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      • Nitric Oxide에 의한 난소 과립세포의 Apoptosis 조절에 대한 연구

        강한승,이석자,김외리,이채관,신창숙,김성태,강성구 인제대학교기초과학연구소 1998 자연과학 Vol.2 No.-

        여포의 퇴화가 진행되는 기작에서 apoptotic cell death 와 nitric oxide (NO)의 연관성에 관하여 실험하였다. 난소의 apoptosis는 GnRH에 의해 유도되고 스테로이드에 의해 억제된다. 여포에서 과립 세포의 apoptosis에 대한 호르몬의 영향과 NO 생산효과를 조사하기 위하여 중간크기 (직경 5-6 ㎜)의 여포에서 non-apoptotic 과립세포를 분리하여 스테로이드, GnRH agonist, GNRH agonist+SNP, 그리고 NO 공여체인 SNP를 처리하여 24시간동안 배양하였다. 배양된 과립세포에서 게놈 DNA를 추출하여 apoptotic DNA절편화 경향을 알아보았고, 배양액과 griess reagent를 반응시켜 nitrite 농도를 측정하였다. 스테로이드 호르몬을 처리하였을 때, 대조군에 비해 NO 생성이 다소 증가하였으며 apoptotic DNA 절편화도 억제되었다. GnRH agonist 처리군에서는 apoptotic DNA 절편화가 가속화 양상을 나타내었으며 NO 생성은 다소 감소하였다. 그러나 GnRH agonist+SNP 그리고 SNP 처리군에서는 apoptotic DNA 퇴화가 억제되었으며 NO 농도는 대조군에 비해 현저히 높았다. 위의 실험 결과로 보아 과립세포 분화와 여포성숙과 퇴화과정에서 호르몬과 NO가 밀접한 관련이 있는 것으로 사료된다. To study the regulation of porcine follicular cell apoptosis by steroids, GnRH agonist and nitric oxide, we have analyzed DNA fragmentation, the hallmark of apoptosis, and nitrite production in porcine granulosa cells. In, ovarian apoptosis is induced by GnRH but is prevented by steroids. Apoptosis is confined to the granulosa cells but it was not clear whether apoptosis of granulosa cell was regulated by NO in vitro. So non-apoptotic granulosa cells isolated, grown at 37℃, for 24 hrs, and treated with / without SNP, GnRH agonist, and sterioid, respectively. In cultured granulosa cells were used to extract genomic DNA and culture media was assayed for nitrite concentration. Nitrite production of culture media was increased and apoptotic DNA fragmentation was supressed in SNP treated groups, GnRH agonist+SNP, and estrogen, progesterone. Nitrite concentration in culture media was decreased and apoptotic DNA was induced treated with GnRH agonist. These data suggest that NO production and apoptosis may be involved of granulosa cell differentiation and ovarian follicular atresia by SNP, estrogen and progesterone. Moreover, NO can overcome the granulosa cell apoptosis induced by GnRH agonist.

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