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진혜진(Hye Jin Jin),최수진(Soo Jin Choi),배윤경(Yun Kyung Bae),이수연(Soo Yeun Lee),길명옥(Myeong Og Gil),박찬미(Chan Mi Park),왕준호(Joon Ho Wang),오원일(Wonil Oh),양윤선(Yoon Sun Yang),조인호(Inho Jo),김철기(Cheol-Ki Kim),송해룡(Hae-R 대한정형외과학회 2007 대한정형외과학회지 Vol.42 No.6
목적: 인간 골수로부터 간엽줄기세포를 분리 배양하여 기증자의 나이에 따른 분화능력을 비교하였다. 대상 및 방법: 저연령 그룹 (n=16, 12.5±5.8세)와 고연령 그룹 (n=4, 48.5±7.2세)으로 나눠 총 20명의 환자로부터 동의를 얻어 골수를 채취하였고, 채취한 골수로부터 간엽줄기세포를 추출하였으며, 세포 형태와 면역표현형을 분석하였다. 또한, 세포의 노화를 두 그룹에서 계대 배양하여 측정하였다. 골, 연골, 지방세포로의 분화를 관찰하기 위해 역전사 중합효소연쇄반응을 수행하였으며, alkaline phosphatase, von Kossa, safranin O와 oil red O 염색을 시행하였다. 결과: 총 20명의 골수에서 모두 간엽줄기세포를 추출하였고, 저연령 그룹에서 획득한 간엽줄기세포의 수가 고연령 그룹에 비해 약 5배 많았다. 세포의 노화는 두 그룹 모두 10세대 이후에서 나타났으며, 면역표현형도 두 그룹에서 유사한 형태를 보였다. 골, 연골, 지방세포로의 다양한 분화능력을 보였으며, 두 그룹간의 차이는 없었다. 결론: 본 연구의 결과는 골수 기증자의 나이는 골수 간엽줄기세포의 분화능력에 영향을 주지 않음을 보여 주었다. Purpose: The aim of study was to compare the differentiation capacity of mesenchymal stem cells (MSCs) obtained from human bone marrow (BM) according to the age of the donors. Materials and Methods: MSCs were isolated from the BM of young (n=16, 12.5±5.8 years) and elder (n=4, 48.5±7.2 years) patients with the consent of them. We analyzed the cell morphology and the cell surface markers of the MSCs. In addition, we assessed the cell senescence with serial cultures from both age groups. Cell pluripotentiality was analyzed by osteogenic, chondrogenic, and adipogenic induction media. We performed RT-PCR, a measurement of expression of alkaline phosphatase, and staining with von Kossa, safranin O, and oil red O stain. Results: All of the MSC samples tested, irrespective of the age of the donors, MSCs were all successfully isolated from twenty bone marrows. However, the number of cells of from the young donors was five times greater than that of the elderly donors. Senescence was observed over 10 passages in both age groups. The immunophenotypes of both age groups showed similar patterns. MSCs obtained from young and older donors showed the potential to differentiate into osteogenic, chondrogenic, and adipogenic lineages with no difference for both age groups. Conclusion: Our study supports that age does not influence the pluripotential capacity of human BM derived MSCs.
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정미현(Mee Hyun Jung),양성은(Sung-Eun Yang),진혜진(Hae Jin Jin),이만경(Man Kyoung Lee),송호선(Ho Sun Song),양정윤(Jung Yoon Yang),양윤선(Yoon Sun Yang),하철원(Chul-Won Ha) 대한정형외과학회 2004 대한정형외과학회지 Vol.39 No.6
목적: 인간 제대혈로부터 간엽성 섬유세포양 세포를 분리, 배양함으로써 제대혈 내의 순환성 간엽줄기세포의 존재여부를 확인하고, 이의 연골세포 분화능을 증명하고자 하였다. 대상 및 방법: 총 50 유니트의 제대혈로부터 분리된 유착성 세포군의 세포형태 및 면역표현형을 분석하였다. BMP-6을 첨가하였거나 또는 첨가하지 않은 연골분화배양액을 이용하여 펠렛 배양의 형태로 연골분화를 유도 배양하였다. 연골세포로의 분화를 관찰하기 위해 역전사 중합효소연쇄반응을 수행하였으며, Safranin-O 염색과 제2형 콜라겐에 관한 면역염색을 시행하였다. 결과: 제대혈 단핵세포로부터 균질성의 섬유세포양 형태의 유착성 세포군이 배양되었다. 이 세포군은 간엽줄기세포 관련 항원 양성, 조혈모세포항원 음성, 조직적합항원 음성, 내피세포 및 파골세포 관련 항원 음성이었다. 연골분화 펠렛 배양 시 BMP-6을 첨가한 군에서 펠렛의 크기 및 연골세포관련 인자의 발현이 증가하였고, Safranin-O 염색과 제2형 콜라겐의 면역염색도 강양성이었다. 결론: 제대혈 내에 순환성 비조혈성 연골형성 간엽줄기세포가 존재함을 확인하였고, 연골분화 배지에 BMP-6을 첨가함으로써 제대혈 유래 비조혈성 간엽줄기세포의 시험관 내 연골분화의 효율을 향상시킬 수 있었다. Purpose: The aim of this study was to demonstrate the existence of circulating mesenchymal stem cells (MSC) in the human umbilical cord blood (hUCB) and to evaluate the chondrogenic differentiation potential of hUCB-derived MSC in vitro. Materials and Methods: Fifty hUCB harvests were cultured in media supplemented with 10% fetal bovine serum. The adherent fibroblast-like cells were characterized by immunophenotyping and induced to differentiate into chondrocytes in the pellet culture with and without BMP-6. This study performed RTPCR of the chondrogenic markers, Safranin-O stain and type Ⅱ collagen immunohistochemical stain. Results: The mononuclear cells isolated from hUCB formed adherent colonies with an attached well-spread fibroblast-like morphology. The cells positively expressed the MSC-related antigens, but did not express the hematopoietic, HLA-DR, endothelial, or osteoclast antigens and could be induced to differentiate into chondrocytes under proper stimulation. BMP-6 increased the size of the pellet and the mRNA levels for aggrecan, type Ⅱ collagen and type Ⅸ collagen and enhanced the levels of proteoglycan synthesis during chondrogenic differentiation. Conclusion: The homogenous fibroblast-like cells developed in cultures from hUCB with chondrogenic differentiation potential were considered to be MSC. Furthermore, it was found that BMP-6 enhanced chondrogenic differentiation of the hUCB-derived MSC in the pellet culture.
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