈수 시 드럼세탁기의 소음 기여도 분석
김호산(Kim, Ho-San),박상길(Park, Sang-Gil),강귀현(Kang, Kwi-Hyun),이정윤(Lee, Jung-Yoon),오재응(Oh, Jae-Eung) 한국소음진동공학회 2007 한국소음진동공학회 논문집 Vol.17 No.11
Recently, there has been a growing consumer interest in the amount of noise produced by household electrical appliances. The designer of the product must identify the source of the noise, in order to reduce the noise. In the case of a household electric appliance such as the washing machine, there is consumer's complaint about the noise that is generated during the dehydrating condition. Because of several noise sources combined each other. It is difficult to identify the noise sources that contribute to the noise output. Multi-Dimensional Spectral Analysis (MDSA) is a method that can remove the correlation between different noise sources, and it expresses the key contributing factor as a unique output. This study utilized MDSA to analyze the contribution of each input in the noise output during the dehydrating condition.
한국 토양에서 분리된 Bacillus thuringiensis의 분포와 특성조사
김호산,박현우,이대원,유용만,김정일,강석권 한국응용곤충학회 1995 한국응용곤충학회지 Vol.34 No.4
해충의 방제에 효과적으로 이요할 수 있는 Bactllus thuringiensis 균주를 분리하기 위하여 전국의 다양한 토양을 채취하여 B. thuringiensis의 분포와 독성을 조사하였다. 총 548개의 토양을 전국 각지에 채취하여 포자와 내독소 단백질을 생산하는 64개의 B. thuringiensis를 분리했다. 분리된 64개의 B. thuringiensis를 나비목의 누에(Bombyx mori), 파리목의 빨간집모기(Culex pipens), 딱정벌레목의 쌀바구미(Sitophilus oryzae)의 세 종에 대해서 독성을 검정한 결과, 누에에 독성을 띠는 균주가 42.2%로 가장 많았으며, 누에와 빨간집모기에 동시에 독성을 띠는 균주가 31.3%, 빨간집모기에 독성을 띠는 균주는 20.3%의 비율로 분리되어 다양한 독성 분포를 보였다. 그러나 쌀바구미에 독성을 띠는 균주는 분리되지 않았고, 내독소 단백질은 형성하지만 독성이 없는 무독성 B. thuringiensis가 62%의 비율로 분리되었다. To isolate naturally occurring novel Bacillus thuringiensis strains for useful pest con시 agents, A total of 64 isolates of B. thuringiensis producing spore and crystal were obtained from 583 soil samples in Korea. Toxicity of isolates was assayed against Lepidoptera (Bombyx ori), Diptera (Culex pipens) and Coleoptera (Sitophilus oryzae), respectively. The results showed that B. thuringiensis isolates toxic Lepidoptera are 42.2% , both Lepidoptera and Diptera are 31.3% and Diptera are 20.3%, demonstrating that spectrum of insecticidal activity of B. thuringiensis isolates is various. But no B. thuringiensis isolates have toxicity against Coleoptera.