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양파의 성숙배 배양을 통한 체세포배발생 캘러스 유기 및 식물체 재분화
조광수,허은주,홍수영,문지영,Cho Kwang-Soo,Hur Eun-Joo,Hong Su-Young,Moon Ji-Young 한국식물생명공학회 2005 식물생명공학회지 Vol.32 No.1
양파의 재분화 체계 확립을 위해 성숙된 양파의 종자로부터 성숙배를 적출한 후 2,4-D와 BA의 다양한 농도를 이용하여 체세포배발생 캘러스의 형성율을 조사하였다. 체세포 배발생 캘러스는 쉽게 부서지는 특성을 가지고 있었으며 비체세포배발생 캘러스는 물기를 많이 포함하고 있어 쉽게 구분이 가능하였다. 체세포배발생 캘러스는 picloram $2.5\;\cal{mg/L}$ 또는 $5\;\cal{mg/L}$가 단독으로 포함된 MS배지를 이용하여 $25^{\circ}C$ 암배양 4주 후 가장 높은 유도율을 나타내었다. 그러나 유도된 캘러스를 shoot로 재분화 시킨 결과 2,4-D와 BA $1\;\cal{mg/L}$가 혼합된 처리구에서 가장 높은 shoot 유기율을 나타내었다. 따라서 다른 처리에서 유도된 캘러스를 2,4-D와 BA $1\;\cal{mg/L}$가 포함된 액체배지에 현탁배양을 시도하였다. 현탁배양은 캘러스의 증가뿐만 아니라 캘러스의 cell cycle을 synchronized 함으로서 이후 형질전환이 용이할 것으로 판단되었다. 현탁 배양된 캘러스는 Kinetin $1\;\cal{mg/L}$가 포함된 1/2 MS 배지에서 60일간 광배양 하여 shoot 유기하였으며 유도된 shoot는 NAA $0.5\;\cal{mg/L}$가 포함된 발근배지에서 발근 후 순화하여 완전한 식물체로 재생할 수 있었다. To obtain regeneration system of onion, we analyzed the effects of 2,4-D and BA concentration on the embryogenic callus induction from mature embryos. The highest embryogenic callus induction ratio was shown on MS medium (Murashie and Skoog 1962) containing $2.5\;\cal{mg/L}\;or\;5\;\cal{mg/L}$ picloram after mature embryos were placed on medium. When induced callus were cultured on half strength of MS medium containing $1\;\cal{mg/L}$ Kinetin, the highest shoot formation ratio was observed on MS medium containing $1\;{mg/L}$ 2,4-D and $1\;{mg/L}$ BA. Embryogenic callus were cultured in MS liquid medium containing $1\;\ccal{mg/L}$ of 2,4-D and $1\;\cal{mg/L}$ BA. The suspension cultured cell clumps could be mass propagated. Embryogenic callus were friable, but non-embryogenic callus included a lot of moisture, hence the identification between embryogenic and non-embryogenic callus as easily achieved. When embryogenic callus as cultured on half strength of MS medium containing $1\;\cal{mg/L}$ Kinetin, shoots were induced. The whole plantlet was obtained on rooting medium containing $0.5\;\cal{mg/}$ of NAA.
DgLsL anti-sense partial 유전자 도입에 의한 국화 ‘Zinba’ 품종의 조기개화 개체 선발
한봉희(Bong-Hee Han),이수영(Su-Young Lee),허은주(Eun-Joo Hur) 한국원예학회 2008 한국원예학회 학술발표요지 Vol.2008 No.12
DgLsL anti-sense partial 유전자를 국화 ‘Zinba’에 형질전환하였다. DgLsL anti-sense partial 유전자는 pCAMBIA2300을 포함하는 Agrobacterium C58C1을 통하여 도입하였다. Agrobacterium C58C1을 접종한 후 엽절편을 10㎎/L kanamycin이 함유된 재분화 배지(MS + 1.0㎎?L<SUP>-1</SUP> BA + 0.5㎎?L<SUP>-1</SUP> IAA)에서 1차 선발을 하였고, 재분화 배지에 20㎎?L<SUP>-1</SUP> kanamycin이 첨가된 배지에서 2차 선발을 하였으며, 20㎎?L<SUP>-1</SUP> kanamycin이 첨가된 MS 배지에서 3차 발근선발을 하였다. 3차 발근선발까지 220개의 신초(3.6%)가 생존하여 발근하였다. Npt Ⅱ primer로 PCR을 한 결과 그 중 101개의 신초(1.6%)가 putative transformant로 확인되었고, Southern 분석을 한 결과, 86개체(1.5%)가 npt Ⅱ 유전자와 DgLsL anti-sense partial 유전자가 도입된 형질전환체로 확인되었다. DgLsL anti-sense partial 유전자의 형질전환율은 1.5%로 매우 양호하였다. DgLsL partial anti-sense 유전자가 도입된 형질전환체를 순화하여 7월 19일에 온실에 정식하여 자연상태에서 측지발생 및 개화 등을 조사하였다. 그러나 DgLsL anti-sense partial 유전자가 도입된 모든 형질전환체에서 측지가 발생하였으며, 형질전환체 LS2, LS9, LS10 3계통은 비형질전환체(대조구)보다는 조기개화하는 특성을 보였다. The DgLsL anti-sense partial gene (526 bp) was introduced into chrysanthemum (Dendranthema grandiflorum Kitamura) ‘Zinba’ by co-cultivation with Agrobacterium tumefaciens strain C58C1 (pCAMBIA2300). After infection of leaf segments with A. tumafaciens, infected explants were cultured on a regeneration medium ((RM: MS basal salts + 1.0 ㎎?L<SUP>-1</SUP> BA + 0.5 ㎎?L<SUP>-1</SUP> IAA + 10 ㎎?L<SUP>-1</SUP> kanamycin, pH 5.8) with 0.7% plant agar (Duchefa, The Netherlands)) as the first selection medium, and then were transferred to the second selection medium containing 20 ㎎?L<SUP>-1</SUP> kanamycin. After a selection process in the selection RM, putatively-transformed explants were placed on a rooting medium (MS basal salts + 20 ㎎?L<SUP>-1</SUP> kanamycin) as the third selection. Until the third selection, 220 plantlets (3.6%) of total inoculated explants (6,740 explants) survived and rooted. Also, 101 plantlets (1.6%) among them were confirmed as putative transformants with the nptII gene by PCR analysis. Using Southern blot analysis, 86 (1.5%) out of 101 plantlets were confirmed as transformants with the nptII gene and the DgLsL anti-sense partial gene. The transformation efficiency of DgLsL anti-sense partial gene was 1.5%. All transformants with DgLsL anti-sense partial gene and non-transformants were acclimatized and established well in a greenhouse. Lateral branches were observed in both transformants and non-gene transformed chrysanthemums. However, three transformed lines (LS2, LS9, and LS10) with a DgLsL partial anti-sense gene showed early flowering.
허은주 昌原大學校 基礎科學硏究所 1998 基礎科學硏究所論文集 Vol.10 No.-
Interest in seeking biologically active compounds has prompted increased studies in isochroman derivatives. these bicyclic derivatives can be used interchangeably iological activity we are synthesizing isochroman through α-haloboronic ester snthetic approach