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Real-time PCR을 이용한 가축생균제용 유산균 정량분석
Yeon Jae Choi(최연재),Sun Ho Kim(김선호),Min Jeong Gu(구민정),Han Na Choe(최한나),Dong Un Kim(김동운),Sang Bum Cho(조상범),Su Ki Kim(김수기),Che Ok Jeon(전체옥),Gui Seok Bae(배귀석),Sang Seok Lee(이상석) 한국생명과학회 2010 생명과학회지 Vol.20 No.12
본 연구는 가축생균제용 유산균을 Real-time PCR정량분석법을 이용하여 분석하였다. SYBR Green1 방법과 Probe 방법을 이용하여 표준곡선을 제작한 결과, SYBR Green1 방법에서는 Slope 값이 -3.346이었고, Y절편은 33.18, R² 값은 0.993으로 나타났으며, Probe 방법에서는 Slope값이 -3.321이었고, Y절편은 39.10, R² 값은 0.995로 나타나, 이를 이용한 표준곡선 제작이 가능함을 알 수 있었다. SYBR Green1 방법을 이용한 생균제의 Lactobacilli 정성ㆍ정량 분석결과 Real-time PCR값은 4.46~6.56 log copies로 나타났고, 생균수 측정 결과 값은 5.63~7.59 log CFU/g로 나타났으며, Probe 방법을 이용한 생균제의 Lactobacilli 정성ㆍ정량 분석결과에서는 Real-time PCR 값은 5.51~7.00 log copies로 나타났으며, 생균수 측정 결과 값은 5.63~7.59 log CFU/g로 나타났다. 본 연구에서 실시한 RT PCR법은 3~4일이 소요되는 기존의 배지법과 비교하여 24시간 이내에 신속하게 검출이 가능하다고 여겨지며, 또한 RT PCR을 이용한 분석방법에서도 dye 사용과 primer 사용에 따라 결과값이 차이가 나타났음을 확인할 수 있었으며, Probe 방법을 이용하여 실험 한 결과가 민감한 결과를 나타내었음을 확인 할 수 있었다. This study was conducted using quantitative real-time PCR using Lactobacilli as probiotics. Quantitative real-time PCR (RT PCR) was conducted via a method involving SYBR Green 1 and a probe. Plasmid DNA was cloned using the 16S-23S rRNA intergenic species region. Gene clones were diluted from 10² to 10¹?. Standard curves were constructed via Ct values obtained from the results of Real-time PCR via the aforementioned SYBR Green 1 and probe method. Plasmid DNA was also cloned using the 16S-23S rRNA intergenic species region and the gene clones were diluted from 10² to 10¹? copy numbers via the probe method. Using RT PCR, a standard curve of plasmid DNA copy numbers was also determined. The slope value for the Y-axis intercept and R² value were measured as -3.346, 33.18, and 0.993, respectively, via the first method. For the second method, the slope value for the Y-axis intercept and R² were -3.321, 31.10 and 0.995, respectively. The PCR inhibitor could not express the detection curve at a copy number over 10¹? via either method, owing to high DNA density. The DNA extract from probiotics was diluted without pre-culturing, and 16 products were amplified via both methods. The Ct value was 11.06~18.12 in the first method and 16.74~22.11 in the second method. Measured probiotics and log copy values were largely similar among the methods used. It was concluded that both methods are effective for analysis, but further research will be required to verify the optimal method.
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Fitz-High-Curtis Syndrome으로 진단복강경수술을 시행한 젊은 가임기 여성에서의 나팔관 소통성 분석
배지선 ( Ji Seon Bae ),최연재 ( Yeon Jae Choe ),정민형 ( Min Hyung Jung ) 대한산부인과학회 2008 Obstetrics & Gynecology Science Vol.51 No.2
목적: Fitz-High-Curtis Syndrome (FHCS)으로 조기 진단 복강경 수술을 시행한 젊은 가임기 여성에서 가임력에 중요한 난관의 소통성을 비교 및 분석하고자 하였다. 연구방법: 2005년 3월부터 2007년 4월까지 본원 산부인과에서 급성 골반염 의증으로 진단적 복강경수술을 받은 젊은 여성들의 임상병리학적 소견을 후향적으로 조사하여 이 중 진단복강경수술 중 난관절제술 등을 시행하지 않아 양측 난관을 보존한 19-29세의 환자를 본 연구에 포함하였다. 모든 환자는 수술 중 난관 소통성 검사를 위해 색소 검사 (chromopertubation test)를 시행하였고 수술 후 3개월 후에 자궁난관조영술을 시행하였다. 결과: 26명의 환자 중에서 FHCS로 진단된 환자 8명 중 6명이 수술 전 복부 CT를 촬영했으나 수술 전 진단된 환자는 2명뿐이었으며 나머지 4명은 진단복강경 수술소견을 통해 진단되었다. FHCS군과 non-FHCS군 간의 평균연령, 평균 재원기간, 분만력, 인공임신중절의 과거력, 입원 당시 검사한 chlamydia 감염 및 gonococci 감염의 빈도는 모두 통계학적으로 차이가 없었다. 진단복강경수술 중 시행한 chromopertubation test에서는 난관 폐색의 소견의 빈도는 통계학적으로 차이를 보이지는 않았으나 외래에서 3개월 후 시행한 자궁난관조영술 검사에서는 통계학적으로 유용한 차이를 보였다. 결론: Non-FHCS군보다 FHCS군에서 난관폐색의 빈도가 높으며 난관폐색의 진단에 있어 진단복강경수술 중 시행한 chromopertubation test의 신뢰도는 낮았다. 따라서 FHCS 환자에 있어 향후 가임력 평가에는 자궁난관조영술이 더 유용한 방법임을 알 수 있었다. Objective: To analyze the tubal patency in the young-aged women underwent diagnostic laparoscopy with Fitz-High-Curtis Syndrome (FHCS). Methods: Clinicopathologic results of young-aged women who underwent diagnostic laparoscopy with pelvic inflammatory disease from March 2005 through April 2007 were reviewed. Twenty six patients aged 19-29 years old and preserved their both tubes after diagnostic laparoscopy were included in this study. All were underwent chromopertubation test (CPT) during laparoscopy and postoperative hysterosalpingography (HSG) 3 months later. Results: Of 26 patients, eight patients were diagnosed with FHCS and the others were not. There was no significant difference in mean age, mean hospitalization days, and frequency in past-history of parturition, abortion, chlamydia and gonococci infection between patients with FHCS and with non-FHCS (P>0.05). There was no significant difference in frequency of tubal obstruction in laparoscopic CPT (P> 0.05) but not in postoperative outpatient HSG (P<0.05). Conclusion: The tubal obstruction may be more frequent in FHCS than non-FHCS and the reliability of laparoscopic CPT for diagnosing the tubal obstruction is supposed to be low. Therefore, as for FHCS patients, HSG should be executed to investigate tubal factor which is helpful to forecast the fertility.
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