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김경운 한국동물생명공학회(구 한국동물번식학회) 2013 Reproductive & Developmental Biology(Supplement) Vol.37 No.2s
과학기술의 빠른 발전으로 생명공학이 이루어낸 가장 큰 성공 중의 하나가 인체치료용으로 사용할 수 있는 재조합단백질(바이오신약)을 생산할 수 있게 되었다는 것이고, 이러한 바이오신약분야는 바이오산업의 핵심분야로서 세계시장의 선점을 위한 기술 강대국들의 경쟁력이 가장 치열한 분야이다. 일반적으로 재조합체 단백질 생산에는 적합한 합성 기작을 가지고 있는 박테리아 및 세포들을 이용한 배양으로 생산하고 있으나, 이러한 목적에 잘 맞는 또 하나의 선택이 형질전환동물을 이용한 생체반응기(Bioreactor)이고, 산업적으로 이용할 수 있는 양의 재조합단백질을 세포배양이 아닌 유즙, 계란, 혈액, 오줌, 혈청 등 형질전환동물의 생체에서 생산하는 것이다. 이러한 연구개발의 첫 번째 목표는 형질전환기술을 이용하여 형질전환동물을 생산하는 것이며, 두 번째로는 개발된 형질전환동물 생체로부터 생산된 치료용 재조합단백질을 분리 정제하여 약리효능을 검증하고, 신약으로서의 유효성 평가를 하는 것이다. 지금까지 국내에서도 많은 연구자들이 이러한 목표를 향해서 형질전환동물들은 개발하였으나, 두번째 목표인 생산된 재조합체단백질을 분리 정제하는 기술이 부족하여 실용화에 걸림돌이 되고 있다. 본 연구팀도 유즙에서 재조합단백질을 생산하는 형질전환동물을 개발하였으며, 두 번째 연구목표를 달성하기 위해서 분만돼지 유즙을 채취하고 가공처리하는 유즙전처리공정을 개발하여 이를 통해 유즙에 들어있는 불순물들을 효과적으로 제거할 수 있는 기술을 구축하였고, 재조합체 분리정제단계에서는 초기 재조합체 회수율을 높이고자 친화성 결합체를 이용한 정제방법을 선택하였다. 또한, 고전적인 이온결합 및 소수성결합 정제방법등도 활용하여 재조합체를 분리정제를 시도하였으며, 앞으로는 정제산물에 대한 유효성평가를 통하여 형질전환동물이 생산한 재조합체 단백질에 대한 약리 약효성을 분석할 계획이다. 특히, 본 연구를 통하여 형질전환동물을 활용한 바이오신약개발에 대한 연구기반을 확립하고자 한다.
최창용,손동수,한만희,노규진,최상용,김영근,권응기,최순호,최연호,최성복,조영무,손삼규 사단법인 한국동물생명공학회 2004 한국동물생명공학회지 Vol.19 No.1
한국 재래산양 체내수정란 생산에 대한 발정동기화 및 과배란 유도방법과 회수된 수정란의 동결 융해 후 생존율을 조사하였다. 발정동기화를 위해 CIDR+FSH 및 CIDR+PMSG의 방법을 이용한 결과, 배란점 및 회수된 수정란의 수는 CIDR+FSH 처리구에서 16.3개 및 9.4개, CIDR+PMSG 처리구에서 16.4개 및 8.7개를 나타내어 두 처리구간에 유의적 차이는 인정되지 않았다. 회수된 수정란을 형태학적으로 평가한 결과 CIDR+FSH 처리구에서 Gade A, B, C 및 D는 75.8%, 15.2%, 4.5% 및 4.5%를 나타낸 반면 CIDR+PMSG 처리구에서는 52.5%, 16.4%, 16.4% 및 14.8%였으며, 이식 가능한 수정란 (Grade A, B) 수는 CIDR+FSH 처리구가 유의적(P<0.05)으로 높게 나타났다. 회수된 수정란의 완만 동결 융해 후 생존성은 CIDR+FSH 처리구에서 73.3%, CIDR+PMSG 처리구에서 63.3%이었으며, 두 군간의 유의적 차이는 인정되지 않았다. 따라서 본 결과는 한국 재래산양 체내수정란의 생산과 회수된 수정란의 보존을 위해서 CIDR+FSH로 발정동기화 시키는 것이 효과적이었다.
In Vitro Development of Primordial Germ Cells Nuclear Transfer Porcine Embryos
Byoung-Chul Yang,Jin-Hee An,Kyung-Won Kim,Hak-Jae Chung,Hee Kyung Jung,Hyun-Mi Kim,You-Mi Cho,Choon-Keun Park,Jin-Ki Park 한국동물생명공학회(구 한국동물번식학회) 2011 발생공학 국제심포지엄 및 학술대회 Vol.2011 No.1
Unstable Epigenetic reprogramming was DNA methylation, imprinting, RNA silencing, co-valent modifications of histones and remodelling by other chromatin-associated complexes. After fusion with an enucleated oocyte, a differentiated somatic cell can restructure its genetic program and acquire totipotent characteristics. However, these cases happen only with low frequency. primordial germ cells (PGC) was effectively remove of epigenetic modifications in the genetic totipotency which is necessary for the development. The present study was in vitro development of reconstruct PGC NT embryos compared with somatic cell NT embryos. The rate of cleavage did not differ between NT embryos from PGC and somatic cells (87.26 vs 91.36%). However, the rate of development to the blastocyst stage was significantly higher in PGC cell NT than somatic cell NT (31.03 vs 19.27%). PGC from a slightly younger stage of development have succeed to promote normal development of recipient eggs. This difference in results between germ cell and somatic cell nuclear transfers could only be a reflection of intimate differences in their reprograming. These results suggest that PGC NT embryos are significantly higher for the in vitro development. Furthermore, These study may represent an approach towards achieving better production of transgenic animal.
Effect of Magnetized Water on Cryopreservation in Bovine Spermatozoa
Gi-Beom Seo,Yong-Seung Lee,Kyung-Jin Lee,Han-Jun Yu,Hee-Tae Cheong,Boo-Keun Yang,Seung-Hwan Lee,Jin-Woo Lee,Choon-Keun Park 한국동물생명공학회(구 한국동물번식학회) 2011 발생공학 국제심포지엄 및 학술대회 Vol.2011 No.1
The purpose of this study was to improve the frozen-thawed sperm of Korean Native Cattle using magnetized water. The semen was collected by artificial vagina. Before cryopreservation, Triladyl was flowed through magnet [0, 2000, 4000 and 6000 Gauss (G)] for 5min. The semen was diluted to magnetized Triladyl with 20% egg-yolk for freezing. The diluted semen was placed in 0.5ml straws, and freezing process was exposed on ‒120℃ for 10min. Diluted sperm was stored into LN2. Analysis of frozen- thawed sperm was estimated of viability with SYBR14/PI stain, and membrane intact with hypoosmotic swelling test (HOST). The mitochondrial function analysis was conducted by staining with Rhodamin 123 by flow cytometry and was analyzed histogram. The intensity of acrosome damage was analyzed using FITC-PNA stain by flow cytometry. Analysis of rhodamin 123 and FITC-PNA stain were used mitochondria and acrosome membrane intact. As a results, sperm viability was significantly higher in 4000G (76.0±1.2%) group than other groups (p<0.05). However, HOST was significantly higher in 4000 (37.7±0.6%) and 6000G (35.0±1.1%) than 0 (30.3±0.9%) and 2000G (30.7±0.5%) (p<0.05). In addition, mitochondria membrane and acrosome damage were significantly lower in 6000G (1.40±0.08% and 26.7±2.9%) group than other groups (p<0.05). In conclusion we suggest that magnetized water could improve the ability of sperm on cryopreservation of korean native cattle. * This work was supported by Grant No. PJ 907008 from Rural development administration (RDA).
Analysis of DNA Polymorphism of Between Korean Native Cattle and Korean Tiger Cattle
Sang-Hwan Kim,Eun-Joong Jung,Hyun-Ah Kang,Jong-Taek Yoon 한국동물생명공학회(구 한국동물번식학회) 2011 발생공학 국제심포지엄 및 학술대회 Vol.2011 No.1
This study was conducted to detect the specific fragment genes by using RAPD-PCR and RFLP method in the Korean Tiger cattle and Korean Native cow. And then, the specific fragment gene was investigated by the analysis of the genes for detection significance according to the expressing pattern. We found the specific expression gene by the RAPD-PCR analysis in Korean Tiger cattle. It were a detected the differences of the species in the colour and external section. The Korean Tiger cattle were vary low compare to the Korean Native cattle by analysis result of polymorphism and distribution. And the polymorphism over 500bp into the size classification detected was highly pattern and it could be utilize by the resource of the specific gene. There was a found the specific gene by sequencing in the 1855bp gene fragment of Korean Tiger cattle. And the sequencing result of the R9B was different between Korean Native cow and Holstein cattle. Thus, this gene can be apply as the specific gene in the Korean Tiger cattle.