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뇌의 Thyrotropin Releasing Hormone수용체 분포에 관한 연구
고창순(Chang Soon Koh),이명철(Myung Chul Lee),정준기(June Key Chung),조보연(Bo Youn Cho),김승택(Seung Taik Kim),궁성수(Sung Soo Koong),유은숙(Eun Sook Yoo),박은미(Eun Mey Park),서일택(Il Tak Seo) 대한핵의학회 1990 핵의학 분자영상 Vol.24 No.1
N/A To evaluate the utility of autoradiographic technique in the detection of TRH receptor changes in brain after the various kinds of stimulation or drug administration, we tried the characterization of TRH receptor in mouse brain and autoradiography in rat brain as a preliminary study. The Kd value of [3-H] MeTRH to TRH receptors of adult male ICR mouse brain (cebellum and spina1 cord were excluded) was 3.55+0.6 nM and Bmax was 3.44+0.52 fmol/mg wet tissue by saturation analysis. The Kd value of TRH to TRH receptors was 133.8+28.2 nM by competition analysis. And we could visualize the distrbution of TRH receptors in rat brain by autoradiographic technique.
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당뇨병 백서에서 혈관평활 근 세포를 이용한 인슐린 유전자 요법
오태근,이미자,김영규,김승택 대한당뇨병학회 2002 Diabetes and Metabolism Journal Vol.26 No.1
연구배경:인슐린의존형 당뇨병은 췌장 베타세포의 파괴로 인한 인슐린 결핍에 기인한다. 본 연구의 목표는 retroviral 벡터를 이용하여 인슐린 유전자를 이입시킨 혈관평활근 세포를 이식하여 줌으로써 당뇨병 유발 쥐에서 혈당 조절의 가능성을 검정하는 것이다. 방법:모든 세포에 존재하는 endopeptidase인 furin에 의해 프로 인슐린의 Cpeptide 부분을 절단하는 변이된 프로인슐린 cDNA를 사용하여 먼저 재조합 retroviral 벡터 (LhInABCSN)를 제작하고, packaging 세포주인 PA317 세포에 이입시켜 PA317/LhInABCSN 을 제작하였다. 배양된 혈관평활근 세포(SMC, in bred F344 rat)에 PA317 /LhInABCSN 세포의 상충액을 넣어 인슐린을 생산하는 혈관평활근 세포(SMC/LhInABCSN)를 제작하였다. 동물실험으로 F344(in bred)쥐의 경동맥을 절개하여 풍선 카테터로 내피세포를 제거한 후 제작된 SMC/LhInABCSN를 이식하였다. 대조군으로는 SMC/LNFZ를 이식하였다. 수술 2주후 복강내로 스트렙토조토신(50㎎/㎏)을 주사하여 당뇨병을 유발시킨후 치료군과 대조군의 혈당 및 인슐린 농도, 체중변화 및 생존율을 비교하였다. 결과:인슐린 유전자가 이입된 혈관평활근 세포(SMC/LhInABCSN)의 상층액에서 인슐린 농도를 측정한 결과 24시간에 160.2μIU/mL, 48시간에 243.6μIU/mL, 72시간에서 350.2μIU/mL로 나왔고, 프로인슐린 농도는 24시간, 48시간 및 72시간 모두에서 1.0pmol/L 이하로 나와 SMC/LhInABCSN에서 생산되는 것이 프로인슐린이 아닌 인슐린임을 확인할 수 있었다. 스트렙토조토신 주사후 치료군과 대조군의 1일째(397±36㎎/dL vs. 392±49㎎/dL)와 3일째(338±37㎎/dL vs. 392±49㎎/dL)의 혈당차이가 없었으나 7일째에는 대조군중 생존한 3마리 모두에서 500㎎/dL 이상의 고혈당을 보인 반면, 치료군에서 생존한 10마리중 500㎎/dL 이상의 고혈당을 보인 쥐는 한 마리도 없었으며 14일째에도 대조군중 생존한 3마리의 혈당은 계속 500㎎/dL 이상의 고혈당을 보인 반면 치료군중 생존한 8마리중 500㎎/dL 이상의 고혈당을 보인 쥐는 한 마리도 없었다. STZ 투여후의 양군의 체중변화를 비교하였을 때 통계학적 차이는 없었으나 치료군이 대조군에 비해 체중감소량이 적은 경향을 보였다. 혈중 인슐린 농도는 STZ 투여 3일째 치료군에서 2.7±1.5μIU/mL, 대조군이 1.6±1.1μIU/mL로 두 군간에 통계학적 차이는 없었으나 치료군에서 약간 높은 경향을 보였다(p=0.077). 양 군의 평균 생존률을 비교해 보았을 때, 치료군의 median survival은 29일(9∼104일)로 대조군의 6일(3∼49일)에 비해 현저한 증가를 보였다(p<0.05). 결론:이상의 결과로 경동맥 혈관평활근세포를 이용한 인슐린 유전자요법은 정상 혈당의 회복은 가져오지 못했으나, 치료군이 대조군에 비해 현저한 생존율의 증가를 보이는바 혈관 평활근세포를 이용한 인슐린 유전자 요법이 당뇨병 치료의 한가지 방법이 될 수 있다고 생각한다. Background:Type 1 diabetes mellitus is caused by a lack of insulin. The purpose of this study was to test whether blood glucose control in severe diabetic animals can be achieved by transplanting of rat vascular smooth muscle cells which are transduced with the insulin gene using a retroviral vector system. Method:After cloning the recombinant retroviral plasmid including human mutated proinsulin cDNA which contains furin endopeptidase cleavage site, the resulting plasmid, LlnABCSN, was transfected into the retroviral packaging cell line(PA317/LhlnABSN). The resulting retrovirus in the supernatant of PA317/LhlnABCSN infected the F344 rat vascular smooth muscle cell(SMC)and produced the SMC/LhlnABCSN cells. After transplanting SMC/LhlnABCSN cells into the internal carotid artery of the rat, diabetes was induced by an intraperitoneal streptozotocin(STZ)injention(50㎎/㎏)2 week later. The blood glucose and insulin levels, percent weight change and the survival rates between the control group(SMC/LNFZ)and the treatment group(SMC/LhlnABCSN)were compared. Results:The insulin concentrations in the supernatant of the SMC/LhlnABCSN mice were 160.2μlu/mL in 24 hours, 243.6μlu/mL in 48 hours and 350.2μlu/mL in 72hours, but the proinsulin concentrations in 24,48 and 72 hours were all lower than 1 pmol/L. After 1 day and 3 days of the STZ injection, there were no differences in glucose concentrations between treatment group(n=10)and control group(n=10). There were no statistical differences in the percent weight change between the control and treatment group but the treated rats showed bad a lower weight loss than control rats. After 3 days of the STZ injection, serum insulin concentration of treatment group showed slightly higher levels than the control group(2.7±1.5μlu/mL vs. 1.6±1.1μlu/mL, p=0.077). The survival showed a significant increase in treatment group(median survival:29days, 9∼104 days)compared to the control group(median survival:6 days, 3∼49 days, p<0.05). Conclusion:Although this study did not show a normal glucose concentration in treated rats, it did show significantly higher survival smooth muscle cells which transduced the insulin gene may be a new insulin delivery method(J Kor Diabetes Asso 26:31∼45, 2002).
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