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A Potential Demerit of the Pronuclear Microinjection Technique
왕애국,김선욱,문형배,현병화,남기환,서준교,김남순,유대열,이동석,Wang, Ai-Guo,Kim, Sun-Uk,Moon, Hyung-Bae,Hyun, Byung-Hwa,Nam, Ki-Hoan,Suh, Jun-Gyo,Kim, Nam-Soon,Yu, Dae-Yeul,Lee, Dong-Seok Korean Society of Life Science 2006 생명과학회지 Vol.16 No.4
Pronuclear microinjection (PMI) is a primary method for producing transgenic mice and offers a powerful tool for investigating gene function in vivo. The method has several reported advantages and disadvantages. Here, we report another potential shortcoming. The survival rate of fertilized one cell-stage embryos was significantly reduced after PMI procedure (65.4% (1202/1838)). In addition, the proportion of embryos developing to full-term was also significantly lower than that of embryos not undergoing PMI (26.5% (319/1202) vs 41.9% (57/136)). Moreover, 3 out of 21 (14.3%) founder control mice which were non-transgene-carrying littermates of transgenic founders showed histopathological changes in their liver, which was comparable to that in of transgenic lineages (4 out of 27 (14.8%)). In conclusion, the mechanical damages in chromosomes occurring during PMI procedure may be a potential factor influencing phenotypes of transgenic mice. 현재, 유전자의 in vivo 기능을 연구하기 위해 가장 많이 이용되고 있는 transgenic mice를 생산하기 위한 기본적으로 이용되고 있는 방법이 one cell-stage embryo에 pronuclear microinjection (PMI)이다. 그러나, 이 PMI 후에 one cell-stage embryo들의 생존율은 현저히 감소 (65.4%)할 뿐만 아니라 PMI 후의 embryo의 출생률(26.4%)이 PMI 처리를 하지 않은 것 (41.9%) 보다 현저히 낮다. 더욱이, PMI 방법에 의해 태어난 transgenic founder들의 간 조직에 병리학적 변화가 14.8% 정도에 대해서 같은 한배의 새끼 non-transgenic founder들의 경우도 간 조직에 병리학적 변화가 14.3%로 나타났다. 결론적으로, 이 PMI 방법에 의한 염색체에 물리적 손상은 형질전환 마우스의 생산 및 표현형에 영향을 미치는 잠재적 요소로 생각된다.
개 난소의 보존, 난자의 배양시간 및 난구세포 부착 유무가 난자내 정자의 침입율에 미치는 영향
전연화,왕애국,한영호,이규승,김상근 韓國受精卵移植學會 2004 한국동물생명공학회지 Vol.19 No.2
본 연구는 개의 불임해결과 체외수정란을 생산할 목적으로 난소의 보존 및 난구세포의 부착 여부가 신선 및 동결 개 정자를 이용한 투명대 반응에 미치는 영향을 조사하였다. 1. 적출한 난소를 4 와 salt에 각각 48시간 보존 후 회수한 난구세포 부착 난자와 나화난자의 정자침입율은 각각 62.5%, 37.5% 및 42.5% 및 22.4%로서 난소를 적출 후 곧 바로 회수한 난구세포 부착 및 나화난자 내 정자침입율인 93.3%와 56.7%에 비해 현저히 낮
전연화,왕애국,김상근,Quan J. H.,Wang A. G.,Kim S. K. The Korean Society of Embryo Transfer 2005 한국동물생명공학회지 Vol.20 No.2
본 연구는 NCSU-23과 PZM-3 배양액에 EGF, $\beta-ME$와 glucose의 첨가가 돼지 난자의 체외성숙에 미치는 영향과 배양조건을 다르게 하여 계대배양한 섬유아세포를 이용한 핵이식배를 다른 배양액과 산소조건에서 배양하였을 때 체외발생율에 미치는 영향을 조사하였다. 핵이식 배를 20ng/ml EGF를 첨가 또는 첨가하지 않은 NCSU-23 및 PZM-3 배양액에서 배양하였을 때 배반포로의 체외 발생율은 각각 $12.0\pm1.3\%,\;9.6\pm1.9\%,\;10.9\pm2.1\%,\;9.1\pm2.3\%$였다. 핵이식 배를 $25{\mu}M\;\beta-ME$를 첨가 또는 첨가하지 않은 NCSU-23 및 PZM-3 배양액에서 144시간 배양하였을 때 배반포로의 체외 발생율은 각각 $9.6\pm1.7\%,\;7.3\pm2.3\%,\;11.9\pm1.8\%$와 $7.4\pm2.1\%$였다. $\beta-ME$를 첨가한 PZM-3 배양액에서 배양하였을 때 배반포로의 체외 발생율은 $\beta-ME$를 첨가하지 않은 배양액에서 배양한 배보다 높은 체외발생율을 나타냈다. (p<0.05). 핵이식 배를 1.5mM glucose를 첨가 또는 첨가하지 않은 NCSU-23 및 PZM-3 배양액에서 배양하였을 때 배반포로의 체외 발생율은 각각 $9.4\pm2.2\%,\;6.8\pm2.7\%,\;10.9\pm2.4\%$와$8.9\pm2.6\%$였다. Glucose를 첨가한 NCSU-23과 PZM-3 배양액에서 배양하였을 때 배반포로의 체외 발생율은 glucose를 첨가하지 않은 배양액에서 배양한 배보다 높은 체외 발생율을 나타냈다. 핵이식 배를 NCSU-23 및 PZM-3 배양액과 $5\%$ 및 $20\%$ 산소 조건에서 배양하였을 때 배반포로의 체외 발생율은 각각 $11.1\pm1.8\%,\;9.8\pm1.4\%,\;12.5\pm1.6\%$와$10.9\pml.5\%$였다. NUSU-23과 PZM-3 배양액에서 $5\%$ 산소 조건에서 배양하였을 때 $20\%$산소 조건에서 배양한 난자보다 높은 체외 발생율을 나타났다. 섬유아세포를 NCSU-23 배양액에서 배양하여 공여자세포로 이용하여 10 및 $11\~15\;passage$ 이내로 계대배양하였을 때의 융합율은 $60.0\~73.3\%,\;52.5\%$였다. 섬유아세포를 PZM-3 배양액에서 배양하여 공여자세포로 이용하여 10 및 $11\~15passage$ 이내의 계대배양시의 융합율은 $60.4\~75.1\%$ 및 $58.7\%$였다.
EGF,, Glucose, 농도 및 Fibroblast Subculture가 핵이식 배의 체외발생에 미치는 영향에 관한 연구
전연화,왕애국,김상근 韓國受精卵移植學會 2005 한국동물생명공학회지 Vol.20 No.2
본 연구는 NCSU-23과 PZM-3 배양액에 EGF, 와 glucose의 첨가가 돼지 난자의 체외성숙에 미치는 영향과 배양조건을 다르게 하여 계대배양한 섬유아세포를 이용한 핵이식배를 다른 배양액과 산소조건에서 배양하였을 때 체외발생율에 미치는 영향을 조사하였다. 핵이식 배를 20ng/ml EGF를 첨가 또는 첨가하지 않은 NCSU-23 및 PZM-3 배양액에서 배양하였을 때 배반포로의 체외 발생율은 각각 였다. 핵이식 배를 를 첨가 또는 첨가하지 않은