Sema6A 표적작용을 통한 microRNA-203의 구강암세포 성장 억제 = Suppression of oral carcinoma oncogenic activity by microRNA-203 via downregulation of Sema6A

국문 초록 (Abstract)

MicroRNA(miRNA)는 21-25개의 염기서열로 구성된 noncoding RNA 분자로, 표적 유전자의 3’-UTR 부위에 상보적인 염기서열을 가지고 그 표적유전자의 단백합성을 억제시키거나 촉진시킨다. Oncogenic miRNA는 종양과 관련된 miRNA로 최근 여러 종양에서 oncogenic miRNA 발현 분석을 통해 다양한 종양의 조기진단, 예후측정에 응용가능성을 시사하고 있다. 본 연구에서는 구강암세포에서 miRNA들의 발현을 비교․분석하여 구강암 특이 miRNA를 확립하고, miRNA-203 제어에 의한 종양유전자 Sema6A 표적작용을 통한 구강암세포 성장억제의 분자적 기전을 밝히고자 하였다.
구강암세포에서 miRNA-203 제어에 의한 구강암세포 성장억제 작용기전을 규명하기 위해 사람 구강암세포주 YD-38에 miRNA-203을 처리한 후, miRNA microarray 분석, PCR 분석, 세포증식 분석, 세포사멸 분석, immunoblotting 및 luciferase activity 분석 등을 시행하여 다음과 같은 결과를 얻었다.

1. 정상 사람 구강각화세포 NHOK에 비해 YD-38 구강암세포에서 miRNA-203의 발현이 현저히 감소하였다.
2. YD-38 세포에서 miRNA-203은 세포의 성장을 뚜렷이 억제시켰다.
3. YD-38 세포에서 miRNA-203은 세포 apoptosis를 유도하였다.
4. YD-38 세포에서 miRNA-203은 종양유전자 Sema6A의 발현을 억제하였다.
5. YD-38 세포에서 miRNA-203은 종양유전자 Sema6A를 억제함으로써 luciferase 활성을 감소시켰다.

본 연구의 결과로서 사람 구강암세포주 YD-38에서 miRNA-203은 종양억제 miRNA로써 기능을 하여 종양유전자 Sema6A의 발현을 감소시켜 구강암세포 증식억제 및 세포 apoptosis를 유도하는 것으로 사료된다.

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중심어: miRNA-203, 종양유전자, 구강암, Sema6A, 세포사멸

목차 (Table of Contents)

• TABLE OF CONTENT -------------------------------------------- ⅰ
• LIST OF FIGURES ------------------------------------------------ ⅲ
• ABSTRACT -------------------------------------------------------- ⅳ
• I. INTRODUCTION ------------------------------------------------- 1
• II. MATERIALS AND METHODS --------------------------------- 5
• 1. Materials --------------------------------------------------------- 5
• 2. Cell lines and cell cultures ----------------------------------------- 5
• 3. Affymetrix miRNA array and data pre-processing ------------------- 5
• 4. Identification of miR-203 target genes -------------------------------- 6
• 5. Plasmid construction ------------------------------------------------- 7
• 6. Transfection and cell viability assay ---------------------------------- 8
• 7. Evaluation and quantification of apoptosis ----------------------------- 8
• 8. Quantitative real-time PCR (qRT-PCR) and
• quantitative PCR (qPCR) -------------------------------------------- 9
• 9. Immunoblotting --------------------------------------------------- 10
• 10. Luciferase assays ------------------------------------------------- 11
• 11. Statistical analysis ------------------------------------------------ 12
• Ⅲ. RESULTS --------------------------------------------------- 13
• 1. miR-203 expression was significantly downregulated
• in human YD-38 oral cancer cells --------------------------------- 13
• 2. Over-expressed miR-203 inhibits cell proliferation and induces
• apoptosis of YD-38 cells ----------------------------------------- 13
• 3. Over-expressed miR-203 regulates the expression of Sema6A
• in YD-38 cells -------------------------------------------------- 15
• 4. Sema6A is directly targeted by miR-203 --------------------------- 17
• Ⅳ. DISCUSSION ---------------------------------------------- 18
• Ⅴ. REFERENCES ----------------------------------------------- 23
• Ⅵ. FIGURE LEGENDS ------------------------------------------ 31
• Ⅶ. FIGURES ---------------------------------------------------- 34