돼지 난모세포의 성숙과정에서 Phosphatidylinositol 대사의 기질 및 억제인자의 영향

강승률,양보석,조인철,이성수,정진관 韓國受精卵移植學會 2001 한국동물생명공학회지 Vol.16 No.2

본 연구는 phosphatidylinositol 대사의 기질 및 억제물질이 돼지 난모세포의 체외 성숙·수정에 미치는 영향에 대하여 실험을 하였다. 난모세를 inositol (250 mM) 첨가 또는 무첨가한 mTLP-PVA 배양액에서 46시간 체외배양하였다. 성숙이 완료된 난모세포는 신선 돼지정액을 이용하여 6시간 동안 mTALP-PVA 배양액에서 체외수정을 시켰다. 수정 후 6시간에 이들 난모세포를 10% 혈청을 첨가한 TCM-199 배양액에서 추가로 We evaluated the effects of the substrate and inhibitors related to phosphatidylinositol metabolism on in vitro maturation and fertilization of porcine oocytes. Cumulus-oocyte complexes were cultured in mTLP-PVA medium supplemented with or without inositol (250 mM) fur 46h. Subsequently, these oocytes were inseminated with fresh boar semen in mTALP-PVA medium for 6h. At 6h after insemination, oocytes were cultured for further 12 h in TCM-199 supplemented with 10% FBS (fetal bovine serum). The higher percentage of oocytes in inositol-supplemented medium reached metaphase of the second meiotic division compared to those in control (81.4% vs. 67.3%; P<0.()5). following 18 h of insemination, more number of male pronuclei were formed in the oocytes matured in inositol-supplemented medium than in those of control experiment (42.0% vs. 27.3%; P<0.05). When oocytes were cultured in medium with 10mM LiCl (chloride lithium) or 0.5mM dbcAMP (dibutyryl cyclic adenosine monophosphate) to determine the role of inositol on the maturation of oocytes, these two drugs inhibited the meiotic division of oocytes (P<0.05). However, addition of inositol to the culture medium did overcome the inhibitory effect of these drugs on the oocyte maturation. DbcAMP and verapamil supplemented synergistically arrested the meiotic division of oocytes. Addition of verapamil did not inhibit germinal vesicle breakdown, but it severly inhibited the second meiotic division of oocytes. These results suggest that inositol exert its improving effects on maturation, by activating the PI (phosphatidylinositol) cycle and causing beneficial changes in both cytoplasm and membrane of oocytes.

돼지 SRY와 ZF 유전자를 이용한 성판별 기법

조인철,강승률,이성수,최유림,고문석,오문유,한상현 한국동물자원과학회 2005 한국축산학회지 Vol.47 No.3

제주 흑우에서 다배란 처리 후 호르몬 수준과 혈액 생화학치의 변화

이태훈,강승률,김희석,강민수,윤영민,이주명,강태영 韓國受精卵移植學會 2006 한국동물생명공학회지 Vol.21 No.3

본 연구는 제주도의 흑우에서 다배란을 유기한 후 발정기 동안 혈중 호르몬의 농도 검사, 혈액 생화학 검사, 체내 수정란 회수율 등을 관찰하였다. FSH를 4일간 8회 50 mg씩 주사하여 다배란을 유기하였다. 성호르몬의 측정은 radioimmunoassay (RIA)법으로 측정하였으며 혈액 생화학치는 자동혈청 분석기로 측정하였다. 인공 수정 후 7일에 수정란을 비외과적 방법으로 회수하였다. 본 연구의 결과는 다음과 같았다. 1. 혈중 호르몬의 농도를 측 The objective of this study was to determine changes in serum hormone concentrations, blood chemical values and recovery rate of in vivo embryos during the estrous cycle following super-ovulation treatments in Jeju black cows. Superovulation was induced by subcutaneous administration of FSH twice a day for 4 days. Serum hormones were assayed by radioimmunoassay (RIA) and blood chemical values were analyzed by blood analyser system. Embryos were collected from all treated black cows using nonsurgical technique on day 7 after artificial insemination (AI). The results of this study were summarized as follows: 1. The progesterone concentrations were at day -11 and at day 0 (Day 0 is the first day of AI). The estradiol concentrations were at day -11 and at day 0. The lowest level of progesterone was measured at day 0. The highest levels of estradiol was measured at day 0. 2. The blood chemical values of treated black cows were no significant differences in normal cow values. 3. Sixty two embryos were collected in 12 black cows. Among the collected embryos, 37 embryos (59.7%) could be transferred into recipients. These results would be used as the basic informations for changing patterns of hormonal level and blood biochemistry in Jeju black cow with superovulation.

제주마 정액의 일반성상에 관한 연구

양보석,강승률,이성수,조인철,정진관 韓國受精卵移植學會 2001 한국동물생명공학회지 Vol.16 No.2

본 연구는 천연기념물로 지정되어 있는 제주마의 유전자원 보존과 증식을 위한 인공수정 기술의 실용화를 위한 기초자료를 제공하고자 제주도 축산진흥원에서 사육되고 있는 제주마 종마 4두를 공시하여 Missouri style 인공질을 이용 정액을 채취하여 사정 특성 및 정액의 일반 성상을 조사하였다. 제주마는 교미를 위하여 발정 중인 암말에 사정당 2.31.8회 승가를 하며 사정시간은 27.012.5초였다. 정액의 일반성상을 조사한 결과 총 정액량은 47.82 The Jeju horse has been raised for centuries in Jeju island. Recently, as the number of this indigenous horse has been dropped dramatically, this breed became Natural Monument #347 to conserve and multiply this endangered breed. To provide the basic information for AI, sexual activity and semen characteristics in Jeju horse were investigated. Jeju horse semen was collected using Missouri style artificial vagina from fertile stallion.\\'she number of mount per ejaculation was 2..31.8, and the ejaculation time was 27.012.5 seconds. The total volume and gel-free volume of semen was 47.826.7 ml and 42.727.4ml, respectively, and the concentration of sperm and the total number of spermatozoa per ejaculation was 200.7112.910 ml and 7.63.910 ml, respectively. The percentage of motile sperm and the number of live spermatozoa per ejaculation was 75.018.2% and 6.13.410 ml, respectively, and the pH of gel-free semen was 7.30.2. The total percentage of abnormal sperm was 31.5%, and the percentage of sperm with abnormal head, midpiece and tail was 9.511.7%, 7.04.0% and 15.015.0%, respectively.

돼지 난모세포의 체외성숙 및 생존성에 미치는 항산화제의 영향

김기흥,강민수,강승률 濟州大學校 農科大學 動物科學硏究所 2000 動物科學論叢 Vol.15 No.1

This study was conducted to investigate the effects of antioxidants(SOD, Catalase Taurin) on the rates of in vitro maturation, viability and subsequent fertilization of oocytes cultured in mTLP-PVA medmm. The result are as follows; 1. The effect of SOD (Superoxide dismutase) on GVBD of oocytes ; the rate of germinal vesicle (GV) was much higher in the medium containing 500 unit (8.7%) than control (2.7%) and 400 unit of SOD (0%) and the addition of 400 unit of SOD increased the oocytes showing GVBD(genninal vesicle breakdown) compared to other treatments. 2. The effect of SOD on the expulsion of first polar body (Pb 1) of oocytes ; the addition of 200 unit of SOD significantly(p<0.05) increased the oocytes showing MII stage compared to control and 100 or 300 unit of SOD. 3. The effect of catalase on GVBD rate of oocytes ; the rate of germinal vesicle (GV) was much higher in the medium containing 250 unit (23.7%) than control (2.7%) and 150 unit of catalase (11.4%). However, the addtion of catalase significantly(p<0.05) decreased the oocytes showing GVBD stage (MI - MII) compared to the control. 4. The effect of catalase on polar body 1(Pb 1) of oocytes ; the addtion of 200 unit of catalase significantly(p<0.05) decreased the oocytes of M II stage compared to control, showing that catalase may have adverse effect on the maturation of oocytes. 5. The effect of taurine on the GVBD rate of oocytes ; the percentage of germinal vesicle(GV) was much higher in the medium added 7.0 mM of taurine. this concentration decreased the ratio of GVBD stage (M I - MII) compared to treatments. 6. The effect of taurine on the expulsion of first polar body (Pb 1) of oocytes ; the addtion of 2.5 mM of taurine significantly increased the oocytes maturing to second metaphase(MII ) stage compared to the control. 7. The effect of antioxidants on the oocytes maturing to MII stage ; the addition of SOD and taurine significantly(p<0.05) improved the nuclear maturation of oocytes, but not in addition of catalase. 8. The effect of antioxidants on the viability of oocytes using the Celltiter AQ System ; the addition of SOD and taurine significantly(p<0.05) increased the viability of oocytes compared to the control, but catalase decreased. 9. The effect of antioxidants on the viability of oocytes using CFDA stain; the addition of SOD and taurine significantly(p<0.025) increased the viability of oocytes compared to the control, but catalase addtion was not different from the control. Results in the present study indicate that medium containing antioxidants such as SOD and taurine improved the maturation capability and viability of oocytes, indicating that antioxidants might remove the free radicals produced in culture environment, and so on.

랜드레이스, 대요크셔, 듀록 및 제주 흑돈의 Melanocortin 1 Receptor(MC1R) 유전자의 유전자형 분석

조인철,이정규,정진관,양보석,강승률,김병우 한국동물자원과학회 2002 한국축산학회지 Vol.44 No.2

본 연구에서는 제주 재래흑돈의 모색에 관여하는 MCIR 유전자를 이용하여, 모색유전자 빈도를 조사함으로써, 제주 재래흑돈군 확보를 위한 선발계획 수립에 기초자료를 제공하고자 수행하였다. 공시동물은 랜드레이스, 대요크셔, 듀록 각 품종별 20두와 제주흑돈 93두 등 총 153두를 공시하여 수행하였다. 품종별 MCIR 유전자형을 설정하기 위하여 genbank에 등록되어 있는 돼지 MCIR 유전자 (AF181964)를 참고로 하여 두 쌍의 primer(MERL1-EPIG2, EPIG1-EPIG3)를 제작 PCR 증폭을 수행하였다. 먼저 primer MERL1-EPIG2를 이용하여 428bp의 PCR 산물을 얻었으며, primer EPIG1-EPIG3를 이용하여 405bp의 PCR 산물을 얻었다. 이들 증폭된 PCR 산물은 서로 다른 2개의 제한효소를 이용하여 PCR-RFLP를 실시하였다. 먼저 primer MERL1-EPIG2를 이용하여 증폭한 428bp의 PCR산물은 제한효소 BspHⅠ(TCATGA)을 이용하여 절단하였으며, primer EPIG1-EPIG3으로 증폭한 405bp의 PCR산물은 제한효소 AccⅡ(CGCG)를 이용하여 절단하였다. 이들 절단된 DNA 단편은 TBE buffer에서 전기영동 후 EtBr로 염색하거나 Silver stain 염색을 하여 다형현상을 관찰하였으며, 본 연구의 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. 제한효소 BspHⅠ을 이용하여 PCR-RFLP을 수행한 결과 백색의 랜드레이스와 대요크셔는 전 개체 모두가 2개의 밴드(256bp, 172bp)가 확인되었으며, 듀록은 절단되지 않은 하나의 밴드(428bp)가 확인 되었다. 그러나 제주 흑돈에서는 3개의 서로 다른 형태의 밴드가 발견되었는데, 전체 93두중 밴드가 하나인 개체는 (428bp)는 29두(31.2%), 밴드가 두 개인 개체는 (256bp, 172bp)는 19두(20.4%), 밴드가 3개인 (428bp, 256bp, 172bp) 개체는 전체의 절반 정도인 45두(48.4%)이었다. 2. AccⅡ를 이용하여 PCR-RFLP를 실시한 결과 랜드레이스와 대요크셔 종에서는 2개의 밴드(222bp, 183)가 확인 되었으며, 듀록은 한 개의 밴드(405bp)만이 관찰되었다. 그러나 제주흑돈에서는 3개의 서로 다른 형태의 밴드가 확인되었으며, 분포빈도는 BspHⅠ을 이용한 PCR-RFLP 결과와 동일하였다. 3. 이상의 결과를 MCIR 유전자형으로 분류하면 백색품종인 랜드레이스와 대요크셔 품종은 MCIR*3 allele이었으며, 적색의 듀록은 MCIR*4 allele로서 도입종의 모색유전자는 한가지 형태로 고정되어 있었다. 그러나 제주 재래흑돈에 있어서 MCIR*2 allele과 MCIR*3 allele 모두 다 나타났으며, 대부분은 이들의 헤테로 형태였다. 따라서 제주 재래흑돈의 모색 고정을 위하여 종모돈 선정시 MCIR 유전자를 이용하면, 짧은 기간 내에 모색이 고정될 것으로 추정되며, 명확한 유전양상 구명을 위해서는 agouti 유전자의 추가 연구가 필요할 것으로 사료된다. This study was conducted to investigate the genotypes and frequencies of Melanocortin 1 Receptor (MCIR) genes in pigs which plays a central role in regulation of eumelanin (black/brown) and phaeomelanin (red/yellow) pigment synthesis within the mammalian melanocytes. Four different breeds of pigs (20 Landrace, 20 Yorkshire, 20 Duroc, and 93 Jeju native black pigs) were used and PCR-RFLP analysis of MCIR gene was also carried out. Two regions of MCIR genes (428bp and 405bp) were amplified using two specific pirmers (MERL1-EPIG2, EPIG1-EPIG3), respectively and MCIR allele were determined using 2 restriction enzymes (BspHⅠ, AccⅡ). The results of this experiment indicated that MCIR allelic type in Landrace. Large Yorkshire and Duroc were MCIR*2(E^P), MCIR*2(E^P), MCIR*4(e), respectively. However, various allelic types of MCIR genes were detected in Jeju native black pigs. MCIR allelic type of Jeju black pigs was MCIR*2 type as in Meishan and Large black breeds or MCIR*3 type as in Hampshire and Berkshire breeds and the gene frequencies of E^P1 and E^P2 were 0.554 and 0.446 in average.

칡소와 비경흑색 한우의 Melanocortin Receptor 1(MC1R) 유전자형 분석

이성수,양보석,양영훈,강승률,고서봉,정진관,오운용,오성종,김규일 한국동물자원과학회 2002 한국축산학회지 Vol.44 No.1

칡소와 비경흑색 한우의 MC1R 유전자의 유전자형를 조사하고 칡소의 모색 발현과 한우비경색과의 관계를 규명하기 위하여 MC1R 유전자의 PCR-RFLP 분석을 수행하였다. 소에서 나타나는 6가지 유전자형(E^D/E^D, E^D/E^+, E^D/e, E^+/E^+, E^+/e와 e/e) 중 칡소에서는 단지 2개의 유전자형 E^+/E^+, E^+/e 만이 출현하였고, e/e 유전자형을 가지는 개체는 전혀 출현하지 않아 제주재래흑우에서와 같이 흑색 호반모가 발현되기 위해서는 기본적으로 E^+ allele이 필요한 것으로 사료되었다. 비경흑색 한우와 비경황색 한우에서는 모두 E^+/e 혹은 e/e 유전자형이 출현하였고 E^+와 e allele의 빈도는 각각 0.37, 0.63과 0.11, 0.89였다. 비록 E^+ allele의 빈도가 비경흑색 한우에서 비경황색 한우에서 보다 높았지만, E^+ allele과 비경흑색과는 완전한 연관성은 없었다. 이러한 결과는 MCIR 유전자 분석이 칡소 뿐만 아니라 한우의 모색 고정에도 유용한 도구로 이용 가능함을 제시하고 있다. PCR-RFLP analysis was carried out to investigate the genotype of Melanocortin receptor 1 (MC1R) gene in Korean Brindle Cattle and Korean Cattle with dark muzzle, which are coat color and muzzle pigmentation variants of Korean Cattle, respectively. Allelic variants of MC1R in cattle were analyzed by digestion with BsrFⅠ, AciⅠ. Among six genotypes, E^D/E^D, E^D/E^+, E^D/e, E^+/E^+, E^+/e and e/e, detected in cattle, only two genotypes, E^+/E^+ and E^+/e, were observed in Korean Brindle Cattle, probably reflecting the necessary of E^+ allele for the expression of black brindle coat color. As in Korean Cattle with light muzzle, the E^+/e and e/e genotypes were detected in Korean Cattle with dark muzzle. The E^+ and e alleles frequencies in two populations of Korean Cattle with dark muzzle and with light muzzle were 0.37, 0.63 and 0.11, 0.89, respectively. Although the frequency of E^+ allele in Korean Cattle with dark muzzle was higher than in Korean Cattle with light muzzle, the E^+ allele was not completely associated with dark muzzle pigmentation. The results of this experiment indicate that the difference of MC1R genotype and frequency may be useful for fixation of coat color in Korean Cattle as well as Korean Brindle Cattle.

제주재래돼지 집단에서 집단특이적 mtDNA Haplotype과 유전적 다양성

한상현,조인철,이종언,이성수,강승률,최유림,오운용,성필남,고서봉,오문유,고문석 한국동물자원과학회 2004 한국축산학회지 Vol.46 No.6

Inositol이 돼지 난포란의 성숙에 미치는 영향

조인식,이상미,정영희,강승률,문승주,강만종 한국발생생물학회 2003 한국발생생물학회 학술발표대회 Vol.2003 No.1

Inositol은 세포의증식 및 정보전달과정에 관여하는 phosphatidylinositol (PI)의 구성성분으로서 중요한 세포내 기능을 수행한다. P1는 세포내에서 특이적 인산화효소에 의하여 Pl4-phosphate(PIP), Pl4,5-phosphate()로 변환되며 PIP는 phospholipase C(PLC)에 의하여 세포내 second messengers인 1,2-diacylglycerol (DAG)와 inositol 1,4,5-triphos

lnositol이 돼지 난포란의 성숙에 미치는 영향

조인식,이상미,정영희,강승률,문승주,강만종 한국수정란이식학회 2003 한국수정란이식학회 학술대회 Vol.2003 No.1