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NaCl-dependent Amylase Gene From Bacillus circulans F-2 : Its Nucleotide Sequence
Kim, Cheorl Ho,Kwon, Suk Tae,Lee, Dae Sil,Taniguchi, Hajime,Maruyama, Yoshiharu 한국산업미생물학회 1990 한국미생물·생명공학회지 Vol.18 No.3
Bacillus circulans F-2의 생산하는 NaCl 의존성 amylase(NaCl-dependent amylase) 유전자를 함유하는 1795bp의 DNA 염기배열을 결정하였다. 본 유전자의 ORF는 총염기수 1005bp(335 아미노산)로 구성되며, 분자량 38,006의 amylase 단백질을 code 하였다. 이는 공여균의 분비 amylase의 분자량 약 35,000과 일치하였다. 본 유전자의 상류영역(upstream region)에는 고초균(Bacillus subtiis)의 전형적인 전사발현영역(transcriptional region)과 상보적인 DNA 영역이 존재하였다. 성숙단백질의 N-말단측 아미노산 배열은 Ala-Ser-Lys-Val-Gly이며, 분비에 필요한 20개의 signal 아미노산 배열을 갖는 전형적인 분비 단백질임이 확인 되었다. 한편 다른 amylase들과의 비교결과, smylase 활성발현과 밀접히 관련되 있는 4개 부위의 상보성영역(homologous region)을 가지고 있었다. The sequence of a 1795 bp restriction fragment containing the B. circulans F-2 gene for NaCl-dependent α-amylase(Cl-amylase) is reported. The probable coding region of the gene is 1005 base pairs(335 amino acids) long. The NaCl-dependent α-amylase(cl-amy) sequence shows an open reading frame(ORF) with the translated molecular weight of about 38,006, which correspond to a molecular weight of about 35,000(Mr). The gene is preceded by the sequence resembling promoter for the vegetative B. subtilis RNA polymerases. These are followed by the sequences resembling a B. subtilis ribosome binding site 5 nucleotides before the first codon of the gene. Homologous regions with other amylases were found. The N-terminal sequences of the mature proteins expressed in E. coli were identical to the N-terminal sequences which are analysed.