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재조합 Adeno-associated Virus 제작과 효율적 신조적 감염
최순연,박종구 啓明大學校 醫科大學 2001 계명의대학술지 Vol.20 No.2
본 실험에서는 신질환 질병모델의 in vivo 실험을 위해서 IL-10과 대조군으로 LacZ 유전자를 가진 재조합 AAV를 생산하였다. 또한, 신조직에서 유전자 운반 매개체로서의 재조합 AAV의 타당성을 확인하였다. 생산된 재조합 바이러스는, in vitro상에서 바이러스의 감염성과 유전자 발현 능력을 평가하였다. In vitro 실험에서 평가된 재조합 바이러스는 in vivo 실험에 사용되었다. 재조합 AAV를 8 주령 된 ICR 생쥐 왼쪽 신장의 실질조직으로 직접 주입한 후, 마취사 시켜 절취한 신장을 X-gal용액으로 염색하였다. 그 결과, 신장은 β-galactosidase 유전자 발현을 일개월간 관찰할 수 있었다. 또한, 광학현미경상에서 해부학적으로 조직의 염색된 부위를 관찰한 결과는 다음과 같았다. 주로 β-galactosidase 유전자로 형질 도입된 신조직은 세뇨관 상피세포와 보우만 주머니의 상피세포주위에 편중되어 나타났으나, 사구체, 모세혈관, 간질에서 단백질의 발현은 관찰할 수 없었다. 이러한 결과는 재조합 AAV가 신조직의 유전자 도입 매개체로서 이용 가능하며, 사이토카인 IL-10을 이용한 신질환치료에 효과적일 것이라 기대된다. Recombinant viral vectors based on the nonpathogenic parvovirus, adeno-associated virus (AAV), have a number of attractive features for the purpose of gene theraphy including the lack of cytotoxicity, the ability to transduce non-dividing cells and its long-term transgene expression. In this study, we studied if recombinant AAV (rAAV-LacZ and rAAV-hIL10) vectors could efficiently transduce cells both in vivo and in vitro. We initially examined AAV-mediated gene transfer in HeLaRC32 cells in vitro. Expression of transgenes in rAAV was evaluated by RT-PCR (rAAV-hIL10) and X-gal staining. We then studied if rAAV was effective in transducing renal tissue by direct injection of rAAV harboring the β-galactosidase gene (1× 10 exp (10)) physical particles/injected kidney) into the left kidney of mice. To assess gene transfer, the transduced renal tissue of mice was stained with X-gal. Based on visual assessment of X-gal staining, The expression of the β-galactosidase gene was mainly localized in tubular epithelial cells and Bowman's capsular epithelial cells. The expression of the β- galactosidase gene in the renal tissue was detected for more than one month after the transduction of rAAV. These results suggest that rAAV vectors can be effective for transgene expression in the renal tissue.
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