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Thermus Filiformis로부터 DNApolymerase 遺傳子의 Cloning 및 監基序列 決定
정승은 成均館大學校 大學院 學生會 1996 首善論集 Vol.21 No.-
DNA polymerase는 single-stranded DNA를 주형(template)으로 하여 5´ → 3´ 방향으로 DNA strand를 합성하는 효소로서 1957년 Arthur Komberg에 의해 E. coli에서 최초로 발견되었다. 그 후 Taq DNA polⅠ의 분리에 의해 PCR(polymerase chain reaction) 방법이 널리 이용되게 되어 내열성 DNA polymerase의 수요가 급증하였다. 본 연구에서는 1987년 New Zealand에서 분리된 filamentous 형태의 Thermus filiformis로부터 DNA polymerase 유전자를 cloning하기 위하여southem hytridization 방법을 수행하였다. Probe DNA는 Taq pol Ⅰ 유전자를 포함하고 있는 plasmid pKTPOL10으로부터 EcoR Ⅰ 및 BamHⅠ 절단 단편인 probe A와 HindⅢ 절단 단편인 probe B를 이용하였다. 그 결과 probe A와 probe B에 hybridization하는 BamHⅠ 절단 단편인 4.8kb와 2.2kb의 genomic DNA 단편을 모두 E. coli에 각각 cloning하고 이를 각각 pTFPL 및 pTFPS라 명명하였다. 이 두 clonig된 단편의 제한효소 지도를 작성하고 이를 바탕으로subcloning하여 dideoxy방법에 의한 DNA 염기서열을 결정하였다. 2,502 bp의 TF DNA polymerase 유전자로부터 추정한 아미노산 서열은 834 amino acid residues(MW : 93,754Da)로 Taq DNA polymerase와 비교하여, 아미노산 수준에서 78/1%, DNA 수준에서 79.1%의 상동성을 보였다. 그리고 polymerase domain의 conserved motifs를 모두 갖고 있으며, 이들 motifs의 양상으로 보아 TF DNA pol은 Family A의 E. coli DNApol 1-like procaryotic DNA polymerase에 속한다.