Streptomyces sp. YJB-599가 생산하는 Genistein의 분리 및 정제

함병권,배동훈,유주현 한국미생물생명공학회 ( 구 한국산업미생물학회 ) 1996 한국미생물·생명공학회지 Vol.24 No.3

토양으로부터 세포독성물질을 생산하는 strain No. 5-99 균주를 분리하였다. 본 균주의 세포벽 성분의 diaminopimelic acid(DAP)와 아미노산을 분석하여 본 결과, LL-DAP만을 함유하고 있었고, glycine이 검출된 것으로 보아 glycine으로 연결된 peptide를 가지는 peptidoglycan type A3이고 cell wall chemotype Ⅰ의 방선균인 Streptomyces sp.로 확인되었다. 따라서 본 균주를 Streptomyces sp. YJB-599라 명명하였다. 본 균주가 생산하는 활성물질은 용매추출 및 silica gel column chromatography를 이용하여 정제되었으며, 최종적으로 침상의 백색결정으로 분리하였다. 기기분석과 database로 구조분석을 행한 결과, 본 물질은 genistein으로 밝혀졌다. A cytotoxic material was produced by strain No. 5-99 which was isolated from soil. Analyzing the cell wall components, LL-diaminopimelic acid was identified. From the existance of glycine in the cell wall, this strain was identified to Streptomyces sp. which has cell wall chemotype I and peptidoglycan type A3 connected by glycine. So, we named this strain to Streptomyces sp. YJB-599. The Active material was purified through solvent extraction, silica gel column chromatography and crystallized to needle-shaped white crystal. Analyzing the structure of this crytal by instrumental analysis and database, it was determined to genistein.

토양으로부터 Cellulose 분해효소를 생산하는 미생물의 분리,동정 및 최적배양조건의 결정

함병권(Byoung-Kwon Hahm),김윤근(Yoon-Keun Kim),유주현(Ju-Hyun Yu),배동훈(Dong-Hoon Bai) 한국식품과학회 1997 한국식품과학회지 Vol.29 No.5

Streptomyces sp. YBE-316이 생산하는 항암성 항생물질의 정제 및 특성

박재홍,함병권,배동훈,유주현 한국산업미생물학회 1995 한국미생물·생명공학회지 Vol.23 No.3

미생물로부터의 새로운 항암성 항생물질 개발을 목적으로 토양으로부터 분리한 Streptomyces sp. YBE316이 생산하는 항암성 항생물질은 오직 균체 내에만 존재하였고 pH 5.0∼10.0까지 안정하였으며 중성에서 활성이 가장 높았고 열에 대한 안전성은 낮았다 본 항암성 항생물질의 유기용매에 대한 용해도와 안정성을 검토한 결과 methanol에서 가장 좋았으며, 정제는 균체로부터 acetone 추출, butanol 추출, silica gel column chromatography 등을 이용하여 순차적으로 행하였다. 본 물질의 항암활성은 낮았으며, 항균활성은 항세균보다는 항진균 활성이 강하였다. 본 항암성 항생물질은, 기초적인 기기분석을 행한 결과, polyene계의 pentaene계 항생물질중 eurocidin이나 capacidin type의물질로 추측되었으며, 그 분자량은 최소한 683.0 dalton 이상이었고, mycosamine이나 perosamine 등의 amino sugar가 아닌 당으로 glycosylation 되어 있는 것으로 추측되었다. For the development of new antitumor antibiotics produced by microorganisms, Streptomyces sp. YBE-316 was isolated from soil. The productivity of the antitumor antibiotic from Streptomyces sp. YBE-316 gradually increased after 60 hours, and was maximum after 100 hours after inoculation in growth medium (2.0% sucrose, 1.0% soybean meal, 0.1% K_2HPO_4, pH 7.0) at 30℃, 150 rpm, 5 NL/min by 30 ℓ jar fermentor. This antitumor antibiotic was present only in mycelium, and stable in pH 5.0∼10.0 for 20 minutes at 100℃. Antitumor and antibiotic activities were maintained at neutral pH, and heat stability was low. This antitumor antibiotic was soluble in methanol and ethanol, and insoluble in water, ethyl acetate, chloroform, and n-hexane. This antitumor antibiotic was sequentially purified by acetone extraction from mycelium, butanol extraction, and silica gel column chromatography. Antitumor activity was low against most tested cell lines, but antibiotic activity was high and low against yeasts and bacteria, respectively. The visualization test showed that this antitumor antibiotic had higher hydroxyl, ketone, amino, carboxyl groups, and sugar(s) in its structure. Instrumental analyses showed that this antitumor antibiotic was a pentaene in polyene class antibiotics. In pentaene class antibiotics, this was considered as an eurocidin or capacidin type antibiotics. The molecular weight of this antitumor antibiotic was higher than 683.0 daltons, and this antitumor antibiotic might be glycosylated by other sugar(s), instead of mycosamine or perosamine, an amino sugar.

Dicyma sp. YCH-37이 생산하는 효모세포벽 용해효소 : 1. 생산균주의 분리 및 효소의 정제 l. Isolation of the Strain and Purification of the Enzyme

정희철,함병권,배동훈,하세가와토루,유주현 한국미생물생명공학회 ( 구 한국산업미생물학회 ) 1996 한국미생물·생명공학회지 Vol.24 No.4

효모세포벽 용해효소를 생산하는 균주를 토양으로부터 분리하였다. 본 균주에 대한 현미경 관찰 및 형태학적, 배양상의 특징을 검토한 결과 Dicyma sp.로 동정되어, 본 균주를 Dicyma sp YCH-37로 명명하였다. 세포에 아무런 처리도 가하지 않은 생균상태의 세균, 효모, 곰팡이에 대한 용균 spectrum을 측정한 결과, 세균 중에서는 Salmonella typhimurium을, 효모 중에서는 Torulopsis, Hansenula, Zygosaccharomyces rouxii 등을 잘 용해시켰으며, 가압증기살균 처리된 효모는 모두 용해시킬 수 있었다. 배양상등액을 yeast glucan을 이용한 affinity adsorption 및 DEAE-cellulose column chromatography로 정제한 결과, 13%의 수율과 204배의 정제도로 정제되었다. SDS-PAGE, gel filtration을 통해 분자량은 약 25,000 daltons임을 확인하였으며, 용균활성의 최적 pH와 온도는 각각 8.0과 50℃이고, pH 4.0~pH 10.0, 40℃까지 안정하였다. The strain YCH-37, which produces yeast cell wall lytic enzyme, was isolated from soil. From the microscopic observation, morphological and cultural characteristics, this strain was identified to fungus, Dicyma sp. So, we named this strain as Dicyma sp. YCH-37. The lytic enzyme effectvely lysed Salmonella typhimurium among intact living bacteria and Torulopsis, Hansenula, Zygosaccharomyces among intact living yeast, as well as autoclaved yeast strains. The yeast cell wall lytic enzyme was succesively purified to 204 folds with 13% yields through yeast glucan affinity adsorption and DEAE-cellulose column chromatography. The enzyme was identified to monomeric protein with molecular weight of 25,000 daltons from the results of SDS-PAGE and gel filtration. The optimum pH and temperature for the yeast lytic activity were 8.0 and 50℃, respectively. The enzyme was stale up to 40℃, and between pH 4.0~pH 10.0.

유전자 조작 , 균주분리 알칼리 내성 Bacillus sp . YA - 14 유래의 중복 Promoter 를 이용한 재조합 Plasmid 로부터의 Pectate lyase 의 발현

박희경,함병권,유주현,배동훈 ( Hee Kyoung Park,Byoung Kwon Hahm,Ju Hyun Yu,Dong Hoon Bai ) 한국미생물생명공학회 1997 한국미생물·생명공학회지 Vol.25 No.6

Metarizium anisopliae (Metschn.) Sorok이 생산하는 Lactobacillus plantarum 용균효소의 분리, 정제 및 특성

류기철,함병권,백운하,유주현,배동훈 한국미생물생명공학회 ( 구 한국산업미생물학회 ) 1996 한국미생물·생명공학회지 Vol.24 No.6

김치저장성을 향상시키기 위하여, Lactobacillus plantarum 용균효소 생산균주를 토양으로부터 분리한 후 그 효소를 정제하고 특성을 살펴보았다. 본 균주의 배양학적 및 형태학적 특성 등을 검토한 결과 Metarrisium anisopliae (Metschn). Sorok으로 동정되었으며, 본 효소는 affinity adsorption, CM-Sephadex C-50 column chromatography를 통하여 40%의 수율과 75배 정제도로 정제되었다. 효소활성의 최적 pH와 온도는 각각 4.0, 40℃였으며, pH 3.0~9.0, 60℃까지 효소의 안정성이 유지되었다. SDS-PAGE 및 gel filtration으로부터 본 효소의 분자량은 40,000 daltons인 monomeric protein임을 확인하였다. 본 효소는 Lactobacillus plantarum 세포벽 peptidoglycan의 peptide linkage를 절단 하는 endopeptidase였으며, 용균 spectrum으로부터 김치발효시 유용균인 Leuconostoc mesenteroides에 대해서는 활성을 거의 나타내지 않음을 확인할 수 있었다. 본 효소의 활성은 Ag^+, N-bromosuccinimide (NBS)에 의해서 완전히 저해되었으며, NBS에 의해서 활성이 저해된다는 사실로부터 본 효소는 활성에 tryptophan residue가 관여하는 것으로 확인되었다. 본 효소는 산성 아미노산의 함량이 염기성 아미노산의 함량에 비하여 높았으며, alanine, glycine, proline, tyrosine의 함량 또한 매우 높았다. To improve the preservation of Kimchi, we isolated Lactobacillus plantarum lytic enzyme-producing strain from soil, and the enzyme was purified and characterized. From the observation of cultural and morphological characteristics, the isolated strain was identified as Metarrisium anisopliae (Metschn). Sorok. The enzyme was purified to 75-folds with 40% yields through affinity adsorption and CM-Sephadex C-50 column chromatography. The optimum pH and temperature for lytic activity are 4.0 and 40℃, respectively, and the enzyme acitivity is stable between pH 3.0 and 9.0 and up to 50℃. The enzyme is a monomeric protein with molecular weight of 40,000 daltons by SDS-FAGE and gel filtration. The enzyme is endopeptidase which breaks the peptide linkage of Lactobacillus plantarum peptidoglycan. The lytic action spectra confirmed that Leuconostoc mesenteroides, a useful strain for the fermentation of Kimchi, is not lysed by the enzyme. The enzyme activity is inhibited by N-bromosuccinimide (NBS), which probably indicates the involvement of tryptophan residue in active site of the enzyme, and also inhibited by Ag^+. The amino acid composition analysis showed that the enzyme contains more acidic amino acids than basic ones, and composition of alanine, glycine, proline and tyrosines was very high.

Dicyma sp. YCH-37이 생산하는 효모세포벽 용해효소

정희철(Hee-Chul Chung),함병권(Byoung-Kwon Hahm),유주현(Ju-Hyun Yu),배동훈(Dong-Hoon Bai) 한국식품과학회 1997 한국식품과학회지 Vol.29 No.5