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Bacillus brevis CD162 Cyclodextrin Glycosyltransferase의 정제 및 특성
김명희,임영희,오태광,손천배,Kim, Myung-Hee,Lim, Young-Hee,Oh, Tae-Kwang,Sohn, Cheon-Bae 한국응용생명화학회 1997 Applied Biological Chemistry (Appl Biol Chem) Vol.44 No.4
The cyclodextrin glycosyltransferase (CGTase, EC 3.2.1.19) from Bacillus brevis CD162 was purified by precipitating with ammonium sulfate, DEAE-Sepharose CL-6B column chromatography and Sephadex G-150 column chromatography. The molecular mass and pI of the purified enzyme were estimated to be 74,000 and 6.3 by SDS-PAGE and isoelectric focusing, respectively. The purified enzyme was clearly identified as the CGTase by zymogram after SDS-PAGE. The optimum pH and temperature for the enzyme activity were 8.0 and $55^{\circ}C$, respectively. The enzyme was stable at the range of pH $5.5{\sim}9.0$, and up to $50^{\circ}C$. The amino acid sequence from the $NH_2-terminal$ of the purified CGTase was Ser-Val-Thr-Asn-Lys-Val-Asn-Tyr-Ser-Lys-Asp-Val-Ile-Tyr-Gln. The yields of the products from starch as the substrate were 1.3% for ${\alpha}-$, 33.9% for ${\beta}-$, and 9.7% for ${\gamma}-cyclodextrin$. Bacillus brevis CD162가 생산하는 cyclodextrin glycosyltransferase (CGTase)를 ammonium sulfate 침전, DEAE-Sephadex CL-6B 및 Sephadex G-150 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 분리정제하였다. 정제된 CGTase는 분자량이 약 74,000, 등전점은 약 6.3인 단백질이었고, 정제된 단백질을 SDS-PAGE한 후 변성된 단백질을 재활성시켜 zymogram을 수행한 결과 cyclodextrin glycosyltransferase임을 확인할 수 있었다. 이 효소의 최적활성 pH와 온도는 각각 8.0과 $55^{\circ}C$이었으며, pH $5.5{\sim}9.0$과 $50^{\circ}C$까지 안정한 활성을 보였다. 또한, CGTase의 $NH_2$-말단 부위의 아미노산서열은 Ser-Val-Thr-Asn-Lys-Val-Asn-Tyr-Ser-Lys-Asp-Val-Ile-Tyr-Gln 이었으며, 전분으로부터 cyclodextrin으로의 전환률을 분석한 결과, ${\alpha}$-cyclodextrin은 1.3%, ${\beta}$-cyclodextrin은 33.9% ${\gamma}$-cyclodextrin은 9.7% 이었다.
γ-Cyclodextrin Glycosyltransferase 생산균주의 분리 , 동정 및 효소 생산조건
김명희,손천배,임영희,배경숙,오태광 ( Myung Hee Kim,Cheon Bae Sohn,Young Hee Lim,Kyung Sook Bae,Tae Kwang Oh ) 한국응용생명화학회 1997 Applied Biological Chemistry (Appl Biol Chem) Vol.40 No.6
A cyclodextrin glycosyltransferase-producing bacterium was newly isolated from soil using alkaline pH medium containing 1% Na₂CO₃. The isolated strain was identified as Bacillus brevis by morphological and biochemical characteristics, and fatty acid composition and designated Bacillus brevis CD162. The strain showed the best enzyme production of 0.9 unit/㎖ after 96 hrs of culture at 30℃ in a medium of 2.0% soluble starch, 0.75% yeast extract, 0.5% bacto peptone, 0.2% K₂HPO₄ 0.05% MgSO₄·7H₂O, and 1.5% Na₂CO₃ at initial pH 10.2.
${\gamma}-Cyclodextrin$ Glycosyltransferase 생산균주의 분리, 동정 및 효소 생산조건
김명희,임영희,배경숙,오태광,손천배,Kim, Myung-Hee,Lim, Young-Hee,Bae, Kyung-Sook,Oh, Tae-Kwang,Sohn, Cheon-Bae 한국응용생명화학회 1997 Applied Biological Chemistry (Appl Biol Chem) Vol.44 No.4
A cyclodextrin glycosyltransferase-producing bacterium was newly isolated from soil using alkaline pH medium containing 1% $Na_2CO_3$. The isolated strain was identified as Bacillus brevis by morphological and biochemical characteristics, and fatty acid composition and designated Bacillus brevis CD162. The strain showed the best enzyme production of 0.9 unit/ml after 96 hrs of culture at $30^{\circ}C$ in a medium of 2.0% soluble starch, 0.75% yeast extract, 0.5% bacto peptone, 0.2% $K_2HPO_4$ 0.05% $MgSO_4{\cdot}7H_2O$, and 1.5% $Na_2CO_3$ at initial pH 10.2. Cyclodextrin glycosyltransferase 생산균주를 토양으로부터 분리하여 형태학적, 생화학적 그리고 균주의 세포벽 지방산 조성분석에 의해 Bacillus brevis로 동정하였고, Bacillus brevis CD162로 명명하였다. 또한 배지조성에 따른 cyclodextrin glycosyltransferase의 최적생산조건을 검토한 결과, 2.0% soluble starch, 0.75% yeast extract, 0.5% bacto peptone, 0.2% $K_2HPO_4$, 0.05% $MgSO_4{\cdot}7H_2O$, 1.5% $Na_2CO_3$ (pH 10.2)의 배지 조건에서 $30^{\circ}C$에서 96시간 배양하였을 때 가장 높은 효소생산인 0.9 unit/ml을 얻을 수 있었다.
Γ-Cyclodextrin Glycosyltransferase 생산균주의 분리, 동정 및 효소 생산조건
김명희,손천배,임영희,배경숙,오태광 대전대학교 이과대학 기초과학연구소 1997 自然科學 Vol.- No.-
Cyclodextrin glycosyltransferase 생산균주를 토양으로부터 분리하여 형태학적, 생화학적 그리고 균주의 세포벽 지방산 조성분석에 의해 Bacillus brevis로 동정하였고, Bacillus brevis CD162로 명명하였다. 또한 배지조성에 따른 cyclodextrin glycosyltransferase의 최적생산조건을 검토한 결과, 2.0% soluble starch, 0.75% yeast extract, 0.5% bacto peptone, 0.2% KHPO₄, 0.05% MgSO₄·7H₂O, 1.5% Na₂CO₃ (pH 10.2)의 배지 조건에서 30℃에서 96시간 배양하였을 때 가장 높은 효소생산인 0.9 unit/ml을 얻을 수 있었다.(1997년 7월 10일 접수, 1997년 11월 21일 수리) A cyclodextrin glycosyltransferase-producing bacterium was newly isolated from soil using alkaline pH medium containg 1% Na₂CO₃, The isolated strain was identified as Bacillus brevis by morphological and biochemical characteristics, and designated Bacillus brevis CD162. The strain showed the best enzyme production of 0.9 unit/ml after 96 hrs of culture at 30℃ in a medium of 2.0% soluble starch, 0.75% yeast extract, 0.5% bacto peptone, 0.2% K₂HPO₄, 0.005% MgSO₄·7H₂O and 1.5% Na₂Co₃at initial pH 10.2
Bacillus brevis CD162 Cyclodextrin Glycosyltransferase의 정제 및 특성
김명희,손천배,임영희,오태광 대전대학교 이과대학 기초과학연구소 1997 自然科學 Vol.- No.-
Bacillus brevis CD162가 생산하는 cyclodextrin glycosyltransferase (CGTase)를 ammonium sulfate 침전, DEAE-Sephadex CL-6B 및 Sephadex G-150 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 분리정제하였다. 정제된 CGTase는 분자량이 약74.000, 등전점은 약 6.3인 단백질이었고, 정제된 단백질을 SDS-PAGE한 후 변성된 단백질을 재활성시켜 zymogram을 수행한 결과 cyclodextrin glycosyltransferase임을 확인할 수 있었다. 이 효소의 최적활성 pH와 온도는 각각 8.0과 55℃이었으며, pH 5.5~9.0과 50℃까지 안정한 활성을 보였다. 또한, CGTase의 NH₂-말단 부위의 아미노산서열은 Ser-Val-Thr-Asn-Tyr-Ser-Lys-Asp-Val-Ile-Tyr-Gln 이었으며, 전분으로부터 cyclodextrin으로의 전환률을 분석한 결과, α-cyclodextrin은 1.3%, β-cyclodextrin은 33.9%, γ-cyclodextrin은 9.7% 이었다(1997년 7월 10일 접수, 1997년 9월 25일 수리) The cyclodextrin glycosyltrasferase (CGTase, EC 3.2.1.19) from Bacillus brevis CD162 was purified by precipitating with ammonium sulfate, DEAE-Sepharose CL-6B column chromatography and Sephadex G-150 column chromatography. The molecular mass and pI of the purified enzyme were estimated to be 74,000 and 6.3 by SDS-PAGe and isoelectric focusing, respectively. The purified enzyme was clearly identified as the CGTase by zymogram after SDS-PAGE. The optimum pH and temperature for the enzyme activity were 8.0 and 55℃, respectively. The enzyme was stable at the range of pH 5.5~9.0, and up to 50℃. The amino acid sequence from the NH₂-terminal of the purified CGTase was Ser-Val-Thr-Asn-Lys-Val-Asn-Tyr-Ser-Lys-Asp-Val-Ile-Tyr-Gln. The yields of the products from starch as the substrate were 1.3% for α-,33.9% for β-, and 9.7% for γ-cyclodextrin.
새우젓 유래 Bacillus sp. S19가 생산하는 혈전용해효소의 정제 및 특성
장순애,김명희,이명선,오태광,손천배 한국산업미생물학회 2000 한국미생물·생명공학회지 Vol.28 No.5
Bacillus sp. S19가 생산하는 혈전용해효소를 DEAE-Sephadex A-50, CM-Sepharose CL 6B, Sephadex G-75 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 수율 13%로 정제하였다. 정제된 효소는 SDS-PAGE를 수행한 결과 분자량이 약 42,000 Da일 것으로 나타났다. 그것의 최적 활성온도와 pH는 각각 40℃와 pH는 8.0으로 나타났고, pH 6-9 범위와 45℃까지 안정된 활성을 보였다. 본 효소의 N-말단 아미노산 서열은 Ala-Gln-Asp-Ala-Thr-Val-Asn-Ile-Ser-Ala-Glu-Arg-Gln-Val-Ile으로 분석되었다. 또한 본 효소는 Cu^2+에 의해 활성이 증가되는 반면에 Cd^2+와 Ba^2+ 등의 금속이온에 의해서는 강하게 저해되었다. 게다가 본 효소는 EDTA에 의해서는 현저하게 저해를 받는 반면, PMSF에 의해서는 저해되지 않아 metalloprotease일 것으로 판단된다. A fibrinolytic enzyme was purified to homogeneity from Bacillus sp. S19 using DEAE and CM column chromatographies, and gel filtration with a recovery yield of 13%. Its molecular mass was estimated to be 42 kDa by SDS-PAGE. The pH and temperature optima were 8.0 and 40℃, respectively. The enzyme was stable up to 45℃ and over a pH range of 6-9. The N-terminal amino acid sequence of the enzyme was determined as Ala-Gln-Asp-Ala-Thr-Val-Asn-Ile-Ser-Ala-Glu-Arg-Gln-Val-Ile. The fibrinolytic activity was increased by Cu^2+ while it was strongly inhibited by metal ions such as Cd^2+ and Ba^2+. In addition, the enzyme was inhibited by EDTA, but not by PMSF, suggesting that it is a metalloprotease.