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        Cortisol 유발 세포독성에 대한 아연 관련 항산화 유전자 발현 증가에 의한 세포보호 효과

        정미자(Mi Ja Chung),김성현(Sung Hyun Kim),황인민(In Min Hwang) 한국식품영양과학회 2015 한국식품영양과학회지 Vol.44 No.5

        무지개송어 아가미상피세포를 이용하여 cortisol에 의해 유도된 세포 손상에 대항하는 아연의 보호 효과를 연구하였다. 24시간 동안 cortisol에 노출된 세포들은 농도 의존적으로 LDH 방출이 증가하였고, 세포 생존율은 감소하였다. 아연(100 μM ZnSO₄) 처리에 의해 이와 같은 영향이 감소하였고, 아연은 cortisol에 의해 유도된 caspage-3 활성, 즉 apoptosis에 대항하여 세포를 보호하였다. Cortisol에 의해 유도된 세포 사멸, LDH 방출과 caspase-3 활성은 glucocorticoid 수용체의 길항제인 Mifepristone(RU-486) 처리에 의해 차단되었는데, 이것은 세포 손상이 cortisol과 관련이 있다는 것을 제안하였다. 더하여 cortisol에 의해 유도된 세포 손상 모델에서 MT, GST 그리고 G6PD와 같은 항산화 유전자 발현에 대한 아연의 영향을 연구했다. MTA, MTB, GST 그리고 G6PD mRNA 수준은 아연과 cortisol을 각각 단독 처리에 의해 그리고 아연과 cortisol을 동시 처리에 의해 증가하였다. 이와 같은 증가는 아연이나 cortisol 단독 처리보다는 100 μM ZnSO₄와 1 μM cortisol을 동시에 처리했을 때 MTA, MTB, GST 그리고 G6PD mRNA 수준이 더 높았다. 아연 처리에 의해 세포 내 자유 아연 농도가 증가하였고, 이와 같은 반응은 cortisol과 아연을 함께 처리했을 때 세포 내 자유 아연 농도가 더 증가하였다. 결론적으로 아연 처리는 간접적인 항산화 활성을 통해 cortisol에 의해 유도 세포독성 및 apoptosis를 저해하였다. The protective effect of zinc against cortisol-induced cell injury was examined in rainbow trout gill epithelial cells. Cells exposed to cortisol for 24 h showed increased leakage of lactate dehydrogenase (LDH) as well as decreased cell viability in a dose-dependent manner. Treatment with zinc (100 μM ZnSO₄) reduced the severity of both LDH release and cell death as well as protected cells against cortisol-induced caspase-3 activation, indicating reduction of apoptosis. Cortisol-induced cell death, leakage of LDH, and caspase-3 activation were blocked by the glucocorticoid receptor antagonist Mifepristone (RU-486), suggesting that cell injury was cortisol-dependent. In addition, we studied the effect of zinc on the expression of antioxidant genes such as metallothionein A (MTA), metallothionein B (MTB), glutathione-S-transferase (GST), and glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PD) during cortisol-induced cell injury. MTA, MTB, GST, and G6PD mRNA levels increased after treatment with zinc or cortisol, separately or in combination. Higher mRNA levels of MTA, MTB, GST, and G6PD were detected when cells were treated with 100 μM ZnSO₄ and 1 μM cortisol in combination at the same time compared to treatment with zinc or cortisol separately. Cells treated with zinc showed increased intracellular free zinc concentrations, and this response was significantly enhanced in cells treated with cortisol and zinc. In conclusion, zinc treatment inhibited cortisol-induced cytotoxicity and apoptosis through indirect antioxidant action.

      • KCI등재

        검정콩 껍질 유래 안토시아닌의 RBL-2H3 세포에서 탈과립화와 사이토카인 생성 저해 효과

        정미자(Mi Ja Chung),하태정(Tae Joung Ha),최하나(Ha Na Choi),이지선(Ji Sun Lee),박용일(Yong Il Park) 한국식품영양과학회 2011 한국식품영양과학회지 Vol.40 No.12

        안토시아닌(anthocyanins)은 플라보노이드에 속하고 항산화 활성들을 포함한 그들의 다양한 건강 유익성에 대해 알려져 있다. 그들 중 검정콩 껍질에서 분리한 주요 안토시아닌은 glycopyranose를 함유하고 있는 배당체이다. 천식은 호염기성 세포(basophils)와 비만세포(mast cells)를 포함한 다양한 면역세포와 관련된 알레르기 관련 질병이다. 호산구 (eosinophils), 호염기성 세포, 비만세포는 탈과립화에 의한 천식-특이적 보조 2(T-helper 2) 사이토카인 분비 그리고 계속해서 일어나는 증폭과 같은 염증을 일으키는 매개체의 증가를 통해 알레르기 천식(allergic asthma)에서 중요한 역할을 한다. 흰쥐 호염기성 백혈병(rat basophilic leukemia) RBL-2H3 세포는 알레르기 반응을 측정하기 위해 가장 일반적으로 사용되는 in vitro 모델이다. 본 연구에서는 검정콩 껍질 안토시아닌이 항원으로 자극한 RBL-2H3 세포에서 탈 과립 그리고 Th2 사이토카인 생산에 미치는 효과를 조사하였다. 세포 탈과립은 β-hexosaminidase의 방출을 검출함으로써 평가하였다. IgE-항원 복합체로 자극한 RBL-2H3 세포내 β-hexosaminidase 방출과 Th2 사이토카인 생산이 무 처리군의 그것과 비교하여 더 높았다. 안토시아닌은 RBL-2H3 세포의 IgE-항원 복합체 유도 탈과립을 현저하게 억제 시켰고 RBL-2H3 세포내 IgE-항원 복합체-매개체 interleukin( IL)-4, IL-13 그리고 TNF-α 생산을 저해하였다. 이러한 결과는 검정콩 껍질 유래 안토시아닌이 알레르기 반응(allergic reaction)을 현저히 저해하는 효과가 있음을 보였고, 이들 안토시아닌이 향후 알레르기 천식을 억제하거나 개선하는데 유용한 물질로 사용될 가능성이 있을 것으로 판단되었다. Anthocyanins belong to a group of flavonoid compounds and are well known for their various health beneficial effects, which include antioxidative activities. Among them, the major anthocyanins isolated from seed coat of black soybean (Glycine max L.) were previously characterized as glycosides containing glucopyranose. Asthma is an allergic disease that is strongly associated with various immune cells, including basophils and mast cells. Eosinophils, basophils, and mast cells play important roles in allergic asthma through the release of inflammatory mediators such as asthma-specific T-helper 2 (Th2) cytokines and subsequent amplification of asthma symptoms via degranulation. Rat basophilic leukemia RBL-2H3 cells are the most common in vitro models for evaluating allergic reactions. In this study, we examined the effects of anthocyanin from seed coat of black soybean on antigen-stimulated degranulation and Th2 cytokine production in RBL-2H3 cells. Cell degranulation was evaluated by measuring the release of β-hexosaminidase. β-Hexosaminidase release and Th2 cytokine production in RBL-2H3 cells was much higher upon stimulation with IgE-antigen complex than those in untreated control cells. Anthocyanins significantly suppressed IgE-antigen complex-induced degranulation of RBL-2H3 cells and inhibited IgE-antigen complex-mediated interleukin (IL)-4, IL-13, and tumor necrosis factor α (TNF-α) production in RBL-2H3 cells. These findings suggest that anthocyanins from seed coat of black soybean effectively inhibit allergic reactions and may have beneficial effects against allergic asthma.

      • SCOPUSKCI등재

        자작나무류, 대나무류 및 다래나무 수액의 성분조성

        정미자(Mi-Ja Chung),이수정(Soo-Jung Lee),신정혜(Jung-Hye Shin),조종수(Jong-Soo Jo),성낙주(Nak-Ju Sung) 한국식품영양과학회 1995 한국식품영양과학회지 Vol.24 No.5

        수액은 약리작용이 있다하여 민간요법으로 오랜기간 이용되어 왔으나 이에 관한 과학적인 연구는 의외로 적다. 더우기 요즈음은 환경오염이 심각해짐에 따라 자연 무공해 식품에 대한 관심이 증가하여 수액의 효율적인 이용이 절실히 요구되고 있는 실정이다. 따라서 본 실험에서는 자작나무류, 대나무류 및 다래나무 수액을 이용하여 천연 건강음료로 개발하기 위한 기초자료를 얻고져 무기물, 유리당, 아미노산, 핵산관련 물질 등을 분석하였다. 수액 중 무기물은 총 5종이 검출되었으며 이들의 함량은 칼슘, 칼륨이 월등히 많았고 다음으로 마그네슘, 나트륨, 철분의 순이었다. 특히 대나무류 수액에서 무기물이 풍부하여 칼슘이 242.0~422.1㎎/L, 칼륨이 793.8~2504.1㎎/L 및 마그네슘이 72.6~165.9㎎/L로 높게 정량되었다. 유리당은 glucose, fructose, sucrose가 검출되었고, maltose는 검출되지 않았다. 자작나무 수액(#2)에서 glucose(42.1g/L), fructose(36.9g/L)가 가장 높게 검출되었다. 핵산관련 물질은 CMP, UMP가 정량되었고 GMP, IMP, AMP, hypoxanthine은 거의 검출되지 않았다. 아미노산은 18종 검출되었는데 총 아미노산은 2.4~30.4㎎% 범위였으며, 주요 아미노산은 자작나무 수액(#1, #2)에서 taurine, glycine, lysine, alanine과 threonine이었으며, 거제수나무 수액(#3)과 물박달나무 수액(#4)에서는 glutamic acid와 lysine, 대나무 수액(#5, #6, #7)은 lysine, valine, alanine, serine, tyrosine과 glutamic acid였고, 다래나무 수액(#8)은 leucine과 alanine이었다. This study was attempted to establish the basic data for evaluating chemical components in the sap from birches (Betula platyphylla Sukatschev, Betula costata Trautv, Betula davurica Pallas), bamboos (Phyllostachys pubescens, Phyllostachys bambusoides, Phyllostachys nigra), Darae (Actinidia arguta). Calcium and potassium in five kinds of mineral detected in the sap were dominant mineral, magnesium, sodium and iron in order and calcium, potassium and magnesium are abundant in the sap from bamboo more than the other sample and the contents were 242.0~422.1㎎/L, 793.8~2504.1㎎/L and 72.6~165.9㎎/L, respectively. Free sugars of the sap determined were glucose, fructose and sucrose, but maltose was not detected. The contents of glucose and fructose of the sap from Betula platyphylla Sukatschev (#2) were the highest and 42.1g/L and 36.9g/L, respectively. The detectable nucleotides and their related compounds were CMP, UMP, GMP, IMP, AMP and hypoxanthine. The total contents of composition amino acids detected from eighteen kinds of the sap were in the range of 2.4~30.4㎎%. The major amino acids were taurine, glycine, lysine, alanine and threonine in the sap from birch (#1, #2), glutamic acid and lysine in the sap from Betula costata Trautv (#3) and Betula davurica Pallas (#4), lysine, valine, alanine, serine, tyrosine and glutamic acid in the sap from bamboos, and glutamic acid, leucine, alanine in the sap from Darae.

      • SSCISCIESCOPUSKCI등재
      • KCI등재

        SK-N-SH 신경세포내 항산화 효과와 p38 인산화 억제에 의한 곤드레, 누룩치 그리고 산마늘의 신경 보호 효과

        정미자(Mi Ja Chung),박용일(Yong Il Park),권기한(Ki Han Kwon) 한국식품영양과학회 2015 한국식품영양과학회지 Vol.44 No.3

        신경계 질환은 산화적 스트레스에 의한 신경세포 손상에 의해 발생하는 것이 하나의 기전으로 알려져 있다. 본 연구는 H₂O₂에 의해 유도된 산화적 스트레스에 대항하여 곤드레(Cirsium setidens, CS), 누룩치(Pleurospermum kamtschaticumin, PK) 그리고 산마늘(Allium victorials, AV)의 뇌신경 보호 효과 및 그 기전에 대한 것이다. CS와 AV 처리는 대조군과 비교하여 400 μg/mL까지 인간의 신경세포주인 SK-N-SH 세포에 대해 세포독성이 없었다. 산화적 유도자인 H₂O₂를 SK-N-SH 세포에 처리하였을 때 세포사멸 및 활성산소종(ROS) 생산이 현저하게 증가하였으나 CS 또는 AV 처리에 의해 산화적 스트레스에 의해 증가된 세포사멸과 ROS 생산이 현저하게 감소하였다. 실험한 산채 중에 CS와 PK가 AV보다 더 강한 DPPH 라디칼 소거 작용이 있었으나 PK는 대조군과 비교하여 SK-N-SH 세포를 사멸시키는 강한 세포독성을 가지고 있었다. CS는 AV보다 산화적 스트레스에 대항하여 세포사멸 및 ROS 생성에 더 높은 저해적 영향력을 보여주었다. 따라서 계속되는 실험에는 CS를 사용하였다. CS의 순차적 용매 분획물들인 헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부탄올 및 물 분획물들(CS-HE, CS-CH, CS-EA, CS-BU, CS-AQ)은 산화적 스트레스에 대항하여 SK-N-SH 세포사멸 및 세포내 ROS 생성을 억제하였다. CS-EA는 5개의 분획물들 중 가장 강한 DPPH 라디칼 소거 작용 및 세포내 ROS 소거 활성을 가지고 있었고, 가장 강한 뇌신경세포 보호 효과를 가지고 있었다. CS-EA는 산화적 스트레스에 의해 증가된 세포자멸사(apoptosis)의 신호전달 경로에 관여하는 p38의 인산화를 저해함으로써 활성화 되는 것을 약화시켰다. 이 결과들은 CS-EA가 뇌신경세포에서 항산화 효과 및 p38 인산화 억제에 의한 뇌신경 보호 효과를 나타낼 것이라 제안하였다. Oxidative stress is one of the key mechanisms involved in neuronal damage. Neuroprotective effects and underlying mechanisms of action of several wild vegetables, Cirsium setidens (CS), Pleurospermum kamtschaticumin (PK), and Allium victorials (AV), against oxidative stress induced by hydrogen peroxide in SK-N-SH cells were investigated. CS and AV up to 400 μg/mL showed no detectable effects on cell viability of human SK-N-SH neuroblastoma cells compared with control. Incubation of SK-N-SH cells with hydrogen peroxide resulted in significant induction of cell death and reaction oxygen species (ROS) production, whereas treatment of cells with CS and AV significantly reduced cell death and ROS production, respectively. Among the wild vegetables tested, CS and PK showed more effective DPPH radical scavenging activity than AV, whereas PK showed strong cytotoxicity in SK-N-SH cells compared with the control. CS showed much higher inhibitory effects on cell death and ROS generation against oxidative stress than AV. Thus, CS was selected for subsequent experiments. Ethyl acetate (EA), hexane, butanol, aqueous, and chloroform extracts from CS significantly inhibited cell death and ROS generation in SK-N-SH cells induced by oxidative stress. EA extract from CS (CS-EA) showed the highest DPPH radical-scavenging activity, intracellular ROS-scavenging activity, and neuroprotective effects. CS-EA attenuated apoptosis signal-regulating p38 activation by inhibiting phosphorylation. The findings suggest that CS-EA protects neuronal cells through antioxidant activity and inhibition of phosphorylation of p38 in brain neural cells.

      • SCOPUSKCI등재

        고로쇠나무 및 당단풍나무 수액의 성분조성

        정미자(Mi-Ja Chung),김윤숙(Yoon-Sook Kim),이일숙(Il-Sook Lee),조종수(Jong-Soo Jo),성낙주(Nak-Ju Sung) 한국식품영양과학회 1995 한국식품영양과학회지 Vol.24 No.6

        수액은 예 부터 오랜 기간 음용되어 왔으나 이들에 대한 기본적인 성분에 대해서는 아직까지 불분명한 실정이다. 본 실험에서는 가장 많이 음용되고 있는 고로쇠나무 및 당단풍나무의 수액을 산청, 구례, 함양에서 채취하여 식품학적인 기초자료를 얻고죠 수액 중 무기물, 유리당, 아미노산 및 핵산관련 물질 등을 분석하였다. 고로쇠나무 및 당단풍나무의 수액 중 고형분은 1.1~3.3%, 조단백질은 0.03~0.12%, 회분은 0.02~0.05%, pH는 6.3~6.5 범위였다. 수액 중 핵산관련 물질은 CMP, UMP, IMP, GMP, AMP 및 hypoxanthine이 검출되었다. 고로쇠와 당단풍나무 모두 주된 유리당은 sucrose였고, 그외 fructose 및 glucose가 미량 검출되었다. Sucrose는 함양산 고로쇠나무 및 당단풍나무의 수액에서 그 함량이 많이 다른 지역산에 비해 각각 3.7배 및 2.2배나 높게 정량되었다. 수액 중 무기물은 총 7종이 검출되었으며, 이들의 함량은 수액의 종류에 관계없이 칼슘 및 칼륨이 월등히 많았고, 다음으로 마그네슘 및 나트륨의 순이였다. 함량이 특히 많은 칼슘은 당단풍나무 수액(21.2~32.4㎎/L)에 비해 고로쇠나무의 수액(99.0~153.3㎎/L)에서 월등히 높게 검출되었다. 수액 중 구성아미노산은 고로쇠 수액에서는 18종, 당단풍나무의 수액에서는 15종이 검출되었고, 총 아미노산의 함량은 0.7~29.3㎎/% 범위였는데, 당단풍나무의 수액 보다 고로쇠나무의 수액에서 종류도 많고 함량도 많았다. 고로쇠나무 수액 중 함량이 높은 아미노산은 taurine, serine, glutamic acid 및 aspartic acid의 순이었고, 특히 taurine이 다른 아미노산에 비해 월등히 높았다. 당단풍나무의 수액 역시 taurine의 함량이 가장 많았고 다른 아미노산은 0.5㎎% 이하로 정량되었다. Even though the saps have been consumed as beverage in Korea for a very long period of time, a little research has been conducted on the chemical composition. We determined mineral, free sugar, composition amino acids and nucleotides in the sap of Gorosoe (Acer mono Max.) and Sugar Maple (Pseudo-sieboldianum Kom.) collected from Sancheong, Kurye and Hamyang. The contents of solid, crude protein and ash were 1.1~3.3%, 0.03~0.12% and 0.02~0.05% in the sap of Gorosoe and Sugar Maple, respectively. The detectable nucleotides were CMP, UMP, IMP, GMP, AMP and hypoxanthine. Free sugar that we determined in the sap of Gorosoe and Sugar Maple were sucrose, fructose and glucose, but maltose was not detected. The chief component of saccharides in the sap was sugar and ranged from 7.1 to 36.6g/L. Especially, the sucrose contents in the sap of Gorosoe and Sugar Maple from Hamyang were higher 3.7 and 2.2 times than those from the other samples. The prominent minerals in the sap were calcium and potassium. The calcium concentration was ranged from 99.0~153.3㎎/L in the sap of Gorosoe and was ranged from 21.2~32.4㎎/L in that of sugar maple. The sap of Gorosoe and Sugar Maple were composed of 18 and 15 kinds of amino acid respectively, and the total contents of amino acid were in the range of 0.7~29.3㎎%. The major amino acids in the sap of Gorosoe were taurine, serine, glutamic acid and aspartic acid in decreasing order. Taurine contents in the sap of Gorosoe and Sugar Maple was found to be the dominant amino acid.

      • KCI등재

        잔대 추출물과 이들 분획물들의 항산화 및 뇌신경세포 보호 효과

        정미자(Mi Ja Chung),이상현(Sanghyun Lee),박용일(Yong Il Park),권기한(Ki Han Kwon) 한국식품영양과학회 2016 한국식품영양과학회지 Vol.45 No.11

        잔대의 70% 에탄올 추출물은 강한 항산화 효과 및 산화적 스트레스 조건에서 뇌신경세포 사멸 억제 효과가 있었다. 6개의 분획물 중에 잔대 추출물의 클로로포름 분획물(ATCH)은 높은 DPPH 라디칼 소거작용 및 세포 내 활성산소종(ROS) 소거작용을 가지고 있었고 H₂O₂에 대항하여 뇌신경세포(SK-N-SH) 보호 효과가 가장 뛰어났다. 활성이 가장 우수한 클로로포름 분획물을 대상으로 주요 물질을 순수분리한 후 ¹H-NMR, <SUP>13</SUP>C-NMR 그리고 EI mass spectra를 이용하여 화학구조를 분석한 결과 phytosterols(β-sitosterol과 daucosterol)이라는 것을 알 수 있었다. β-Sitosterol과 daucosterol 역시 산화적 스트레스에 대항하여 SK-NSH세포를 보호하는 작용이 있었다. AT-CH 그리고 이것으로부터 분리된 화합물은 p38 경로를 저해하였다. 이들 결과는 AT-CH는 p38 경로를 저해하고 세포 내 ROS 소거작용에 의해 산화적 스트레스로부터 뇌신경세포 보호 효과를 가질 것이라 제안하였다. The 70% ethanol extract from Adenophora triphylla showed a strong antioxidant effect and reduced cytotoxicity of H₂O₂ in SK-N-SH cells. The chloroform fraction from A. triphylla extract (AT-CH) among the six fractions showed strong DPPH radical and intracellular reactive oxygen species (ROS) scavenger effects and the highest protective effect against H₂O₂-induced SK-N-SH cell death. Bioactivity compounds were purified from AT-CH, and the chemical structures of the compounds were determined as β-sitosterol and daucosterol on the basis of ¹H-NMR, <SUP>13</SUP>C-NMR, and EI mass spectra. β-Sitosterol and daucosterol also had protective effects against oxidative stress in SK-N-SH cells. Phospho-p38 MAPK levels were elevated by H₂O₂ but were inhibited by treatment with AT-CH and phytosterols (β-sitosterol and daucosterol) isolated from AT-CH. These results suggest that AT-CH has brain neuroprotective effects against oxidative stress (H₂O₂) by inhibiting activation of p38 pathways and scavenging intracellular ROS.

      • KCI등재

        케일로부터 N - Nitrosamine 생성을 억제시키는 유효성분의 검색

        정미자(Mi-Ja Chung),이수정(Soo-Jung Lee),최선영(Sun-Young Choi),성낙주(Nak-Ju Sung) 한국식품영양과학회 2003 한국식품영양과학회지 Vol.32 No.2

        질산염과 함께 아민이 풍부한 식이에 케일 쥬스(0, 5, 10, 15 및 30 mL)를 첨가하여 인공소화시킬 때 NDMA 생성에 미치는 영향을 시험한 결과, 모든 시험구에서 상기의 시료의 첨가량을 증가시킬수록 NDMA 생성 억제효과가 높았다. 케일의 Sep-Pak C_(18)에 의해 분리된 메탄올 가용성 획분을 perp-LC로 분획하였고, 각각 분획물을 분취하여 아질산염 소거작용과 NDMA 생성억제 효과를 실험한 결과 K1~K7 획분 중 K1, K2에서 아질산염 소거작용이 높았으며, 역시 NDMA 생성억제 효과도 71.0, 65.5%로 매우 높게 나타났다. 높은 억제 작용을 나타내는 K1, K2를 K1a~K2c로 subfraction하여 NDMA 생성억제 효과를 실험한 결과 K2c 분획물 1 mL 첨가를 제외하고는 모든 시료가 50%이상의 억제효과를 나타내었다. NDMA 생성억제 효과를 나타내는 K2a 단일 peak를 분리하여 정제한 후 ¹IR, MS, ¹H-NMR, ¹³C-NMR 과 DEPT spectrum을 이용하여 구조를 검색한 결과. K2a는 α-D-glucose 배당체를 가진 방향족 벤젠 화합물로 추정되었다. An amine rich diet with nitrate was incubated in simulated saliva, gastric juice, kale juice, and its ascorbate and methanol soluble portions (5, 10, 15 and 30 mL) for 1 hr at 37℃ and N-nitrosodimethylamine (NDMA) was detected in the digestion sample. Kale juice and its ascorbate and methanol soluble portions at 30 mL inhibited NDMA formation by 60.1±4.4%, 49.3±1.2% and 50.1±2.0%, respectively. The methanol soluble portion was further fractionated by preparative-LC (prep-LC). Nitrite-scavenging effects of 7 methanol soluble portion (K1, K2, K3, K4, K5, K6 and K7) in kale juice were 2.0~56.2%. Among seven fractions, K3, K4, K5 and K7 exhibited weakly on nitrite scavenging effect. Fraction K1 and K2 inhibited NDMA formation by 71.0 and 65.5%, respectively. Fraction K1 and K2 was further separated by prep-LC into 6 subfractions (K1a, K1b, K1c, K2a, K2b and K2c). Those subfractions inhibited NDMA formation by 40.9~80.4%. The K2a subfraction was screened by MS, IR, ¹H-NMR, ¹³C-NMR and DEPT spectrum.

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