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암세포 Bcl-2 family 유전자 군의 DNA 메틸화 연구
강영섭 ( Young Suep Kang ),이선영 ( Sun Young Lee ),정상근 ( Sang Gun Jung ),한지유 ( Ji You Han ),고정재 ( Jeong Jae Ko ),배지현 ( Jee Hyeon Bae ),나영정 ( Young Junh Na ),이찬 ( Chan Lee ),목정은 ( Jung Un Mock ),김승조 ( Sung 대한산부인과학회 2007 Obstetrics & Gynecology Science Vol.50 No.7
목적: 본 연구는 암세포주와 난소암 조직에서 세포예정사의 핵심 조절 단백질인 Bcl-2 family 유전자의 DNA 메틸화 여부를 암과의 관련성을 밝히는데 그 목적이 있다. 연구 방법: 자궁경부암 세포주인 HeLa, CaSki 그리고 만성골수성 혈액암 세포주인 K562 세포에서 genomic DNA를 추출하여 sodium bisulfite를 통한 cytosine 염기를 uracil로 치환하였다. 치환된 염기서열은 methylation과 unmethylation을 특이적으로 확인할 수 있는 primer를 이용하여 MSP (Methylation Specific PCR)을 수행한 후 암세포에서 Bcl-2 family 유전자의 DNA 메틸화 여부를 판별하였다. 결과: 각각의 세포주에서 antiapoptotic Bcl-2 family 유전자 군인 Mcl-1과 Bcl-2 유전자는 DNA 메틸화가 이루어지지 않은 것으로 관찰되었으며, proapoptotic Bcl-2 family 구성원인 Harakiri 유전자는 DNA 메틸화가 이루어진 것을 확인하였다. 반면, 다른 proapoptotic Bcl-2 family 유전자인 Noxa 유전자는 DNA 메틸화가 이루어지지 않은 것으로 관찰되었다. 또한 난소암 조직에서의 DNA 메틸화 여부를 살펴본 결과 Mcl-1과 Noxa는 세포주에서와 같은 결과를 보였고, Harakiri 유전자의 경우 hypomethylation으로 관찰되었다. 결론: 본 연구는 암세포주와 난소암 조직에서 proapoptotic Bcl-2 family 유전자인 Harakiri와 Noxa의 경우, 유전자 특이적인 DNA의 메틸화가 나타났으며 antiapoptotic 유전자는 DNA의 메틸화가 나타나지 않았다. 이로써 Bcl-2 유전자군과 암세포의 세포사멸을 억제하는 기작을 DNA의 메틸화를 통한 특이 유전자 발현 억제에 의해서 이루어질 수 있다고 사료된다. Objective: Promoter methylation of Bcl-2 family genes in cancer cells were studied to verify possible correlation between DNA methylation pattern of Bcl-2 family members and cancer. Methods: The genomic DNAs were extracted from different cancer cell lines, HeLa, CaSki and K562, and ovarian cancer tissue from patients. The cytosine residues were converted to uracil by sodium bisulfite treatment. MSP (methylation specific PCR) was performed to determine the methylation status of Bcl-2, Mcl-1, Noxa, and Harakiri promoters. Using primers that distinguish methylated DNA from unmethylated DNA after bisulfite modification of DNA, MSP was conducted to observe the methylation pattern of Bcl-2 family genes in different cancer cells. Results: The promoter regions of Bcl-2 family genes including Mcl-1, Bcl-2, and Noxa were not methylated in cancer cells, whereas the proapoptotic Bcl-2 family gene Harakiri was detected as methylated in the cancer cell lines and hypomethylated in the ovarian cancer tissue. Conclusion: The present study demonstrated the differential methylation profiles of Bcl-2 family genes in cancerous cells, which suggests a possible connection between the methylation pattern of some of Bcl-2 family genes and ovarian cancer.
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