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Experion(TM) assay system을 이용한 난소암 혈청 종양표지물의 발굴
민현진 ( Hyun Jin Min ),배수미 ( Su Mi Bae ),곽선영 ( Sun Yong Kwak ),양민아 ( Min Ah Yang ),이해남 ( Hae Nam Lee ),김용욱 ( Yong Wook Kim ),신종철 ( Jong Chul Shin ),김정식 ( Jung Sick Kim ),남계현 ( Kye Hyun Nam ),김용완 ( Yong 대한산부인과학회 2007 Obstetrics & Gynecology Science Vol.50 No.5
목적: 난소암은 세계적으로 여성에게서의 발생률과 사망률이 높은 악성 종양이다. 불행히도, 아직 임상적인 예후나 특징이 두드러지게 드러나지 않는다. 사실, 높은 사망률은 임상적인 조기진단의 어려움에 있다. 본 연구에서 LabChip 테크놀로지 시스템과 자동화 전기영동 시스템인 Experion(TM)으로 난소암과 관련한 단백질 발현을 위한 연구를 하였다. 재료 및 방법: 분석은 14명의 건강한 여성의 혈청과 28개의 난소암환자의 혈청을 사용하였다. 각각의 혈청은 가톨릭의과대학 임상연구위원회 (IRBC)의 승인을 받았고 강남성모병원으로부터 제공받았다. Experion(TM) (Bio-Rad, Hercules, CA)을 사용하여 분석하였다. 그 후 SDS-PAGE 전기영동하여 Coomassie stain으로 확인한 후, MALDI-TOF-MS로 단백질 확인하였다. 결과: 난소암 관련된 단백질의 분석은 Experion(TM)의 고 처리 검색 (High throughput screening)으로 단백질 정량 값을 볼 수 있었다. 난소암에 있어 높은 민감도와 특이성으로 선별함으로써 Experion(TM) 정량방법이 입증되었다. Ceruloplasmin (115.0 kDa), hemoglobin β chain (15.9 kDa), hemoglobin δ chain (10.7 kDa), serum amyloid A4 (14.8 kDa) 그리고 amyloid relate serum protein SAA (11.7 kDa)이 난소암 환자 혈청으로부터 발견되었다. 난소암 환자와 건강한 여성 사이에서 이들 5개의 단백질의 발현이 차이를 보였다. Experion(TM) assay system은 높은 수준의 정확도를 유지했고, 처리능을 증가시켜 난소암 관련 단백질의 분석을 위해 제공되었다. 결론: 고처리 Experion(TM) assay system으로 난소암에서 새로운 단백질을 확인할 수 있었다. 또한, Experion(TM) assay system은 임상적인 적용을 위한 확실한 데이터베이스로 난소암의 진단을 위해 쉽게 적용될 수 있을 것이다. 본 연구는 Experion(TM) assay system을 이용한 난소암의 잠재적인 혈청 종양표지물의 확인을 위한 첫 번째 보고임에 의미가 있다. Objective: The discovery of new biomarkers for ovarian cancer is clearly necessary for the detection and monitoring of the disease. Experion(TM) automated electrophoresis system can be employed in the identification of differentially expressed proteins in cancer cells. The objective of this study was to discover potential diagnostic serological biomarkers for ovarian cancer. Methods: We performed protein expression difference analyses for 14 healthy women and 28 ovarian cancer patients with stage I, III and IV using Experion(TM) system. And then we checked the protein expression as silver staining after loading at 8~16% gradient gel for comparison with Experion(TM) gel image. The candidate biomarkers were purified and determined using MALDI-TOF mass spectrometer. Results: The distinctive polypeptide peaks were detected at 115.40, 15.96, 14.8, 11.66, and 10.69 kDa and these five peaks were identified as ceruloplasmin, hemoglobin β chain, hemoglobin δ chain, serum amyloid A4, and amyloid related serum protein SAA, respectively. These proteins were significantly different between the sera of normal healthy women and ovarian cancer patients. Conclusions: Five proteins were found to be significantly different between the sera of normal healthy women and ovarian cancer patients. In addition, Experion(TM) assay system can provide high performance for analysis of ovarian cancer-related proteins by increasing the throughput while maintaining a high level of accuracy.
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