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      • RAW264.7 세포주에서 산양삼 추출물의 항염증 효과

        나귀환,김우기 한국산업식품공학회 2017 학술대회 및 심포지엄 Vol.2017 No.04

        7년 이상 장기간 배양으로 인한 고가의 산양삼은 항염증에 효과가 있다고 잘 알려져 있다. 하지만, 재배기간에 따른 항염증능의 비교 연구는 부족한 실정이다. 본 연구는, 3년, 5년, 7년 근령의 산양삼 추출물을 이용하여 RAW264.7 대식세포의 염증반응 모델에서의 항염증능을 비교분석하였다. 이를 위하여, 염증성 싸이토카인 (IL-6, TNF-α)의 분비, 표면 단백질(CD80, CD86, MHC-Ⅱ)의 발현 및 대식능을 분석하였다. 각 근령의 산양삼 추출물을 0.1, 1, 10ppm 농도로 RAW26.47 세포주에 처리한 후, LPS로 염증반응을 유도하였을 때, IL-6와TNF-α의 분비량이 모든 근령군에서 농도의 존적으로 감소함을 보였다. 하지만, 일반적으로 근령이 클수록 싸이토카인 분비 억제 효과가 높은 것으로 확인 되었다. 대식세포의 활성화마커인 표면 단백질의 발현양도 모든 실험군에서 농도의존적으로 감소 하는 경향을 나타내었다. 구체적으로는, CD80과 CD86의 발현은 3년삼, 5년삼, 7년삼의 10ppm에서 무처리 대조군과 비교하여 유의적으로 감소하였고, 근령간의 차이는 보이지 않았다. MHC-Ⅱ의 발현은 일정한 경향은 나타나지 않았고 3, 7년삼의 10ppm처리군에서 감소하였다. 대식능은 3년삼의 10ppm을 제외하고는 유의적 차이를 보이지 않았다. 이러한 결과는 산양삼 근령에 증가에 따라 항염증능이 증가하지만, 대식능에는 영향을 미치지 않는 것으로 평가되며 동물실험을 통하여 확증할 예정이다.

      • KCI등재

        RAW264.7 대식세포주에서 근령별 산양삼 추출물의 항염증 효과

        이근,나귀환,김우기,백무열,이형재,황재관 한국산업식품공학회 2017 산업 식품공학 Vol.21 No.3

        It is well-known that cultivated wild Panax ginseng has anti-inflammatory effect. However, a comparative study on cultivation period vs biofunctionality is currently lacking. In this study, 70% ethanol extracts of 3-years (yrs)-, 5-yrs-, or 7-yrs-old cultivated wild ginseng were evaluated for their inhibitory effects on RAW264.7 murine macrophages. Specifically, the production of pro-inflammatory cytokines (interleukin-6 [IL-6] and tumor necrosis factor-alpha [TNF-α]), the expression of surface proteins (CD80, CD86, and MHC-II), and the phagocytic properties were investigated. RAW264.7 cells were induced by 500 ng/mL of lipopolysaccharide (LPS) and treated with 0.1, 1, and 10 ppm of samples. LPS-induced IL-6, TNF-α and surface proteins in all samples were downregulated in a dose-dependent manner. Both IL-6 and TNF-α were significantly reduced at 10 ppm of the 7-yrsold sample compared to 10 ppm of 3-yrs- and 5-yrs-old samples. CD80 and CD86 were also reduced at 10 ppm of all samples, and there was no difference among samples. The phagocytosis has no difference except in 10 ppm of 3 yr-old sample. The results suggest that cultivated wild ginseng extract has anti-inflammatory effect without decreasing phagocytosis.

      • SCOPUSKCI등재

        Primary Culture 한 소 모양체근 세포에서의 PLC/IP₃ 및 cAMP/PKA 경로를 통한 차즈기 열수 추출물의 수축 조절 효과

        송광호(Kwangho Song),구연경(Yean Kyoung Koo),정현묵(Hyun Mook Jung),임예지(Yeji Lim),나귀환(Guihwan Na),김영식(Yeong Shik Kim) 한국식품영양과학회 2019 한국식품영양과학회지 Vol.48 No.8

        GPCR을 통한 모양체근의 조절은 PLC/IP₃ 경로와 cAMP/PKA 경로를 통해 발생한다. 이 두 경로 모두 세포 내액의 Ca<SUP>2+</SUP> 이온 농도를 증가시켜 calmodulin의 활성화를 통해 근육을 수축시키게 되는데 수축을 억제하여 원상 복귀시키기 위해서는 세포 내액의 Ca<SUP>2+</SUP> 이온 농도를 감소시켜 조절할 수가 있다. 또 다른 조절기전으로서는 cAMP/PKA 경로를 통한 MLCK 활성화를 거쳐 모양체근을 수축시키는 방식이다. 차즈기 열수 추출물은 cyclopentolate hydrochloride를 처리하여 근육의 수축을 억제시킨 primary cultured모양체근 세포에서 GPCR에 리간드로서 성공적으로 결합하여 PLC/IP₃ 경로와 cAMP/PKA 경로 모두를 활성화시킬 수 있다는 것을 확인하였다. 이렇게 활성화된 신호전달체계는 calmodulin과 MLCK를 활성화하여 cyclopentolate hydrochloride에 의해 마비되거나 수축 적응이 억제된 모양체근을 수축시킨다는 점을 확인하였다. 하지만 모양체근과 같은 평활근의 경우 troponin 단백질의 부재로 Ca<SUP>2+</SUP>을 통한 조절보다는 MLCK 활성화를 통한 조절기전이 주를 이루고 있다는 점을 감안할 때 차즈기 열수 추출물은 GPCR을 거쳐 cAMP/PKA 활성화를 통해 순차적으로 MLCK의 인산화를 유도함으로써 모양체근을 조절하는 것으로 생각된다. We investigated the regulatory effects of a hot water extract of Perilla frutescens var. acuta (PF) on the contraction of primary cultured bovine ciliary muscle cells via the PLC/IP₃ and cAMP/PKA pathways. In this study, we treated cyclopentolate hydrochloride (10 μM) on the cells to inhibit ciliary muscle contraction and then we treated these cells with PF (50 or 200 μg/mL) to restore the accommodation process of these the cells. Intracellular levels of IP₃, Ca<SUP>2+</SUP> and cAMP were measured by ELISA. For determining the mode of action in the signaling pathways, the protein expressions of IP3, CaM, MLCK and PKA were measured by performing western blotting. As a result, PF increased the intracellular level of Ca<SUP>2+</SUP> and CaM, promoted by IP₃ activation, indicating that certain components of PF bind to the G-protein coupled receptor (GPCR) and so activate the PLC/IP₃ signaling pathway. On the other hand, the PF elevated the intracellular levels of cAMP and PKA, and this resulted in the activation of MLCK to regulate ciliary muscle contraction. These results suggested that PF has an ability to regulate ciliary muscle contraction via both the PLC/IP₃ and cAMP/PKA signaling pathways in cyclopentolate hydrochloride-treated primary cultured ciliary muscle cells. However, due to characteristics of ciliary smooth muscle, this study carefully suggests that PF is more favorable to the cAMP/PKA pathway rather than the PLC/IP₃ pathway in contraction or restoring the accommodation process via further activation of MLCK.

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