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        콩단백질의 대장균 발현과 정제

        오문헌,정재홍,노영희,이희봉 한국식품영양학회 1996 韓國食品營養學會誌 Vol.9 No.4

        콩단백질은 글리시닌과 β-콘글리시닌을 주요 성분으로 한다. 영양성 및 가공 특성을 개선하기 위하여 유전자공학적인 방법을 시도하였다. 즉 β-콘글리시닌의 β-서브유니트롤 유전자 클로닝하고 대장균에서 발현시켰다. 발현벡타는 pET 21d이며 플라스미드를 구축하여 E.coli BL21(DE3)에 형질전화시켰다. 발현된 단백질은 균체 전체 단백질의 20%이며 가용화 상태로 축적되었다. 축적 발현단백질은 천연의 β-콘글리시닌과 동일항 트러머로 확인되었다. 정제는 호아산암모늄 20∼40%분별침전, Q-Sepharose 이온교환크로마토그라피, Butyltoyoperal 소수성 컬럼크로마토그라피로 하였다. 이것은 콩단백질의 특성을 규명하는데 필요한 대장균 대량 발현계를 확입하고 발현단백질의 정제방법을 확립한 결과이다. One of the major objectives of the food industry is the enrichment of the functional properties and nutritional value of soybean protein. To attain this goal, an expression system of cDNA encoding native and protein-engineered soybean proteins in a microorganism must be developed and the function then ability of self-assembly and the functionalities of the expressed proteins should be evaluated before the modified genes are transfered to soybean plants. The pro-β-conglycinin synthesized in E. coli BL21(DE3)comprised approximately 20% of the total bacterial proteins and the expressed protein are formed soluble and trimer such as native protein in E. coli cells. The highly expressed protein was purified to homogeneity by salt precipitation with 20∼40% Ammonium sulfate ion-exchange chromatography with Q-Sepharose and hydrophobic column chramatography with Butyltoyoperal. Therefore, we concluded that the high-level expression system of β-conglucinin cDNA was established and a relatively simple and rapid method for purifying pro-β-conglicinin was also developed.

      • KCI등재

        다카무라 고타로(高村光太郎)의 『도테(道程)』에 나타난 사계(四季)의 의미

        문헌정(Moon Heon Jeong,文憲正) 일본어문학회 2015 일본어문학 Vol.70 No.-

        高村光太郎(1883~1956)は、詩人であり彫刻家でもある。彼は詩人とし ての自分を絶えず否定したにも拘わらず、生涯にわたって総七〇〇編以上の多くの作品を残している。本格的に詩作を始めたことはヨーロッパから帰ってきた翌年明治43年の後半期で、当時の日本には西洋の近代の空気を呼吸した詩人や彫刻家などの芸術家達が次々と帰国し始め、西洋の新しい芸術が輸入され、紹介されていた。特に、『ロダンの言葉』を翻訳した当時の回想からは彼の芸術原理への自覚がみられる。光太郎が彫刻から排除しよとした詩の要素は、作品に多く用いられている<四季>の詩語が持つ時間の普遍性によって歌われている。また、このように表出される詩観は彼の彫刻観、自然観などの芸術理念の表象でもある。従って、本論文では、光太郎の処女詩集『道程』の<四季>に注目し、彫刻世界を含んでいる<四季>の詩の普遍的な芸術原理としてのメカニズムを探ってみた。これによって、光太郎の詩集『道程』の意味はもちろん、詩と詩人の内実を明らかにすることを目的とする。

      • KCI등재

        콩 β-Conglycinin의 대장균 발현과 정제

        오문헌,노영희 한국식품영양학회 1999 韓國食品營養學會誌 Vol.12 No.2

        콩 단백질은 글리시닌과 β-콘글리시닌을 주요 성분으로 하며, 콩 β-콘글리시닌이 나타내는 알레르기 원인과 콜레스테롤 저하 작용을 밝히고저 유전자 공학적인 방법을 시도하였다. 즉 β-콘글리시닌의 α-subunit를 유전자 클로닝하고 대장균에서의 발현시스템을 구축하였다. 발현벡터는 pET21d이며 플라스미드를 구축하여 E. coli BL21(DE3)에 형질전환시켰고 발현된 단백질은 균체전체 단백질의 15%이며 90%이상이 가용화 상태로 축적되었다. 축적된 발현 단백질은 천연의 β-콘글리시닌과 동일한 트리머로 확인되었다. 발현 단백질은 20∼40% 황산암모늄 분별침전과 Q-Sepharose 이온교환크로마토그래피, Butyltoyopearl 소수성 컬럼크로마토그래피로 정제하였다. 이것은 콩단백질의 기능특성을 규명하는데 필요한 대장균 대량 발현계를 확립하고 발현 단백질의 정제방법을 확립한 결과이다. Soybean protein consists of two major components β-conglycinin and glycinin, which together constitute 70% of the total seed storage protein at maturity. β-Conglycinin is a trimeric glycoprotein and formed by the assembly of various combinations of three subunits, α,α´and β, which have molecular weights of 69,000, 72,000 and 42,000, respectively. Recently, β-conglycinin was identified as powerful LDL lipoprotein receptor activation, hypercholesterolemia and major allergenic proteins. To investigate these reasons, we constructed an expression system of cDNA encoding α-subunit of β-conglycinin in Escherichia coli and purified the expressed protein. The pro-β-conglycinin sythesized in Escherichia coli BL 21 (DE3) comprised approximately 15% of the total bacterial proteins and the expressed protein are formed soluble and trimer such as native protein in Escherichia coli cells. The highly expressed protein was purified to homogeneity by salt precipitation with 20∼40% ammonium sulfate, ion-exchange chromatography with Q-sepharose and hydrophobic column chromatography with Butyltoyopearl.

      • KCI등재후보
      • KCI등재후보
      • KCI등재

        다카무라 고타로(高村光太郎)의『지에코쇼(智恵子抄)』 연구 ―사계(四季)의 조형의지를 중심으로―

        문헌 단국대학교 일본연구소 2019 일본학연구 Vol.58 No.-

        For Kotaro, poetry is a poetic expression of a person’s ‘life’ and ‘energy’, nature and symbolic embodied nature. Although ‘literature’ is only a nature of poetry, it has been called ‘symbolic’ or ‘spirit’ or ‘life’ for its important meaning, and identified it as a basic concept that forms sculpture and literature. His rectitude is shaped by four seasons. In “Chiekosyou” we are asked to examine how Chieko is drawn by the four seasons. It is composed of different genres of poetry and Dana and prose, and depicts the human spirit by common sanctions called ‘Snowpants’, a symbol of Japanese tradition. Specifically, two contrasting types of traditional literature - lyric, epic and dramatic - personal lyric and impersonal plays unfold along with spring, summer and fall, which symbolize Japanese tradition. A common characteristic in the writing is the sense of language as a ‘living language’ by a sense of shape. At the end, the margin of the poem, which appears as a literary space, forms a white mold with a winter symbolizing the modern times of the West, connects the text of the unit price and prose with the cover, and converts it into a literary world that represents the distance between physical and psychological time, forming a newly unified space sculpture. “Chiekosyou” is a collection of beautiful art love poems that are made up of life, nature, and beauty by the four seasons. 고타로에게 시(詩)란 인간의 ‘생(生)’과 ‘기(氣)’ 같은 시정신(시혼)을 표현하는 것으로, 자연 및 자연성을 내재한 것이 시적 대상이 된다. ‘문학성’은 시의 속성에 불과하지만 중요한 의미에 대해서는 ‘시혼’ 또는 ‘시정신’, ‘생(명)’이라 칭하고 이를 조각과 문학을 형성하는 기초개념으로 파악했다. 그의 시정신은 사계절로 형성되어 있다. 『지에코쇼』에서는 사계에 의해 지에코가 어떻게 그려져 있는지 고찰해 보도록 한다. 여기서는 시와 단카와 산문이라는 각각 다른 장르로 구성하였고, 일본 전통의 상징물인 ‘소나무’라는 공통 제재에 의해 인간의 정념을 그려내고 있다. 구체적으로 내용에서는 서정과 서사와 극이라는 전통 문학, 즉 개인적인 서정과 비인격적인 극이라는 대조적인 두 종류가 일본 전통을 상징하는 봄, 여름, 가을과 함께 전개된다. 이때 글에 나타나는 공통된 특색은 조형감각에 의해 ‘살아 있는 언어’로서의 언어감각이다. 마지막에 문학공간으로 나타나는 시의 여백이 서양 근대를 상징하는 겨울로 하얀 주형틀을 형성해 단카와 산문의 본문을 표지와 연결 지으며 물리적이고 심리적인 시간상의 거리를 나타내는 문학세계로 전환되어 새로이 통일된 공간 조형물을 형성한다. 『지에코쇼』는 사계에 의해 생명과 자연과 미(美)를 조형한 아름다운 예술사랑 시집이라 할 수 있다.

      • 밀 β-Amylase의 정제 및 특성

        김준평,오문헌 中央大學校 遺傳工學硏究所 1991 遺傳工學硏究論集 Vol.4 No.1

        β-Amylase (α-1, 4-D-glucan maltohydrolase, EC 3.2.1.2) was isolated and purified from wheat(Triticum aestivum var. Gerumil) produced in Korea. The homogeneity of β-amylase was examined by polyacrylamide disc gel electrophoresis(PAGE), Wheat β-amylase was purified by using the methods of ammonium sulfate fractionation, ion-exchange chromatography on DEAE-cellulose, calcium phosphate gel absorption, Sephadex G-100 gel filtration, hydroxyapatite column chromatography. The enzyme was futher fractionated into three fractions A, B and C by hydroxyapatite column chromatography. The two major fractions A and C showed 37.9 and 33.1 times higher activity than crude enzyme, respectively, and the specific activity was found to be 246.1 and 215.2 unit/mg, respectively. The molecular weight of β-amylase was determined by SDS electrophoresis and it was found to be 54,500 daltons. The isoelectric points of fractions A and C were 4.96 and 4.61, respectively. The N-terminal amino acids of the fractions A and C determined by DABITC's method were glycine. The fractions A and C of wheat β-amylase were estimated to have 512 and 516 amino acid residues/mole, respectively. The activity of wheat β-amylase was decreased by ??, ??, ?? and ?? ions, whereas it was increased by ?? and ?? ions. Km values of the fractions A and C of wheat β-amylase for soluble starch were 0.19 and 0.56%, respectively, indicating high affinity between fraction A and substrate. Optimum temperature and pH for the fractions A and C of wheat β-amylase were 50℃ and 6.0. and both the fractions were stable at 0-60℃ anc at pH 4.5-7.5.

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