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Agrobacterium tumefaciens를 이용한 amorpha-4,11-dience 합성 유전자의 상추로의 도입
정귀미,송명종,백남인,박영두 경희대학교식량자원개발연구소 2005 硏究論文集 Vol.24 No.-
Amorpha-4,11-diene synthase(ADS) 유전자를 상추에 도입하기 위해 ADS유전자를 pILTAB357에 삽입하여 binary vector pADS를 제작하였다. 상추 형질전환은 자엽 절편체를 pADS 벡터를 운반하는 A. tumefaciens LBA4404에 접종시키고 MS배지에 200 mg·L 세파탁심과 50 mg·L 가나마이신이 첨가된 선발 재분화배지에서 선발하였다. 선발된 신초는 뿌리 유기 배지에서 뿌리를 유기한 후 뿌리가 발생한 신초는 토양으로 이식하여 재배하였다. 형질전환상추에 T-DNA가 전이되었는지를 확인하기 위해 genomic DNA를 이용하여 PCR과 Southern 혼성화 분석을 실시하였다. PCR 분석 결과 9개의 재분화 개체로부터 기대했던 1.6 kb의 산물을 확인할 수 있었으며 Southern 혼성화 분석 역시 각 재분화 개체에 ADS 유전자가 1개 내지 3개의 copy수로 전이된 것을 확인할 수 있었다. 형질전환 상추내의 artemisinin 함량을 GC와 GC/MS 방법으로 분석하였다. Artemisinin 표준물은 retention time이 10분 7초로 나타났으며 이 peak가 artemisinin인지 확인하기 위하여 GC/MS를 측정한 결과 m/z 282가 정확하게 나타나 artemisinin으로 확인되었다. 한편 형질전환 상추와 일반 대조구 상추의 시료도 GC chromatogram에서 artemisinin의 retention time인 10분 7초 부근에서 여러 peak이 겹쳐서 나타났으나 각 peak에 대하여 GC/MS를 측정한 결과 m/z 282을 나타내는 peak는 관측되지 않아 형질전환 상추와 일반 상추에는 artemisinin이 함유되어 있지 않은 것으로 확인되었다. To introduce amorpha-4,11-diene synthase (ADS) gene into lettuce plant, binary vector pADS was constructed by the insertion of an ADS gene to pILTAB357. Cotyledon explants were infected by A. tumefaciens LBA4404 carrying pADS vector to transform lettuce plant with ADS gene. Transformed shoots were selected on selective regeneration medium containing MS salts, 200 mg·L cefotaxim, and 50 mg·L kanamycin. The selected shoots were transferred to rooting medium, and regenerated shoots were transplanted to pots after roots appeared. PCR and Southern hybridization analysis of genomic DNA were performed to confirm expected T-DNA fragments in the transgenic lettuce plants. PCR analysis revealed the presence of the expected 1.6 kb product from the nine regenerants. Southern hybridization analysis also showed that ADS gene was transferred into transgenic lettuce plants with 1~3 copies. Artemisinin in lettuce was identified by GC and GC/MS analysis. Standard artemisinin was found at 10 min 7 sec in the retention time by GC analysis and confirmed m/z 282 by GC/MS. There were several peaks at retention time of both non-transformed and transformed lettuce plants. However, GC/MS analysis showed that peak with m/z 282 was not found in transgenic lettuce plants.
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New Perspectives on Plant Defense Responses through Modulation of Developmental Pathways
정귀미,Kadunari Igari,Naoyuki Uchida,Masao Tasaka 한국분자세포생물학회 2008 Molecules and cells Vol.26 No.2
Invasion mechanisms of pathogens and counteracting defense mechanisms of plants are highly diverse and perpetually evolving. While most classical studies of plant defense have focused only on defense-specific factor-mediated responses, recent work is beginning to shed light on the involvement of non-stress signal components, especially growth and developmental processes. This shift in focus links plant resistance more closely with growth and development. In this review, we summarize our current understanding of how pathogens manipulate host developmental processes and, conversely, of how plants deploy their developmental processes for self-protection. We conclude by introducing our recent work on UNI, a novel R protein in Arabidopsis which mediates cross-talk between developmental processes and defense responses.
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