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일반 배양액과 Vero cell 공배양에서의 생쥐 배아 발달에 관한 비교 연구
이유성(You Sung Lee),이창호(Chang Ho Lee),고희정(Hee Jung Go),이기숙(Ky Suk Lee),류철희(Chul Hee Rheu),김종덕(Jong Duk Kim) 대한산부인과학회 2002 Obstetrics & Gynecology Science Vol.45 No.6
목적 : 인간 체외수정에 적용하는 공배양 기법에 사용할 세포로 vero cell을 택하여 vero cell monolayers 상에서 생쥐배아를 공배양한 것과 일반배양액인 IVF-20 배양액에서만 생쥐배아를 배양하여 두군의 배아양상에서 배아 발달을 비교하여 그 차이를 밝혀보고자 하였다. 방법 : 생쥐 암컷의 난포성장을 촉진시키기 위해 6~8주 된 흰 생쥐 암컷에 PMSG 5 IU를 복강주사 한 후 48시간 후에 hCG 5 IU를 다시 복강 주사하여 암수를 합사시켰으며, 교미가 일어난 암컷으로부터 난관을 무균적으로 절취하여 배아를 채취하였고, 난할이 일어난 정상적이고 건강한 2세포기 배아만을 각 실험에 사용하였다. 생쥐 2세포기 배아를 일반 배양액인 IVF-20에서만 배양하여 보고, 또한 vero cell과 공배양하여 각각의 발달 정도를 조사하였다. 결과 : 1. 배양 초기인 48시간까지는 일반배양액인 IVF-20에서만 배양한 것이 배아발달율이 높아 4세포기 (4 cell)까지는 IVF-20에서 67.0%, 상실배 (moula)까지는 55.7% (p<0.05)의 발달율을 보였으나, vero cell 공배양에서 는 4세포기까지 47.6%, 상실배까지는 42.9%의 발달율만을 보였다. 2. 배양중기인 72시간에는 IVF-20 배양액에서 배양하였을 때에는 배반포 (blastocyst)와 확장된 배반포 (expanded blastocyst)까지 51.6% (p<0.01)의 발달을 보였으며, vero cell과 공배양하였을 때에는 25.9%의 발달을 보였다. 3. 배양후기에 들어서면서 배양 96시간에는 확장된 배반포와 부화까지 IVF-20에서 배양하였을 때에는 37.7%의 발달을 보였고, vero cell과 공배양하였을 때에는 32.6%의 발달을 보여 두군 사이에 비슷한 발달율을 보였다. 4. 배양 120시간에는 확장된 배반포와 부화까지 IVF-20에서는 36.9%, vero cell과 공배양 했을때는 37.4%를 보여 비슷한 발달을 보였다. 결론 : 배양 초기에는 vero cell 공배양에서 보다 일반 배양액인 IVF-20에서 더 빠른 그리고 더 좋은 발달율을 보이며, 배양후기에 들어 확장된 배반포와 부화까지 발달하는 율은 IVF-20에서와 vero cell 공배양에서 비슷한 배아 발달율을 보임을 알 수 있었다. Objective : To evaluate mouse embryos development in conventional medium IVF-20 versus vero cell coculture. Methods : Female ICR mice aged 6 to 8 weeks, were stimulated with 5IU PMSG and 48 hours later were injected 5IU of hCG, then female and male mice were mated. At 48 hour post-hCG injection, oviducts were dissected out and 2-cell embryos were flushed. The 2-cell embryos were cultured in IVF-20 media or media containing vero cell (African green monkey kidney epithelial cell lines) for 120 hours. Coculture techniques have been applied in mouse 2-cell embryos culture used vero cell lines. Results : 1. After 48 hours culture, 60.7% and 55.7% of 2 cell embryos developed to 4 cell and morulae stage, respectively, in IVF-20 culture medium, but significantly less embryos developed to 4 cell (47.6%, p<0.05) and momlae (42.9%, p<0.05) in vero cell coculture. 2. After 72 hours culture, 51.6% of 2 cell embryos developed to blastocyst and expanded blastocyst in IVF-20 culture medium, but significantly less embryos developed to blastocyst and expanded blastocyst (25.9%, p<0.01) in vero cell coculture. 3. After 96 hours culture, 37.7% and 32.6% of 2 cell embryos similar developed to expanded blastocyst and hatching in IVF-20 culture medium and vero cell coculture, respectively. 4. After 120 hours culture, 36.9% and 37.4% of 2 cell embryos similar developed to expanded blastocyst and hatching in IVF-20 culture medium and vero cell coculture, respectively. Conclusion : There was no difference of embryo development rates between the two culture groups. IVF-20 medium alone gives a benefit to the viability of an embryo compared with a vero cell coculture.
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